Способ определения активности мезофильных молочнокислых стрептококков, используемых для приготовления бакконцентрата

Изобретение относится к молочнойпромышленности и может быть использовано для,быстрого определения активности биомассы путем подсчета количе 5ства клеток мезофильных молочно-кислых стрептококков в ней..Цель изобретения - повышение точности и ускорение процесса,Способ осуществляется следующим 1 Ообразом,Из основного раствора резазуринаготовят рабочий раствор разбавлениемпоследнего прокипяченной и охлажденной дистиллированной водой н соотношении 1:15. Это соотношение подобранон результате опытов, как наиболееоптимальное для быстрого и точногоопределения активности именно меэофильных молочно-кислых стрептококков, 20Только при таком разведении основногораствора резазурина определено оптимальное количество клеток в 1 г биомассы, а именно 42 10", вошедшее вфОрмулу для подсчета, Процент ошибки при данном разведении наименьший,42 10" 50 где К- количество клеток, содержащееся в 1 г исследуемойбиомассы;- количество клеток, содержащееся в 1 г стандартнойбиомассы при обесцвечиванииее н течение 1 мин.; - время обесцвечивания 1 гисследуемой биомассы,42 10 ю Для определения количества клеток в биомассе берут две пробирки с .1 О мл стерильной воды подогретой до 30о28-32 С. В одну пробирку помещают 1 г биомассы, хорошо ее перемешивают с водой так, чтобы не было комочков. В другую пробирку наливают 1 мл рабочего раствора резазурина, Содержимое двух пробирок соединяют в одну, закрывают резиновой пробкой, смешивают путем медленного трехкратного переворачивания пробирки для более полного смешивания, Пробирку помещают в 40 водяную баню с температурой 28-32 С, оптимальной для развития мезофильных молочно-кислых стрептококков, замеряют время обесцнечивания содержимого пробирки, Определив время обесцвечи вания, определяют количество клеток в биомассе по формуле П р и м е р 1, Берут две пробиркис 10 мл стерильной воды при 28 С, Водну пробирку помещают 1 г биомассысимбиоза У 440 а, состоящего из Бггергососсця 1 асг 1 в (16+20 ,), Бгг, асегодп 1 сця 82 б, Бгг, сгешог 1 в 11 В ,хорошо перемешивают ее с водой так,чтобы не было комочков, В другую пробирку наливают 1 мл рабочего раствора резазурина, Содержимое двух пробирок соединяют в одну, закрынаютрезиновой пробкой и смешивают путеммедленного трехкратного переворачивания пробирки. Последнюю помещаютн водяную баню с температурой 28 Си включают секундомер,Обесцвечивание содержимого пробирки происходит за 0,8 мин,По формуле подсчитывают количество бактериальных клеток н 1 г биомассы К = 52,5 10 ,Таким образом, в 1 г исследуемойбиомассы содержится 525 млрд мезофильных молочно-кислых стрептококков,Активность исследуемой биомассы высокая, поэтому ее смешивают с защит-.ной средой н соотношении 1:4,П р и м е р 2, Берут две пробиркис 10 мл стерильной воды при 32 С, Водну пробирку помещают 1 г биомассы,полученной с использованием двухвидовой закваски В 32, состоящей изБгг, 1 асг 1 я (3548+4385+8546+3516)Бгг, асего 1 псцв 254 и хорошо ее перемешивают с водой, В другую пробирку наливают 1 мл рабочегб растворарезаэурина, Содержимое обоих пробироксоединяют в одну, закрывают резиновойпробкой и смешивают, Пробирку помещают н водяную баню с температуройо32 С и включают секундомер,Обесцвечивание содержимого пробирки происходит за. 3,5 мин, Количествобактериальных клеток в 1 г биомассыК = 12 10"Таким образом вг исследуемойбиомассы содержится 120 млрд клеток.Активность ее невысокая, поэтому еесмешивают с защитной средой в соотношении 1:2,По предлагаемому способу результатполучают за 1-5 мин, в то время какпри определении количества клеток иих активности чашечным методом илипосевом биомассы по пределам результаты получают через 3 сут.Если обесцвечивание реэазуринапроисходит за время до 1,5 мин, в1335568 4210"КиФ вах,20 Формула изобретения Составитель И, ПриваловаРедактор И. Горная Техред В.Кадар Корректор А, ОбРУчаР Заказ -4018/22 Тираж 499 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 биомассе содержится до 240 млрд бактериальных клеток высокой активности,1 г биомассы свертывает 1 л молока за 3 ч после высушивания, бакконцентрат в 1 порции содержит до 20 1 О"бактериальных клеток и свертывает 1 лмолока за 4,5-5 ч,Качественные показатели сухогобактериального концентрата зависятот соотношения биомассы и защитнойсреды, что определяется количествоми активностью клеток в биомассе,Быстрое и точное определение количества клеток в биомассе позволяет 15установить правильное соотношениебиомассы и защитной среды и получитьсухой бактериальный концентрат высокого качества и в больших количестСпособ определения активности меэофильных молочно-кислых стрептокок ков, используемых для приготовления бакконцентрата, предусматривающий приготовление основного раствора резазурина, получение рабочего раствора растворением его в воде, отбор иссле- Э 0 дуемых проб, смешивание с рабочим раствором резазурина, выдержку в водяной базе до обесцвечивания, установление продолжительности обесцвечивания и последующий подсчет количестважизнеспособных бактериальных клеток,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения точности и ускоренияпроцесса, в качестве исследуемой пробы используют биомассу меэофильныхмолочно-кислых стрептококков, сме"шивание ее с рабочим раствором резазурина ведут в соотношении 1:15,обесцвечивание проводят при 28-32 С,подсчет количества бактериальных клеток осуществляют по формуле где К - количество клеток, содержащееся в 1 г исследуемойбиомассы;42 1 О" - количество клеток, содержащееся в 1 г стандартнойбиомассы при обесцвечивании ее в течение 1 мин;и - время обесцвечивания 1 гисследуемой биомассы, покоторому оценивают активность мезофильных молочнокислых стрептококков,