Способ определения чувствительности форм хвойных пород деревьев к воздействию ростстимулирующего препарата

(19) (11 702 4 А 01 С 7/О ГОСУД АРСПО ИЗОБРЕТЕПРИ ГКНТ ННЫЙ НОМ иям и Отн ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Н АВТОРСКОМ ДЕТЕИЬСТВУ 13ой физикилесоведения Л.М.Апашецов ьство СССР3/00, 1985. хароУ(71) Институт химичесАН СССР и ЛабораторияАН СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ФОРМ ХВОЙНЫХ ПОРОД ДЕРЕВЬЕВК ВОЗДЕЙСТВИЮ РОСТСТИМУЛИРУКЮ 1 ЕГО ПРПАРАТА(57) Изобретение относится к областибиологии и может быть использовано Изобретение относится к области биологии и может быть использовано в лесном хозяйстве.Целью изобретения является повышение точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм.Хвою сеянцев сосны второго года, семена которых замочены перед посевом в течение 24 ч в растворе стиму лятора роста растений, растирают в экстрагирующем буфере.Затем проводят гель-электрофорез экстракта. Полученные гелевые пласти ны окрашивают на малатдегидрогеназу и малик-энзим, После инкубирования в лесном хозяйстве. Цель - повышение точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм. Для реализации способа хвою сеянцев сосны, семена которых перед посевом были замочены в растворе стимулятора роста растений, растирают в экстрагирующем буфере, выделяя водорастворимые белки, Эти белки подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле, полученные спектры окрашивают на малатдегидрогеназу и малик-энзим, подсчитывают количество полос зимограмм и сравнивают с аналогичными данными, полученными в контроле, при этом форму относят к чувствительной, если количество полос дос- ф товерно возрастает по сравнению с контролем. 2 табл.С: в растворе краски на геле подсчитыва ют количество изоферментных полос,П р и м е р 1. 200 мг хвои сеянце сосны 2 года, семена которых перед посевом замочены в течение 24 ч в растворе дигидрохлорида 2-метил- диметиламинометил-оксибензимидазола (препарат БИО) в концентрациях1 (вариант 1) и О, 1 (вариант 11) мг/л, мелко режут, растирают в ступке на холоде (при г.=-5 С) в 1,5 хп экстрагирующего буфера на основе трис-НС 1 (рН 8,0) с добавлением аскорбиновой кислоты, цистеина, са зы, Твин, Затем экстракт центриф гируют при 10000 я в течение 30 мин.1470235 20 Г Г 3,9 3,9 3,9 5)4 6)0 7)б 4)1 4)8 3)2 МалатдегидрогказаМалик-.энзим 2)7 2)7 35 3,6 5,8 2,4 3,0 2,5 4,0 2,3 Т а б л и ц а 2 ВесзоныохвоДлина хвои,Вескорня,г Вес Количе" КоличеДиаметрствола ство ство придаточных побегов прида- точных у корневойшейки,ения,К экстракту добавляют 0,3 мл 60%ного раствора сахарозы, содержащегобромфенол, Экстракт подвергают вертикальному электрофорезу в полиакрил 5амидном геле с целью идентификацииизоферментов. Первые 2 ч электрофорезпроводят при напряжении 140 В, затемего повышают до 300 В, Для полученияспецифического окрашивания на малатдегидрогеназу гель инкубируют с малатом натрия, НАДФ, трис-НС 1 (рН 8,0на малик-энзим - с малатом натрия,НАД, трис-НС 1 (рН 8,0), После получения специфического окрашивания под"считывают количество изоферментныхполос.Контролем служит хвоя сеянцев сосны, замоченных перед посевом в водев течение 24 ч, а затем высеянныхна опытные делянки.Среднее, число изоферментных полосв хвое экспериментальных групп сеянцев сосны приведено в табл.1,Та блица 1 Фермент Семья Вариант обработки пре- паратом Контроль 1 11 Семья Вариант Высотаобработки растения)мм У сеянцев семьи 2 (особенно .при обработке семян препаратом в концентрации 0,1 мг/л) обнаружены самые значительные изменения изоферментного спектра хвои сеянцев в сравнении со спектром контрольных сеянцев. Так, например, среднее число изоферментных полос малик-энзима и малатдегидрогеназы в 1,2-2,0 раза выше, чем в контроле, что объясняется появлением новых зон активности ферментов. При сравнительном анализе числа изоферментных полос малик-энзима и малатдегидрогенахы в хвое сеянцев семьи 2 с семьями 1 и 3 выявляются аналогичные закономерности. П р и м е р 2. Семена сосны после замачивания в течение 24 ч в растворе препарата БИОв концентрациях 1 (вариант 1) и 0,1 (вариант 11) мг/л и высевают на опытные делянки, Контролем служат семена сосны, замоченные в воде,Экспериментальные исследования проводят на семьях полусибов. Измерение основных морфологических показателей проводят у двухлетних сеянцев сосны. Ошибка эксперимента не превышает 5%,Результаты влияния дигидрохлорида 2-метил-диметиламинометил"5-оксибензимидазола на морфологические параметры двулетних сеянцев сосны приведены в табл,2,11470235 Составитель А,СизовРедактор Н.Бобкова Техред Л.Сердюкова Корректор С.Черни Заказ 1413/2 Тираж 618 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 Результаты свидетельствуют о наличии стимуляционного эффекта препарата, но величина его варьируется вразных семьях. Наиболее эффективенстимулятор роста для сеянцев семьи 2,особенно в варианте 1. Так, например,в этом варианте высота растений составляет 1321, а диаметр ствола 144 Хпо отношению к контролю.У сеянцев той же семьи 2 (при обработке препаратом в концентрацииО, 1 мг/л) обнаружены самые значительные изменения изоферментного спектрахвои сеянцев в сравнении со спектромконтрольных сеянцев, а также аналогичные изменения у контрольных сеянцев семьи 2 по сравнению с контрольГными сеянцами из других семей,Таким образом, сеянцы сосны, наи 20 более отзывчивые на действие стимулятора роста, имеют следующую структуру спектра изоферментных полос (в хвое); не менее 7 полос у малатдегидрогеназы и не менее 5 полос у маликэнэима,Формула изобретенияСпособ определения чувствительно"сти форм хвойных пород деревьев квоздействию ростстимулирующего препарата, включающий предпосевную обработку семян раствором ростстимулятора, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности определения за счет возможности выявлениягенетически чувствительных форм, изсеянцев на ранних этапах их развитиявыделяют водорастворимые белки, которые подвергают электрофорезу . в полиакриламидном геле, полученные спектрыокрапввают на малатдегидрогеназу ималик-энзим, подсчитывают количествополос зимограмм и сравнивают с аналогичными данными, полученными в контроле, при этом форму относят к чувствительной, если количество полосдостоверно возрастает по сравнениюс контролем.