Способ определения терморезистентности изолированных из печени крыс лизосом

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН И 33 48 Н О Р 26ружбы народо ето роловомы, М.,клетки.1963,ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ САНИЕ ИЗОБРЕ РСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ/Под ред М. Н. Мейс. 404,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРМОРЕЗИСТЕНТНОСТИ ИЗОЛИРОВАННЫХ ИЗ ПЕЧЕНИКРЫС ЛИЗОСОМ(57) Изобретение относится к биохимии и касается исследований кл ч:"ных структур. Целью изобретения является упрощение способа, Способ заключается в следующем. Фракцию лизосом,полученную из печени крыс, инкубируютв 0,7 М,растворе сахаровы с рН б сЗДТА при 15-30 С и о.температурнойчувствительности судят по скоростипонижения оптической плотности суспензии лизосом, 3 табл.Изобретение относится к биохимиии касается исследований клеточныхструктур,Цель изобретения - упрощение спо 5соба.Экспериментальные данные, доказывающие оптимальность значений молярности и рН раствора сахарозы и температуры инкубационной среды, приведены в табл. 1 в .3,Из табл, 1 видно, что при молярности раствора сахароэы выше 0,7 М разрушения лиэосом при инкубации в указанных условиях не происходит. 15Из табл. 2 видцо, что только призначении рН инкубационной среды, равном,6, разрушение лизосом при инкубации в указанных условиях не происходит, 20Из табл. 3 видно, что максимальнойЬЧ была в диапазоне температур от 15до 30 С, Следовательно, этот интервалтемператур инкубационной среды следует считать оптимальным, поскольку изменения термочувствительности в нембыли максимальными.Способ осуществляют следующим образом,Обогащенную фракцию лиэосом получают дифференциальным центрифугирова-,.нием гомогената печени крыс, реэуспендируют в 0,7 М растворе сахароэы,рН 7 до концентрации лиэосомного белка 3-5 мг/мл и используют в качествеисходной суспензии. Последнюю добавляют к предварительно нагретому до15-30 раствору 0,7 М сахарозы, рН 6с 1 мМ ЭДТА таким образом, что начальная величина. зкстинкции составляет щоколо 0,4. Скорость разрушения лизосом измеряют по скорости снижения поглощения при 520 нм (ЬА /мин) приинкубации проб в указанных условияхв течение 1 мин в 1 см термостатированной кювете на регистрирующем спект"рофотометре ДУБ фирмы Белман (СНА).П р и м е р. В работе используютинтактных самцов беспородных белыхкрыс массой 120-180 г, после 48 чголодания. Печень берут у декапитиро"ванных животных. Обогащенную фракциюлизосом получают дифференциальнымцентрифугированием. Далее определениетермочувствительности лизосом прово 55дят согласно предлагаемому спосоуу.Исследуют влияние инкубирования исходной суспензии изолированных лиэосом при 0-4 в течение 24 ч,на термо"резистентность этих частиц. Значениятемпературы инкубированнай среды составляют в интервале от 10 до 50 С,Формула изобретенияСпособ определения терморезистентности изолированных из печени крыс лизосом путем инкубации их в растворе сахароэы с ЭДТА, о т л и ч а.ю щи йс я тем, что, с целью упрощения способа, инкубацию производят в 0,7 М растворе сахарозы с рН 6 при 15-30 С и о температурной чувствительности судят по скорости понижения Оптической плотности суспензии лизосом. Таблица 1,.Влияние молярности растворасахароэы на стабильностьизолированных лизосом Молярность раствора Степень разрусахарозы, М шения лизосом,3 0 0 48 57 76 0,80,7Об0,25 Примеч ание: инкубацию проб прооводят при 15 С в ра" створе сахарозы указанной молярности, рН 7 в течение 1 мин,Таблица 2 Влияние кислотности инкубационной среды на стабильность изолированных лизосом Степень разрушения лизосом, Ж35 19 22 П р и и е ч а н и е: инкубацию проб проводят при 10,5 в 0,7 М растворе сахарозы при указанных значениях рН в течение 1 мнн,1409926Таблица 3 Зависимость терморезистентности изолированных лизосом от температуры инкубационной среды Изменение терморезистентности изолированных лизосом(а Ч) л А /мин Температура инкубационной среды, С0,5 10 20 30 6 40- П р и м е ч а н и е: терморезистентность изолированных лизосом определяют по скорости их разрушения при инкубации проб при указанной температуре инкубационной среды в 0,7 М растворе сахарозы, рН 6 в течение 1 мин. Скорость разрушения лизосом, как функции от температуры инкубационной среды до (Ч ) и после (Ч ) дополнительной инкубации частиц при 0-4 в течение 24 ч используют для расчета ьЧ=Ч Составитель Г, МарченкоРедактор И. Касарда Техред М.Дидык Корректор М, ШарошиЗаказ 3474/40 Тираж 847 Подписно е ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий . 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5