Способ определения активности аргиназы мозга

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9742 А 1 1) 4 С О 1 Ю 33 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ у.,)10. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) 1-й Московский медицинскийинститут им. И.М.Сеченова и Научноисследовательский институт неврологии АМН СССР(56) Авторское свидетельство СССРУ 1212417, кл. О 01 М 33/48, 1984.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИАРГИНАЗЫ МОЗГА(57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - повьппениечувствительности и ускорение способа,Биологическую жидкость обрабатываютраствором формальдегида, наносят насефадекс С, промывают и центрифугируют. Раствор аргинина наносятна колонку и затем промывают колонку раствором трихлоруксусной кислоты.Способ может быть использован длядиагностики неврологических заболеваний.1 135Изобретение относится к медицине,а именно к клинической биохимии иневрологии,Цель изобретения - повышениечувствительности и ускорение способа,Способ осуществляют следующимобразом.1 мл биологической жидкости обрабатывают раствором формальдегидав конечной концентрации 0,1-0,3 М(в зависимости от вида биологическойжидкости). На колонки центрифугирования размером 5 см (контрольи опыт) с набухшим сефадексом С наносят по 1 мн раствора обработанной жидкости, колонку 2-3 раза промывают 2 мл 27-ным раствором хлористого калия, центрифугируют при 700в течение 10-15 с, Далее, черезопытную пробу пропускают 1 мп раствора (содержит 100 мкм аминокислот)аргинина, после чего продукты реакции, оставшиеся на сефадексе, смывают 1 мл 157,-ной трихлоруксуснойкислоты (ТХУ) (в контрольную пробирку вносят 1 мп водного раствора аргинина) .При определении мочевины в химические пробирки вносят 0,5 мп пробы (контроль и опыт), добавляют2 мл рабочего раствора и ставят вкипящую баню на 15 мин, Затем пробуохлаждают в воде, измеряют оптическую плотность на спектрофотометреСфпри длине волны 525 нм,П р и м е р 1, 1 г ткани мозга(большие полушария) кролика гомогенизировали в 9 мп 0,01 М растворатрис-буфера с содержанием хлористогокалия в конечной концентрации130 мкм молей; центрийугировали 10мин при 10 тысообв В мину надосадокобрабатывали 107.-ным растворомформальдегида до конечной концентрации 0,3 ммоля/мп, 2 мп центрифугатананосили на колонку размером 51 смс приспособлением для центрифугирования; дважды (для удаления балластной аргиназы) промывали колонкураствором хлористого калия (240 -250 мкмолей), центрифугировали,вносили водный раствор аргинина(100 мкмоль), промывали колонку 1 мп157-ного раствора ТХУ,Содержание мочевины в надосадочной жидкости определяли с использованием стандартных наборов Фирмы "Ла 9742 2 5 10 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 хема" (ЧССР), Активность ферментапосле обработки предлагаемым методомсоставила 2,1 ед,/г ткани.П р и м е р 2. В крови здоровыхлюдей имеется только печеночно-почечная форма фермента. Исследуемаямозговая форма фермента не присутствует в крови, В то же время активность мозговой йормы фермента удалось выявить в крови больных с нарушением мозгового кровообращения, укоторых зта Форма Фермента переходит в кровь, что видно из следующихданных,Больной Б., 50 лет. Поступил сдиагнозом острое нарушение мозговогокровообращения в бассейне правой средней мозговой артерии на Фоне атеросклероза магистральных артерий головы. В неврологическом статусе: заторможенность, левосторонний гемипарез, двусторонний симптом Кернига,симпток орального автоматизма, патологические симптомы Бабинскогослева и Оппенгейма справа,Динамика активности мозговой формы аргиназы в крови: от 2 ед./л впервые сутки увеличилась до 8 ед./лна 10-й день и до 22 ед./л на 15-йдень от начала заболевания. На 29-йдень, когда исчезли патологическиепирамидные знаки и симптом Кернига,восстановилась двигательная активность в пораженных конечностях, активность мозговой йормы фермента неопределялась.В случаях неблагоприятного течения активность мозговой формы Фермента изменялась незначительно.Больная Л 63 г., находилась вНИИ неврологии АМН СССР с диагнозомострое нарушение мозгового кровообращения в бассейне левой средней мозговой артерии, Левосторонний гемипареэ, Повторные тромбоэмболии мелкихветвей легочных артерий. Ревматический митральный порок сердца. Нарушение сердечного ритма,В неврологическом статусе при поступлении отмечался сопор, симптомКернига с 2-х сторон, нарушение дыхания типа Чейн-Стокка, сходящееся косоглазие, нарушение глотания, сниже"ние чувствительности справа и правосторонний гемипареэ, дисфагия. Вызывались патологические симптомы Бабинского с 2-х сторон, симптом Чураеваслева, симптом Оппенгейма и РедлихаСпособ определения активности аргиназы мозга путем нанесения образцабиологической жидкости на сефадекс6-75, промывания раствором хлористогокалия, введения раствора аргикинас последующим определением мочевины,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения чувствительностии ускорения способа, биологическуюжидкость предварительно обрабатываютраствором формальдегида да конечной . 25 концентрации 0,1-0,3 моль/л, раствор аргинина наносят на колонку,а продукты реакции смывают 10-15 -нымраствором трихлоруксусной жспоты. Составитель Н. ГуляеваРедактор Т.Парфенова Техред Л.Сердюкова Корректор В,Бутяга Заказ 6151/48 Тираж 776 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушекая наб., д.4/5Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г,Ужгород, ул.Проектная,4 з135справа, симптом Мари-Фуа справа. Убольной выявлена сенсо-моторная афа"зия и грубое нарушение высших корковых функций.Неврологический статус в течение24 дней оставался без существенныхизменений,Активность фермента в крови менялась незначительно: на 3-й день 8 ед;13-й день 5 ед.; 23.день 6 ед.Дальнейшее динамическое наблюдение 12 больных с острым нарушениеммозгового кровообращения показало,что возрастание активности мозговойформы фермента происходит лишь в период выздоровления (до 60 ед.), тогда как в острой стадии заболеванияактивность фермента в сыворотке крови колеблется в пределах 2-12 ед./л.Увеличение активности МФФ происходитв биологических жидкостях лишь нафоне появления первых признаков положительной клинической динамики заболевания, а в некоторых случаях предшествует им.Таким образом, определение активности мозговой формы аргиназы в сы 97424воротке крови у больных острыми нарушениями мозгового кровообращенияимеет прогностический характер. 5Предлагаемый способ по точностипревосходит известный, является более простым, занимает меньше времении может быть рекомендован для диагностики неврологических заболеваний,Формула изобретения