Способ определения специфической сенсибилизации организма к аллергенам

(57) ЛЕНИЯ СПЕЦИОРГАНИЗМА СПОСОБ ОПРЕЕНСИБИЛИЗАЦИНАМИзобретениеологии и мо ЧЕ АЛ относится к ет быть исп област льзова и о аллергии. Цел иагности чесой с У ией. точ- сенГОСУДАРСТВЕККЫИ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ 4076201/2802,06.8607.03.89. БЧелябинскийский инститИ.И,Долгушитнова, Л.В,615.375(088Новиков Д,Кчные методыс. 186, 19 Изобретение относится к клини кой медицине,. точнее к клиничес аллергологии и иммунологии, и п назначено для выявления специфи кой сенсибилизации к аллергенам больных с аллергической патолог Цель изобретения - повышение ности определения специфической сибилизации к аллергену,Способ осуществляют следующим образом.Моноциты и полинуклеары выделяют из периферической крови путем центрифугирования на двойном градиенте фиколл-верографин. После троекратного отмывания средой 199 клетки инкубйруют в. концентрации 10 /мл в те 6чение 60 мин в пробирках "сапожках". Культуру клеток, прилипших к стеклу,изобретения - повышение точности определения специфической сенсибилизации организма. У больного из крови выделяют моноциты, нейтрофилы, добавляют к ним аллерген и инкубируют . 45 - 75 мин. Далее определяют процент прилипших моноцитов и нейтрофилов, а также лизосомальную активность моноцитов, При увеличении процента прилипших моноцитов более чем в 1,5 раза при одновременном снижении процента прилипших нейтрофилов и повышении лизосомальной активности моноцитов в 1,7 раза по сравнению с пробой без аллергена диагностируют специфическую сенсибилизацию к аллергенам, Точность способа возрастает на 402. отмывают от лимфоцитов, добавляют Фей еллергеиы (специфические и иеспеци- Ефи фические), инкубируют в течение 4575 мин. Определяют индекс суммарной люминесценции лизосом в моноцитах иклеточное соотношение Г 1/Н 4,. При уве- фжф личении процента прилипших моноцитовболее чем в 1,5 раза и повышении лизосо" мальной активности мононуклеаров более чем в 1,7 раза по сравнению сконтролЕм диагностируют специфическую сенсибилизацию к аллергену, фП р и м е р 1. Изучали способность моноцитов и нейтрофилов периферической крови больного бронхиальной астмой атопической формой отвечать на воздействие специфическогоаллергена (аллерген домашней пыли)хп ч 1 сго, С этой целью выделяют гра 1464088нулоциты и мононуклеары из перифери- (контроль 1) в течение того же вреческой крови путем центрифугирования мени. Специфичность аллергена нодна двойном градиенте фиколл-верогра- твержцалась многократными кожными фин. пробами. По истечении срока инкубаНа границе между плазмой и раст 5ции и в опыте и в контроле подсчитывором фиколл-верографин образовалось вали соотношение моноцитов и нейтрокольцо, содержащее 10-157 моноцитов, филов, прилипших к стеклу (моно-187. нейтрофилов, 67-802 лимфоци- цит/нейтрофил). В мазках подсчитыватов, После выделения клеточную 1 О ли не менее 100 клеток. В оставшихся взвесь - суспензию трижды отмывают "сапожках" клетки отмывали от аллерсредой 199, Клетки инкубируют в кон- гена средой 199 и инкубировали с акцентрации 10 /мп в течение 60 мин6ридином оранжевым в концентрации при 37 С в пробирках "сапожках", на 2 мкг/мл в течение 20 мин, после чедне которых находились покровные 15 го определяли суммарный индекс люстекла. Затем клетки, прилипшие к минесценции (СИЛ) лизосом полуколистеклу, отмывают от лимфоцитов сре- чественным методом по формуле дой 199 и используют их для изученияспецифической сенсибилизации к аллергену. 20 где а - количество клеток, содержаИсследование проводят двойным сле- щих единичные лизосомы; пым методом, Испытатель и учетчик Ь - количество клеток, лизосомы не знали, какой аллерген является в которых занимают 50-.707 специфическим. Клетки инкубируют в цитоплазмы: среде 199 с добавлением 200 РПИ/мл 25 с - количество клеток, цитоплаз-, двух аллергенов, один из которых был ма которых полностью заполспецифическим (аллерген домашней пынена лизосомами. ли - . опыт), а другой. неспецифическим(аллерген пыльцы деревьев - конт- Для облегчения учета реакции пророль 2), Общим контролем служили водили подсчет индекса сенсибилизаклетки, инкубированные без аллергена ции (ИС) по формулеФ соотношение Мц/Н в опыте (или контроле 2)вежевеВ9соотношение М; /Н в контроле 1СИЛ в опыте (или в контроле 2)СИЛ в контроле 1. где ИС - соотношение клеточных эле-.1ментов;ИС- соотношение СИЛ лизосбмактивных моноцитов.У больного К.В,И, процент моноцитов в среде 199 составил 38%, соответственно М /Н ф = 061; при инкубации с неспецифическим аллергеном(смесь пыльцы деревьев): 477. моноцитов, а соотношение Мц/Нф = 0,89;со специфическим аллергеном (аллерген домашней пыли): 707 моноцитов,М/Н ф2,33. Соответственно ИС .соспецифическим аллергеном ИС = 3,82,с неспецифическим аллергеном ИС=1,46,СИЛ лизосом в моноцитах при инкубации в среде 199 составил 168 .ЕДсо специфическим аллергеном - 375 ЕДс неспецифическим аллергеном - 208.ЕД 40 Соответственно ИС 2 со специфическималлергеном составил ИС= 2,23, а снеспецифическим ИС= 1,24,П р и м е р 2; Больной Х.А.И. Диагноз: туберкулез легких.45 Изучали способность моноцитов инейтрофилов периферической крови убольного в фазе выраженной активности процесса отвечать на воздействиеспецифического аллергена (туберкули 50 на). Исследование проводили аналогично осуществлению способа в примере 1. В качестве специфическогоаллергена использовали стандартныйсухой туберкулин,Содержание ампулы разводили в1 мл среды 199. В реакции использовали 0,1 мп полученного растворатуберкулина, Неспецифическим аллергеном служил бруцеллин (0,1 мл).1464088 мого способа можно точно определить, какой аллерген является специфическим. В данном примере специфическая реакция определяется на туберкулин, что соответствует иммунной реактивности при заболевании туберкулезом. Положительный эффект заключаетсяв том, что уменьшается количестволожноположительных результатов с 407до О, т.е. точность возрастает на 403. Формула изобретения Составитель Г. Крюкова Редактор И. Горная Техред М.Дидык Корректор И. ПатайЗаказ 819/48 Тираж 788 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101 Процент моноцитов у данного больного в среде 199 составил 437, соответственно Мц/Н ф = 0,75, при инкубации с неспецифическим аллергеном (бруцеллином) содержание моноцитов 53 Х, а соотношение М/Нф = 1,12, со специфическим аллергеном (туберкулином) - 767. моноцитов,М/Н ф = 3,17.ИС, со специфическим аллергеном 1 О равен 4,2, ИС, с неспецифическим аллергеном равен 1,4.СИЛ лизосом в моноцитах при инкубации в среде 199 составил 273 ЕД, со специфическим аллергеном 418 ЕД 15 а с неспецифическим аллергеном 306 ЕД. Соответственно ИС со специфическим аллергеном составил 1,53., а с неспецифическим аллергеном 1,12.Проведение исследований в соответствии с известным способом дало следующие результаты: при инкубации клеток в среде 199 для подсчета 100 лейкоцитов просмотрено 27 полей зре-. ния, при инкубации с неспецифическим 25 аллергеном - 44 поля зрения, при инкубации со специфическим аллергеном поле зрения.Соответственно ИСз со специфическим аллергеном составил 1,14, а с не-З 0 специфическим 1,6.Таким образом, известный способ не позволяет оценить наличие специфической сенсибилизации, так как снижение прилипаемости более выражено с неспецифическим аллергеном, а не со специфическим. С помощью предлагаеСпособ определения специфической сенсибилизации организма к алпергенам, включающий забор крови, выделение лейкоцитов, инкубацию их в при", сутствии аллергена с последующей оценкой адгезивной активности лейкоцитов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, из лейкоцитарной взвеси выде;ляют моноциты и нейтрофилы, инкубируют с аллергеном в течение 45-75 мин,. далее определяют процент прилипших моноцитов и нейтрофилов и лиэосомаль" ную активность моноцитов и при увеличении процента прилипших моноцитов более чем в 1,5 раза при одновременном снижении процента прилипших нейтрофилов и повышении лизосомальной активности моноцитов более чем в 1,7 раза по сравнению с пробой без аллергена диагностируют специфическую сенсибилиэацию к аллергенам.