Способ диагностики атеросклероза

СКИ союз совСОЦИАЛИРЕСПУБЛ их 1 А 1 5 19)(д 1) 4 О 01 И 33 О ЕНИЯ НИ му Я /диагностики ожет на тыхсив -и диагностике болеваний, в рдечно-сосудитности прогр ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬПИЯПРИ ГКНТ СССР(1) Научно в исследовательск институт экспериментальной медициныАН СССР и 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад, И,П, Павлова(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТЕРОСКЛЕРОзобретение относится к медиц именно к иммунологическим м Изобретение относится к медицине, а именноиммунологическим способам диагностики, и может найти применени ных форм атеросклероза.Цель изобретения - повышение точности способа.Способ осуществляется следующим образом,10 мл венозной крови пациента делят на две части. Из первой получают лейкоциты обычным способом, иэ второй - липопротеиды преципитационным способом - осаждением гепарином в присутствии солей кальция, Дпя этого к 1 мл плазмы крови прибавляменение при диагностике сердечно-сосудистых заболеваний, в частностипрогрессивного течения атеросклероза, Цель изобретения - повышение точности способа, Производят забор крови от больного, разделяют ее на двепорции. Из одной порции получаютаутологичные липопротеиды путем осаждения белков сыворотки в присутствиихлористого кальция, а из другой порции выделяя;т лейкоциты, затем ставятреакцию ингибиции миграции лейкоцитов в присутствии липопротеидов ипри увеличении процесса мигрирующихклеток не более чем на 30% по сравнению с пробой без липопротеидов диагностируют прогрессирующую формуатеросклероза. По сравнению с прототипом отмечается повышение точностидиагностики на 30%. ют 10 мп дистиллированной воды,МааО,5 мл 2 М раствора кальция хлорис- О 1того (СаС 1) и 0,08 мл гепарина Ю(5000 ед,/мл), Затем эту смесь цент- Я)рифугируют при 3000 об,/мин при 4 С ьв течение 1 ч, Образовавшийся оса- Ядок растворяют в 2 мл 5%-ного раст- вайвора натрия хлористого и разбавляютв 20-50 раэ физиологическим раствором хлористого натрия для полученияраствора липопротеидов с концентрацией 10-150 мкг/мл, Затем в 2 лунки,проделанные в слое (3-4 мм) агарозы,вносят 0,1 мл взвеси лейкоцитов вфизиологическом растворе. После этого в одну лунку добавляют 0,1 мл физиологического раствора (контроль), 1529121а в другую - 0,1 мл раствора липопротеидов в концентрации 10-50 мкг/мл.Полученную систему инкубируют при37 С во влажной атмосфере с 2 , СОв течение 8 ч.5Величину пробега лейкоцитов (зону миграции)в обеих лунках определяют под микроскопом. При уменьшениимиграции лейкоцитов во второй лункепо сравнению с контролем на 30 иболее судят о наличии аутосенсибилиэации и тем самым о прогрессирующемхарактере атеросклеротического процесса. 15П р и м е р 1. Больной И.,51 год.Поступил в клинику 25.03.86. Клинический диагноз: ишемическая болезньсердца (ИБС), Атеросклероз коронарных артерий. Нестабильная стенокардия, прогрессирующая стенокардия напряжения, 111-й функциональный класс,повторные приступы острой коронарнойнедостаточности. Атеросклеротическийи постинфарктный кардиосклероз (острый инфаркт миокарда в 1983 г.),14 апреля 1986 г. у больного иэвены берут 10 мл крови для реакцииингибиции миграции лейкоцитов (РИМЛ).Из 5 мл получают лейкоциты, иэ других 5 мл - липопротеиды,К 1 мл плазмы крови прибавляют10 мл дистиллированной воды, 0,25 мл2 М раствора СаС и 0,08 мл гепарина (5000 ед./мл). Смесь тщательно перемешивают и помещают в холодильник35при 4 С на 1 ч. После этого смесьОцентрифугируют при 3000 об./мин втечение часа. Надосадочную жидкостьотбрасывают, а осадок растворяют в2 мл 5 -ного раствора хлористогонатрияПолучившийся раствор разбавляют в 50 раэ физиологическим раствором, Тем самым концентрацию липопротеидов доводят до 10 мкг/мл. Концентрацию белка определяют по Лоури.К 100 мг порошка агароэы (Б 1 дша)приливают 8 мл би-дистиллированнойводы, и смесь помещают в водянуюбаню до полного растворения агарозы.50В растворенную теплую агароэу вливают 1,5 мл физиологического раствора; 4,25 мл дистиллированной воды,1,5 мп человеческой сыворотки;0,3 мл бикарбоната натрия и 0,02 млраствора пенициллина, содержащего25000 ед. в 1 мл,Всю смесь тут же разливают помикрочашкам Петри, по 3 мл в каждую чашку, После застывания (примерночерез 20 мин) в агарозе пробиваютстандартным пробойником лунки (3 ммв диаметре)Взвесь лейкоцитов получают путемлиэиса эритроцитов хлористым аммонием. К взвеси лейкоцитов приливают0,85 .-ный раствор хлористого аммония, и смесь трижды центрифугируютпри 3000 об./мин по 7 мин. Полученный осадок клеток ресуспендируют путем добавления 0,4 мл физиологического раствора.В 2 лунки чашки Петри вносят по0,1 мл взвеси лейкоцитов затем впервую добавляют 0,1 мл физиологического раствора (контроль) во вторую -0,1 мл аутолипопротеидов. Чашки инокубируют при 37 С во влажной атмосфере с 2 СО в течение 8 ч.Под микроскопом (увеличение в200) с помощью окуляр-микрометрав обеих лунках измеряют величины пробега лейкоцитов, В первой - 15 усл.ед а во второй - 9,3 усл,ед., т.е.наблюдаемое сокращение пробега вовторой лунке составило 62 ,.18 апреля 1986 г. больной скончался от острой сердечно-сосудистойнедостаточности, которой предшествовал затяжной приступ спонтанной стенокардии,При патологоанатомическом исследовании коронарных артерий и аорты отмечено прогрессирующее развитие атеросклеротических поражений, поскольку наряду с фиброзными бляшками видно образование свежих липидных пятен,сливающихся между собой, В атеросклеротических бляшках наблюдается слоистое распределение соединительной ткани и пенистых клеток, что указываетна волнообразное течение процесса,характерное для быстротекущего процесса с иммунологическим компонентом. Однако, проведенное ранее исследование РЖЛ с донорскими липопротеидами не выявило торможения миграции лейкоцитов по сравнению с контролем, и тем самым показало отсутстГвие сенсибилизации.П р и м е р 2. Больной А., 60 лет.Клинический диагноз: ИБС, Атеросклероз коронарных артерий. Стенокардиянапряжения 11-го функциональногокласса. Атеросклеротический кардиосклероз. Гипертоническая болезнь 1111-й стадии. Более 10 лет страдает15291 Фармула изобретения Составитель В. ЛитовченкоРедактор Т. Парйенова Техред М.Дидык.Заказ 7634/39 тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина, 101 гипертонической болезнью медленно прогрессирующего течения с хорошим эфФектом гипотензивной терапии. В 1979 г. появилась стенокардия напряжения - сжимающие боли за грудиной5 возникают на дюне длительной Физической нагрузки, при подъеме по лестнице на 111-й этаж. Стенокардия носит не тяжелый, стабильный характер.При постановке РИМЛ с использованием аутолипопротеидов, разбавленных в 30 раз (40 мкг/мл), не наблюдалось торможения миграции лейкоцитов по сравнению с контролем, также как и при постановке РИМЛ с донорскими липопротеидами, как в прототипе. Течение заболевания стабильное, без признаков обострения и прогрессирования,С помощью предлагаемого способа 20 изучено 305 больных ИБС, из них у 93 обнаружена прогрессирующая Йорма вч еросклеротического процесса (по прототипу - 29 больных), некоторым больным назначена иммунокорректирую щая терапия.Предлагаемый способ, основанный на реакции с собственными липопро 21 6теидами, исключительно точен и дае однозначный ответ, что позволяет своевременно назначить больным соответствующую иммунокорректирующую терапию. Способ-прототип приблизительно в ЗОХ случаев не позволяет выявить прОгрессирующее течение заболевания, что связано с серьезными осложнениями для больного. Способ очень быстр в исполнении, его продолжительность около 12 ч, в то время как способа- прототипа - более 1 сут.ф тСпособ диагностики атеросклероза путем добавления к лейкоцитам больных липопротеидов с последующей оценкой реакции ингибиции миграции лейкоцитов и при наличии ингибирования реакции диагностируют атеросклероз, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности диагностики прогрессирующего течения атеросклероза, к лейкоцитам добавляют липопротеиды, полученные иэ крови того же больного.