Способ моделирования паркинсонизма

(51)4 С 09 В 23 28 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(57) Изобретение относине, а именно к нервнымповышение воспроизводимС этой целью животномув черную субстанцию моэтвор дельта-сон индуцирда в дозе 5-10 нмоль. Псаба позволяет повыситьдимость модели паркинсопо сравнению с прототип ИЯ ПАРКИНСО тся к медициболезням. Цельости способа.билатерально ии инстит А.А.Шандра га вводят рас ующего пептиименение спо 56 Крыжа вский Г.Н. Детерминантныепатологии нервной систеицина, 1980, с, 36-41. воспроизвонизма на 557 ом,структурымы.- М.: М ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР Изобретение относится к медицине,а именно к нервным болезням.Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа.Способ осуществляют следующим образом,Крысу под гексеналовым наркозом(100 мг/кг) фиксируют в стереотаксическом аппарате, затем производятсрединный разрез кожных покровов черепа, удаляют надкостницу, бормашиной высверливают треганационнье отверстия и вводят направляющую канюлю(внешний диаметр 0,5 мм) по координатам (АР = -5,3, 1. 2,5; Н =, 8,0).Фиксацию канюль осуществляют с помощью быстротвердеющей зубоврачебнойпластмассы типа "Норакрил. Прооперированное животное в течение 10-14 днейнаходится при обычном содержании икормпении. Для адаптации животного кусловиям эксперимента и предстоящейвнутримозговой инъекции препарата егоежедневно в течение 5 мин держат вруках. На 1-14-и день после операции через имплантированную канюлю с помощью микроинъектора производят введение раствора дельта-сон индуцирующего пептида. При этом в течение2-3 мин вводят 1-3 мкл раствора (510 нмоль в физиологическом растворе)после введения еще в течение 2-3 минканюлю оставляют на месте для болееполной диффузии препарата и предотвращения его обратного вытекания.После извлечения канюли крысу помеща ют в прозрачную камеру для визуальной регистрации изменений,П р и м е р 1, Крысе-самцулинии Вистар массой 275 г под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксически билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (АР = -5,3, 1.2,5; Н = 8,0). Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы "Норакрил", Через 10 дней после операции (в течение всего времени животное находилось в обычных услови" ях содержания и кормлеия) в условияхсвободного поведения крысы с помощьюмикроинъектора билатерально вводятсвежеприготонленный раствор дельтасон индуцирующего пептида в дозе5,0 нмоль в 1 мкл физиологическогораствора. При этом каждое введениеосуществляют в течение 2,5 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться на месте в течение 3 мин. Затем крысу помещают впрозрачную камеру (40 х 60 х 30 см)для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через 5 минут после 10 инъекции у крысы отмечается замирание, в течение 2,5 мин у животного развивается флексорная установка туловища - голова прижимается к передним лапам, развивается характерная горбатость, задние конечности рас ставлены в стороны и выдвинуты впереди Ллинник затылок-основание хвоста составляет 11,8 см (до введения пептида в состоянии покоя 13,5 см). При пассивном отведении конечности 25 ощущается значительное сопротивление. Частота сердечных сокращений снжкается с 410 до 350 в минуту, а частота дыхания - со 112 до 82 в минуту, Определение двигательной активности ме тодом прямой актометрии (подсчет числа колебаний сейсмодатчика установленного в подвижном полу за 2 мин) показало снижение этого показателя с 817 до 130; отмечается также снижение горизонтального и вертикального поведения в открытом поле; число пересеченных квадратов до введения ДСИП составляло 21 за 2 мин, после введения - 1, а число вертикальных стоек - 40 соответственно 8 и О. У крысы развивается птоз, движения вибрисс отсутствуют. В период непродолжительной локомоции, провоцируемой болевым раздражением, наблюдается скованность 45 днижений, уменьшение длины шага,Таким образом, у крысы воспроизведен остро формирующийся акинетикоригидный паркинсонический синдром.П р и м е р 2. Крысе-самцу линии Вистар массой 290 г под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксичес" ки билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (ЛР = -5,3, Ь2,5; Н = 8,0)Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы цНоракрил". Через 11 дней после операции (в течение этого времени животное находилось вобычных условиях содержания и кормления) в условиях свободного поведения крысы с помощью микроинъекторабилатерально вводят свежеприготовленный раствор дельта-сон индуцирующегопептида в дозе 7,5 нмоль в 2 мкл физиологического раствора, При этомкаждое введение осуществляют в течение 3 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться наместе н течение 3 мин. Затем крысупомещают в прозрачную камеру (40 хх 60 х 30 см) для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через6 мин после иньекции у крысы отмечается замирание и н течение последующих 1,5 мин у животного развиваетсяфлексорная установка туловища - голова прижимается к передним конечностям, появляется характерная горбатость, задние конечности расставленыв стороны и выдвинуты вперед. Длиццикзатылок - основание хвоста составляет 11,9 см (до введения пептида всостоянии покоя 13,4 см). Отмечается птоз, уменьшается двоение вибрисс, При пассивном отведении пранойпередней конечности ощущается значительное сопротинление. Частота сердечных сокращений снижается с 385до 310 в минуту, а частота дыханияс 98 до 84 в минуту. Определение двигательной активности методом прямойактометрии (подсчет числа колебанийсейсмодатчика, установленного в подвижном полу, за 2 мин) показало снижение этого показателя с 736 до 57;отмечается также сшякение горизонтального и вертикального поведенияв открытом поле: число пересечеццыхквадратов до введения составляло 17за 2 минуты, после введения - 3, ачисло вертикальных стоек - соответственно 4 и О, В период непродолжительной спонтанной локомоции, отмечаемой через 15,5 мин после введенияпептида, у животного наблюдается скованность движений, уменьшение длинышага, Животное не реагирует на предьявление воды и пищи. Изучение электромиограмиы камбаловидной мышцы иЭЭГ-изменений показалЬ, что в периодописанных поведенческих нарушенийимеет место увеличение мышечного тонуса и развитие пароксизмальной синхронизированной активности в хвостатых ядрах мозга.1506471 Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я Составитель А.БобровТехред М,Моргентал Корректор Н,Борисова Редактор В.Петрап Заказ 5441/51 Тираж 469 ПодписноеВШЯШИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Таким образом, у крысы воспроизведен остро формирующийся акинетикоригидный паркинсонический синдром.П р и м е р 3. Крысе-самке линии Вистар массой 280 г под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксически билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (АР = -5,3; Ь = 2,5; Н = = 8,0). Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы "Норакрил". Через 14 дней после операции в условиях свободного поведения животного (в течение всего этого времени крыса находилась в обычных условиях содержания и корм; ения, с помощью микроинъектора билатерально вводят свежеприготовленный раствор дельта-сон индуцирующего пептида в дозе 10,0 нмоль в 2 мкл физиологического раствора. При этом каждое введение осуществляют в течение 3 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться на месте в течение 3 мин. Затем крысу помещают в прозрачную камеру (40 х 60 х 30 см) для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через 8,5 мин после инъекции у крысы отмечается замирание, в течение 3 мин у животного развивается флексорная установка туловища - голова прижимается к передним лапам, отмечается характерная горбатость, задние конечности расставлены в стороны и выдвинуты вперед, Длинник затылок - основание хвоста составляет 11,2 см (до введения пептида в состоянии покоя 12,9 см). У крысы развивается птоз, движения вибрисс отсутствуют. Прп пассивном отведении левой передней конечности ощущаетсязначительное сопротивление. Частотасердечных сокращений снижается с 349 5до 297 в минуту а частота дыханияЭс 102 до 89 в минуту. Определениедвигательной активности методом прямой актометрии (подсчет числа колебаний сейсмодатчика, установленногов подвижном полу, эа 2 мин) показалоснижение этого показателя с 895 до107; отмечается снижение горизонтального и вертикального поведения в открытом поле: число пересеченных квадратов до введения составляло 27 за2 мин, после введения - 7, а числовертикальных стоек - соответственно5 и 1. В период непродолжительнойлокомоции, провоцируемой болевым раздражителем, наблюдается скованностьдвижений, уменьшение длины шага. Животное не реагирует на предъявлениеводы и пищи,Таким образом, у крысы воспроизве ден остро формирующийся акинетикоригидный паркинсонический синдром.11 рименение способа позволяет повысить воспроизводимость модели паркинсонизма на 557. по сравнению с известным способом. Способ моделирования паркинсонизмапутем введения животному химического вещества, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения воспроизводимости способа, вводят раствор дельта-сон индуцирующего пептида в 4 0 дозе 5-10 нмоль билатерально в чернуюсубе"анцию мозга.