Штамм вируса гепатита а для приготовления диагностических препаратов

25 3160653лаборатории музейных штаммов Института вирусологии им. Д,И.ИвановскогоАМН СССР (кодовый номер ГКВ),Штамм охарактеризован по следующимсвойствам: вирусологическим, морфологическим, физико-жмическим, серологическим и молекулярнобиологическимПри адаптации штамма МИ от больного ГА используют клеточные линииРЕЫ, РАМ, ПЧ, РЬС(РВЕ)5,Стабильной продукции ВГА данногоштамма (МИи его термовариантМИ,1) удается добиться в клеточной линии РЬС(РВУ)5 (гепатокарцинома человека) при 32 и 37 ОС (табл,1),Содержание инфекционного материалаштамма МИв культуре на четвертомпассаже составляет 104 ИЕ/мл, на пятом пассаже 1 О ИЕ/мл, на шестомпассаже 10 ИЕ/мл.Физико-химические свойства. Прискоростном ультрацентрифугированиив 10-30%-ном сахарозном градиентеу штамма МИи его термовариантеМИ,1 отмечают 2 пика антигенногоматериала (ИФА);1-й (8-15 Фракции)быстрее седиментирующий, соответствует полноценным вирусным частицам (1508) и 2-ой (16-18 фракции)дефектным вирусным частицам без нуклеиновых кислот - 908(12),В СзС 1 градиенте плавучая плотность полноценного вируса соответствует плотности1,33 г/смз.Морфологические признаки. Принегативном контрастировании диаметрочищенных вирусных частиц рекомендуемого штамма колеблется в пределах 27-28 нм. Частицы построены потяпу кубической симметрии, имеютсходство с мелкими РНК-содержащямивирусами и не отличаются от прототипного зарубежного штамма МВВ 11/5. 45Белковый электрофорез.При электрофорезе вирусных белковштамма видны 3 структурных белкаЧР, ЧР, ЧР-З.Изобретение иллюстрируется следующими примерами.П р и м е р 1. Использованиештамма МИв ИФА для выявления 1 дМантител к ВГА в сыворотках больныхГА. 55Схема постановки реакции. Анти ч (антитела к 11 М антителам человека) адсорбируют на подложку 96-луночной плашки, Далее в лунки нано 34сят исследуемую сыворотку (разведение 1:1000), 1 дМ антитела человекаиммунологически связывают с анти-ц,Далее в лунки наносят АГ ВГА, который иммунологически связывается с1 ф 1 антител больных ГА. Далее в лунки вносят коньюгат (ЕдС антител кВГА, меченные пероксидазой) . Реакция проявляется субстратом ортофенилендиамином,Сравнительный анализ на выявляемость 1 ф( к ВГА в сыворотках больных ГА с помощью АГ ВГА от рекомендуемого штамма МИи штамма МВВ 11/5на 220 положительных сыворотках (1 рМк ВГА) в 927. случаев (202 сыворотки)показал одинаковый результат. 111 таммом МИвыявляют 1 М в,213 сыворотках (977), а прототипным штаммомМВВ 11/5 - 209 сыворотках (95%), Расхождение в резул,татах анализов составляет 3-5 Е.Гибридизационный анализ.Для доказательства родства штаммаМИк.вирусам гепатита А гибридязационным анализом используют 32Р-кДНК-ВГА из банка последовательностей штамма МВВ 11/5(ФРГ,1. Все32 Р-кДНК-ВГА последовательностигибридизуют с вирусной РНК штаммаМИв зараженных клетках и не гибридизуются с нуклеиновыми кислотамине зараженных клеток.Гибридизационные данные подтверждают принадлежность к вирусам гепатита А штамма МИ, В то же времяналичие биологических отличий (спектрразмножения штамма МИв культурахклеток) от известных штаммов гред 1полагает отличие и в первичной последовательности, что и обуславливаетуникальность рекомендуемого штамма,П р и м е р 2, Продукция вирусагепатита А штамма МИв перевиваемойклеточной линии РЬС(РКР)5,В опытах по синтезу вирусной РНК(точечная гибридизация) и белков собразованием антигена ВГА (ИФА) видно, что максимум синтеза в РНК и об;разование антигена достигает максимума для штамма МИк 3-7 дню послезаражения, а для известного штаммаЖк 7-14 дню,Урожай штамма с 1 л культурально-го матраса аа 3 недели роста послезаражения составляет 1000-2000 доз.П р и м е р 3. Сравнительнаяхарактеристика штамма МИи его1606533 термоварианта МИ,1 по репродукции в клеточных линиях с известнымиштаммами из различных регионов мира(табл,2). При проведении сравнительного анализа продукции ВГА в различных клеточных линиях штамма с известными виден характерный спектр размножения штамма МИи его термоварианШтамм вируса гепатита А ГКВ Р 801для приготовления диагностическихпрепаратов.,Т а блица 1Адаптация и репродукция штамма МИ в различныхклеточных линиях (по АГ ВГА в ИФА) Вариантштамма Пассаж, У 2 3 1 4 Температура, С Клетки Г5 37 37 37 37 32 2,0 2,0 25 6,0 3,4 2,0 3,6 3,5 3,2 3,8 РКЬК РАМТЛЭЧ Р 1.С (РКР) 5Рт.с (РКР) 5 2,0 11,0 11,0 11,0 11,0 МИ,1МИ11,0 11,0 Таблица 2 Сравнительная характеристика штамма МИи его термоварианта МИ,1 по продукции АГ ВГА в клеточных линиях с известными штаммами ВГА из различных регионов мира(страна) РЕС(РКР)5 ЛЭЧРКЬКМК У Штамм 55 не де нед еЗаказ 3528 Тираж 482 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 1 НАЯ2 СР3 1 Н4 ЪЖ5 КМЮ6 СВМ 7 Н8 МВВ 11/5 . СШАСШАГДРГДР1 ПвейцарияФРГИндияСевернаяАфрикаСССРСССР 37 37 37 37 32 32 32 32 та МИ,1 в клеточных линиях(Р 1,С (РКР) 5 и МК) .По спектру размножения в клеточ 5ных линиях штамма МИи его термосвариант отличается от известных,Формула и э о б р е т е н и я