Способ радиоиммунологического определения антигенов

(19) 4 С 01 И 33/53 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ е к им микредназнаОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ Д ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛВСТ(71) Институт биоорганической химиАН БССР(54) СПОСОБ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГООПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ(57) Изобретение относится к биохимии, точйее к иммунологичесроопределениям антигенов, и чено для диагностики различных патологических и физиологических состояний человека и при определении микроколичеств биологически активныхвеществ. Цель изобретения - повышеничувствительности иммунологическогоопределения антигенов, Для зтогоинкубируют антиген со специфическимантителом, один из компонентов радиоактивномеченый, инкубацию проводятв присутствии декстрана с мол,мас.20000-50000 и его конечной концентрацией 3-8Затем отделяют радиоактивный комплекс и проводят радиометрию. Все определения для повышения чистоты дублируются. 1 табл.Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способу иммунологического микроопределения антигенов, и может быть использовано5для диагностики различных патологических и физиологических состоянийорганизма человека, а также в научных исследованиях при определениимикроколичеств биологически активныхвеществ,Цель изобретения - повышение чувствительности иммунологического определения антигенов.П р и м е р 1. Построение калибровочной кривой для радиоиммунологического определения раковоэмбриональногоантигена (РЭА) по стандартной методике с использованием разделяющей системы на основе иммобилизованных вторичных антител в присутствии декстрана (мол,мас, 70000),Все определения дублируются.В пробирки добавляют растворы реагентов: 25твин-буфер (50 мМ фосфатныйбуфер, содержащий 0,47 твина,0,6 М ИаС 1, 0,1 мМ ЭДТА, 0,02% ИаБ,рН 7,4), содержащий 10% декстрана,в количестве О,1 мл; 30растворы стандартов РЭА, приготовленные на нормальной сыворотке человека и содержащие 0,2,5,10,25,80,150и 350 нг РЭА/мл, в количестве 0,1 мл;1-РЭА содержащий 10% декстраФ35на, в количестве 0,1 мл;антисыворотка кролика против РЭАв разведении, необходимом для связывания 20-257 вносимого1-РЭА, соЯ 5держащая 10% декстрана, в количестве400,1 мл,В пробирки для определения неспецифического связывания вместо антисыворотки добавляют 1 альбуминовый буфер" (50 мМ фосфатный буфер, содер жащий 0,1% бычьего сывороточного альбумина, 0,15 М ВаС 1, О,1 мМ ЭДТАр 0,02% Бааз рН 7 4)Содержимое всех пробирок тщательно 50 перемешивают и пробирки инкубируют 20 ч при комнатной температуре. После инкубации во все пробирки добавляют по 0,1 мл суспензии иммобилизованных вторичных антител, Пробирки встряхивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре, после чего центрифугируют 10 мин при 1500 , осадки промывают 1 раз по 1 мл твин-буФера, Стандар- Радиоак- , ,х, ; В/В1007,ты РЭА, тивность, имп/миннг/мл имп/мин 5092 4957 4752 4794 4582 4494 4187 4265 3593 3633 2073 2087 1530 1486 795 823 5025 100 95,0 4773 4538 90,3 10 4226 84,1 25 3608 71,8 41,4 2080 80 30,0 150 1508 809 16,1 350 В линейных координатах строятстандартные кривые, откладывая пооси ординат значение В/В, х 100%, апо оси абсцисс - концентрацию стандартов РЭА в нг/мл. Графическим способом определяют чувствительностьанализа (т.е. концентрацию стандартаРЭА, при которой В/В, 100%=95%).Как следует из таблицы, чувствительность анализа в присутствии декстрана - 2 нг/мл,Использование предложенного способа позволяет повысить чувствительность иммунологического определенияантигенов в 2-4 раза по сравнениюс известным,формула изобретения Способ радиоиммунологического определения антигенов, включающий инкубацию антигена со специфическими ани пробирки помещают в гамма-счетчик для измерения радиоактивности.Рассчитывают среднее арифметическое значение (х) количества импульсов в минуту для каждой пары пробирок, а также определяют величину В/В 100% для каждого стандарта где В - связанная радиоактивность в пробирках, не содержащих стандарты, имп/мин;В, - связанная радиоактивность в пробирках, содержащих 0 нг РЭА/мл, имп/мин.Результаты приведены в таблице1425549 Составитель П.ИвановРедактор Г.Волкова Техред А.Кравчук Корректор В,Романенко тирах 847 Заказ 4762/41 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 45 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тителами, при этом один из компонентов несет радиоактивную метку, отделение радиоактивного комплекса и его радиометрию, о т л и ч а ю Ш и Й с тем, что, с целью повышения чувствительности анализа, инкубацию антигенасо специфическими антителами проводят в присутствии лекстрана с мол.мас, 20000"50000 при его конечнойконцентрации 3-87.