Способ активации лимфоцитов

СООЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛ ИСТИЧЕСНРЕСПУБЛИН 9) (11 ЯО(5 ц 4 С О Б 33 48 Сятковски й, В.А Трудового Красновенный медицинс 5.23(088.8)иты: выделение,характеристика.1М., Медицин фракциоод ред.1980,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ 6/28-138385. Бюларковскиковй орденгосудар(71) Минскиго Знаменикий институ(54) (57) СПОСОБ АКТИВАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ путем выделения и культивирования мононуклеарных лейкоцитов с последующим внесением в среду культивирования активатора, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения специфичности стимуляции,в качестве активатора используютплазминоген в дозе 5-00 мкг/мл культуры клеток,В качестве контроля служат клетки, к которым добавляют 5-100 мкл среды КРМ 1-1640. За 16 ч до конца культивирования в культуры вводят 2,0 мкКи 5 Н-тимидина (удельная активность 20,6 мкКи/моль), Через 72 ч после начала культивирования клетки обрабатывают холодной57-ной трихлоруксусной кислотой и .нерастворимую Фракцию (ДНК ) собирают на мембранных фильтрах. 40 Количество включенного в ДНК Н - тимидина определяют с использованием толуольного сцинтиллятора ЖС - 106 на счетчике СБС. Количественные данные о включенииН-тимидина в ДНК лимфоцитов представляют собой среднее арифметическое измерений,в пяти параллельных 55 культурах и выражают в импульсах в минуту на 5.10 клеток. Данные представлены в табл. . Изобретенке относится к медицине,в частности к иммунологииЦелью изобретения является повышение специфичности стимуляции лимфоцитов путем использования плазминогена в дозе 5-100 мкг/мл культурыклеток.Способ,иллюстрируется следующимипримерами.П р и м е р 1. Исследование мито1 енной активности стимуляторов вкультуре лимфоцитов селезенки мышей.Исходной клеточной популяцией является популяция клеток селезенки6-8-недельных мьпйей С 57 В 1. Выделение мононуклеарных клеток (лимфоцитыи моноциты) из селезенки мышей проводят путем центрифугирования отФильтрованного через нейлоновую сеточку гомогената на верографин-Фиколе с плотностью 1,087 г/см при400 8 в течение 30 мин.Клетки 5 10 мп ) инкубируют при37 С в 1 мл среды ЕРМО, допол 0ненной 2 ммоль 2-глютамина, 253 А 0 моль 2-меркаптоэтанола,100 ед/мл .пенициллина и 1 О мг/млстрептомицина.К 1 мл клеточной суспензии добавляют 5-10 мкл растворов стимуляторов,30разведенных в среде КРМ 1-1640ТаблицаСтимулятор Имп/мин Индексстимуляции Количество стимулятора,мкг Контроль 289+15,3 Плазмино-. 5 863+40,9 3,1 ген Фитогемагглютинин 20 665 ф 41,2 2,4 В качестве контроля служат клетки, к которым добавляют 5-100 мкл среды КРИ 1-1640,За 4 ч до конца культивирования в культуры вводят 2,0 мкКи Н-ти 5 мидина (удельная активность 20,6 мКи/моль). Через 72 ч после начала культивирования клетки обрабатывают так же, как и в примере 1. П р и м е р 2, Исследование митогенной активности глу-плазминогенав культуре лимфоцитов периферическойкрови человека.Исходной клеточной популяцией является популяция клеток периферическойкрови человека.Дефибринизацию осуществляют при перемешивании 12 мл крови в пробирке,содержащей 25 стеклянных бусин диаметром 2-4 мм, Дефибринированную кровьсмешивают с равным объемом средыКРМ 1-1640, 6-8 мл этой смеси наносятна поверхность 3 мл верографин-фиколав пробирках с внутренним диаметром12-14 мм и центрифугируют при комнатной температуре 30 мин при 400 д.После центрифугирования клетки кровиразцеляют на две. фракции: белый слой,состоящий из мононуклеарных клетокна поверхности, и Фракцию, содержащуюэритроциты и гранулоциты на дне пробирки. Мононуклеарные клетки собираютпипеткой. Клетки 1,10 мл ) инкубируют при 37 С в 1 мл среды ВРМ 1-1640,дополненной 2 ммоль 2-глютамина,3110 моль 2-меркаптоэтанола,100 ед/мл пенициллина и 1 О мг/мл стрептомицина,К 1 мл клеточной суспензии добавляют 5-100 мкл раствора глу-плазминогена, разведенного на среде ВРМ 1-1640173316 Продахгжеггие таба. 2 20 17521131 100 1437+34 2,0 1,6 Вре с л уль иров агия,0 74 97 02 8 а тавитель М. Серова р д Л Микен 897 Редактор Л. Веселовская рректор В. Гирня аказ 50а(43 В 11 ИИПИ Государственн по делам изобрете 113035, Москва, ЖПодписное Тиражго к митета СССткры.: ийская наб ии иРауш 5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,Количественные данные о включенииН-тимидина в ДНК лимфоцитов3представляют собой среднее арифметическое измерений в пяти параллельных культурах и выраженьг в импульсах в минуту на 110 клеток. Данные представлены в табл. 2.Таблица 2 Предлагаемый способ обеспечивает О расширение арсенала веществ для активации лимфоцитов за счет свойствег ,ных организму веществ, Это в свою очередь расширяет возможности изуче.ния механизмов активации лимфоцитов,их функциональной характеристики у больных для оценки состояния ц резервов иммунных. реакций органггз