Штамм бактерий рsеudомоnаs sp., разлагающий нафталин и антрацен

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 09) (11) 2 Г 3/34 //12 К 1:38) 1594 С 12 М 1/20, С У(С 12 И 1/20,ИЗОБРЕТЕНИЯДЕТЕЛЬСТВУ ПИС АВТОРСКОМ биологии и представля штамм бактерий Рзецдо В, разлагающий н трацен. Итамм может б для очистки сточных в ных почв от этих со изобретения является вого штамма, способно сокими скоростями осу градацию нафталина и концентрации нафтали его полное разрушение рез 4-5 суток. Полная трацена при исходной 1 г/л происходит чере совместном содержании субстрата отсутствуют 24 ч. ет со шопаз афтал Штамм Рзеийошопаз зр. ВКПМ ВЭ (рабочий номер 16 М 2) выделен из сточных вод предприятий микробиологи ческой промышленности с помощью метода длитепьной экспериментальной адаптации. Взятые активные илы помещались в минеральную среду, содержащую нафталин как единственный источник углерода и энергии в концентрации 1 г/л . Через 10 сут культивирования небольшую аликвоту (25 мл) переносили в свежую среду с нафталином. Подобные операции проводились до появления заметного роста микроорганизмов. Затем клеточную суспенэию высевали на твердую минеральную среду с нафталином в соответствующемГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) Авторское свидетельство СССРУ 785359, кл. С 02 Г 3/34, 1979.ЕЧАЯ 8 У.С., Гетп 1 еу НЛСгз.НИЬа Е, ОХУРАТ 1 ЧЕ МКТАВОЬ 18 МоГ РНЕКАЮТНКЕЯЕ АЮЭ АЯТНВАСЕИЕ ВУ,801 Ь Р 8 ЕМОМОНА 8В 1 ОСНКМ, Л., 1965,ч. 95, р. 819.(57) Изобретение относится к микроИзобретение относится к микробиологии и касается нового штамма бактерий, способного к высоким скоростям разложения нафталина и антрацена, и который может быть использован для очистки сточных вод различных производств, а также почв, загрязненных этими соединениями.Нафталин и антрацен являются ток- . сичными, высокоустойчивыми компонентами почв и сточных производственных вод, загрязняющими окружающую среду.Целью изобретения является получение нового штамма, способного с более высокими скоростями осуществлять деградацию нафталина и антрацена. бой новыйзр. ВКПМин и аныт ь исполь зова нод и загрязнен- единений. Цельюполучение ного с более выществлять деантрацена. При на в среде 5 г/лнаблюдается чедеструкция анконцентрацииз 3 сут, припо 0,5 г/л обав среде черезразведении для получения единичныхколоний. У отобранных штаммов проверяли активность по разложению найталина. Наиболее интересные высевалина среды, содержащие нафталин и антрацен. При обнаружении Деградацииантрацена культуры высевали на жидкие среды с антраценом, как единственным источником углерода и энергии, Штамм Рзецйощопаз зр. ВКПМВбып отобран как наиболее активный деструктор нафталина и антрацена, присутствующих в среде каквместе, так и отдельно,Характеристика штамма Рзецйощопаззр, ВКПМ В. Среды для хранения: МПА и минеральные среды с нафталином или тетрадеканом.Морфологические признаки; парныепалочки, слабоизогнутые длина клеток 1,2-2,4 мкм, ширина 0,8-0,9 мкму 24 часовой культуры, выросшей намясопептонном бульоне, грамотрицательные, подвижные, спор не образуют,размножаются делением,Физиологические признаки: аэроб,атемпературный оптимум +25 - "30 С,орастет при +4 С, не растет при +42 С,,оптимум рН 6,8-7,5.Культуральные признаки:на мясо-пептонном агаре культурана третьи сутки образует круглые,8-Формы колонии диаметром 2-3,5 мм,при росте на найталине в минеральную среду выделяется темно-коричневый пигмент, Рост на мясо-пептонномбульоне с образованием пленки белого цвета и небольшим выделением газа,Биохимические признаки:нитраты восстанавливает, желатину ,разжижает, крахмал не гидролизует, при росте на средах, содержащих органическую серу, выделяет сероводород, обладает оксидазной, каталазной и лнпазной активностью, при росте на среде "КИНГ А" выделение флуоресцирующего пигмента не наблюдаетсяус" ваивает сахарозу, глюкозу, йруктозу, ксилозу, арабинозу и рамнозу с образованием кислоты, подкисление среды не наблюдается при росте на мальтозе и лактозе, из спиртов ассимилирует этанол, глицерин, маннит, из алифатических углеводородов - соединения с длиной цепи от восьми до двадцати углеродных атомов, из ароматических углеводородов - пирокатехин, бензол, 10 15 20 25 30 35 40 50 55 Через 2 сут культивирования остаточное количество антрацена составляло менее 0,1% от исходного, на 3 сут антрацен в среде не обнаружен, Одним из наиболее характерных метаболитов, обнаруженных в эфирном экстракте, являлась гидроксинайтойная кислота, что может служить доказательством микробиологического разложения антрацена. бензоат, толуол, м-ксилол, салицилат, бифенил и Фенантрен.Штамм Рзеийощопаз зр. ВМПМ Вдеградирует молекулы нафталина и антрацена, используя их в качестве единственных источников углерода и энергии, При концентрации нафталина в среде 5 г/л его полное разрушение наступает через 4-5 сут, при концентрации антрацена в среде 1 г/л процесс полной деструкции занимает около 3 сут, при совместном содержании по 0,5 г/л оба субстрата отсутствуют в среде через 24 ч,П р и м е р 1, Штамм Рзецйощопаззр. ВМПМ Ввыращивали в жидкой среде с найталином в течение 3 сут. Состав среды, г/л: КНРО 3,4,К НРО 4 4 э 3 РНд)а 80 а 2 зОь МКС 1 Оэ 26 ю СаС 1 0,026, микроэлементы, мг/л: МпС 14 НО 1 ф РеЯО 7 НО 0,6, Иа Мо 01 2 Н О 2, нафталин 5 г/л,дистиллированная вода, рН 6,8-7,1.Через 3 сут культивирования найталина в среде содержится менее 10% от исходного, на 5 сут он в среде отсутствует.Трехсуточной суспензией выросшей культуры засевали минеральную среду с антраценом (концентрация 1 г/л) .и выращивали на качалке при 200 об/мин в течение 2 сут, температура ферментации 28 С. Контроль за процессом разложения осуществляли с помощью методов газо-жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии, для чего культуральную жидкость подкисляли 1 н НС 1 до рН 2,0, экстрагировали диэтиловым эфиром, растворитель упаривали на роторном испарителе, тщательно высушенный остаток растворяли в 0,3 мл пиридина и добавляли 0,1 мл силирующего агента (Б,О-бис,(триметилсилил)-трийторацетамид) . Наличие метаболитов выявляли на газожидкостном хроматографе и идентифицировали методом масс-спектрометрии.П р и м е р 3. В нижнюю часть нафталин в концентрации 5-10 мг/л. лабораторной установки, описанной впримере 2, перистальтическим насосом подавали синтетический сток, представляющий собой раствор антрацена ЗО Штамм бактерий Рзецдошопаз зр. (5 мг/л) в водопроводной воде. Режим .ВКПМ В, разлагающий нафталин и эксплуатации установки тот же, что и антрацен. Формула и зобр ет ения Составитель 3. ФалунинаТехред М.Ходанич Корректор М. Демчик Редактор 10, Середа Заказ 910/28 Тираж 500 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, 3-35Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул, Гагарина, 1 О 1 5 14П р и м е р 2. В лабораторную установку аэротенк-биофильтр, представляющую собой колонку, загруженную волокнами триацетилцеллюлозы с иммобилизованными в них в процессе формования клетками Рзеидошопаз зр ВМПМ Ви совмещенного с ней аэротенка снизу перистальтическим насосом подавали синтетический сток (раствор нафталина (40 мг/л) в водопроводной воде). Объем колонки 100 мл, скорость подачи жидкости 1 мл/с, аэрация 3,3 мл/с, темпера-тура 20 С, рН 7,15. Установка эффективно работала весь испытательный срок, составляющий 60 сут, в выходящей воде содержание нафталина устойчиво не превышало 10 мкг/л. Микробиологический контроль чистоты используемой культуры, произведенный на 50 сут работы установки, показал отсутствие заражения биофильтрат побочной микрофлорой,65456 6в примере 2, рН 7,05. Установка рабо-.тала в течение 30 сут, в выходящейводе антрацена обнаружено не было.П р и м е р 4. В нижнюю частьлабораторной установки, описанной впримере 2, леристальтическим насосом подавали синтетический сток,состоящий, г/л: ацетон 0,1, этанол 0,2,бензол 0,1, нафталин 40, антрацен 5,аммонийные соли 2. Скорость подачисинтетического стока составляла0,5 мл/с, рН 7,0. Установка работалав течение 30 сут, в выходящей воденафталина и антрацена обнаружено небылоТаким образом, предлагаемый штаммРзецйошопаз зр. ВМПМ В, способный разлагать нафталин,и антрацен, 20 может быть использован для деградации этих соединений при высоком ихсодержании в почвах или промышленныхстоках, кроме того, новый штаммможет быть применен в доочистке ряда 25 стоков, содержащих в выходящей воде