Способ выявления тропизма стрептомицетов к водоросли

(5 Р 4 С И 1/00 И 1/14 Н 13/00 РЕТЕНИ ЛЬСТВУ пен(54) СПОСОБ ТОМИЦЕТОВ К (57) Изобре микробиолог ВЛЕНИЯ ТРОПОРОСЛИ СТРЕПбластиологии ние относится к экологии и фи ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИ К АВТОРСКОМУ(56) Звягинцев Д.Г Зенова Г.М.,Михайлов В,Д. Динамика численностии структура видовых популяций актиномицетов-антагонистов в почве. Микробиология", 1982, вып, 3, с. 520-522.51 аЬ 1 ас 1 К.К., М 1 гсйе 1 К. СЬещогасг 1 с гезропвез дп чЬгдо а 181 ро 11 гсцзсо а 1 яа 1 ехсгасе 11 ц 1 аг ргойцссв"."Сапас 1.,1. М 1 сгоЬо 1", 1979, т. 9,р. 964-967. микроорганизмов. Целью изобретенияявляется отбор стрептомицетов для образования устойчивых консорциумов.Суть изобретения заключается в том,что стрептомицет высеивают на твердуюпитательную среду в чашку Петри, наповерхность среды раскладывают 4 мембранных фильтра с диаметром пор1,5 мкм, на 2 фильтра наносят сусзию водоросли с концентрациейб10 кл/мл, оставшиеся 2 фильтра несодержат водоросли (контроль). Послеинкубации фильтры снимают с агара,окрашивают и под микроскопом просчитывают длину мицелия стрептомицета.О положительном тропизме стрептомицета к водоросли судят по отношениюдлины мицелия на фильтре с водоросльюк длине мицелия на фильтре без водоросли (показатель тропизма К ), Наличие положительного тропизма регистрируют при Кт 1, отсутствие взаимодействия - при К1. 2 табл, 130 б 948Изобретение относится к микробиологии, а именно к разделу экологиии физиологии микроорганизмов.Как известно, в естественной среде обитания микроорганизмы находятсяв тесном контакте с другими организмами, поэтому в последние годы придается особое значение изучению взаимодействия микроорганизмов.Целью изобретения является отборстрептомицетов для образования устойчивых кансорциумов,Сущность способа состоит в том,что мицелий стрептомицета, развивающийся на голодном агаре, проникаетчерез поры мембранного фильтра, накотором находятся клетки водоросли.Предлагаемый способ предусматривает следующие параметры подготовкиинокулята стрептомицетов для посева 20на голодный агар.1) Стрептомицеты выращивают на среде, содержащей овсяный отвар. Эта среда является наиболее подходящей дляобразования воздушного мицелия культурами стрептомицетов, а приготовление инокулята стрептомицетов в видемоноспоровой суспензии обусловленонеобходимостью получения на голодномагаре равномерного газона.302) Для получения газона достаточной плотности используют суспензию9в концентрации 10 спор/мл,3) Диаметр пор фильтра составляет1,5 мкм. Выбранный диаметр пор мембранных фильтров обусловлен тем, чточерез поры могут проникать гифы мицелия всех культур стрептомицетов ипрактически не проникают клетки испытанных водорослей. 40Клетки водоросли наносят на фильтрв виде суспензии, содержащей 10 кл/млдля создания достаточной их концентрации на фильтре.45При подборе условий культивирования руководствовались созданием условий освещения и температуры, оптимальных для роста культур стрептомицетов и водоросли, Срок инкубации 7-10 сут обусловлен границами достижения зрелости культур стрептомицетов и водоросли. При разработке методов количественного учета гиф стрептомицетов, проникающих через фильтр, был произведен подбор красителей: использовали сенциановый фиолетовый, метиленовый синий, дианиловый голубой, карболовый эритрозин, Остановились на карболовом эритрозине, так как гриокраске этим красителем наиболее контрастно выглядели на мембранном фильтре живые гифы стрептомицета,П р и м е р 1, Моноспоровую суспензию актиномицета высевают газоном наголодный агар в чашки Петри, сверхупомещают мембранные фильтры, на нихнаносят по одной капле суспензии клеток зеленой водоросли хлореллы, контрольный фильтр остается без водоросли,инкубацию проводят в люминос пате приоосвещенности 12 тыс. лк и 30-33 С,после инкубации фильтры снимают с агара, окрашивают карболовым эритрозином, высушивают, осветляют и просчитывают под микроскопок длину мицелиястрептокицета.Результаты приведены в табл. 1.Данные табл, 1 четко показываютприсутствие положительного тропизмау культур стрептокицетов БТгерГошусея8 гдяео 1 ця штамм 1.0 и Б.р 1 цг 1 со 1 огеясепя штамм 18 к водоросли СЬ 1 оге 11 ачц 18 аг 1 я штамм 23 и отсутствие тропизма у культур стрептомицетовБ,сЬгуяотпа 11 ця штамм К бЗ и Б.ацгеоГас 1 епя штамм ч 2 к водоросли СЬ 1 оге 191 а чц 18 аг 1 я штамм 23 ц,П р и м е р 2. Условия постановкиэксперимента те же, что и в примере 1,с той разницей, ч:о используется сине-зеленая водоросль АрЬапосаряагЬегша 11 я штамм 14. Данные приведеныв табл, 2,Данные табл. 2 показывают, что спомощью предлагаемого способа достаточно надежно выявляется присутствиетропизма у культур стрептомицетовБггерсошусея 8 г 1 яео 1 ця штамм 1 ч 0,Я.р 1 цг 1 со 1 огеясепя штамм 18 МБ,сЬгуяогпа 11 ця штамм К бЗ, Б.ацгео 1 ас 1 епя штамм 429 и отсутствие тропизма у Б,а 1 Ьоп 18 ег штамм 46 к водоросли АрЬапосаряа гЬегша 11 я штамм 14,Таким образом, предложенный способ применяют для определения тропизма мицелиальных организмов (стрептомицетов) к водорослям,При этом предложенный способ является перспективным для решения биотехнологических задач, направленных на выявление специфичности кицелиальных организмов при взаимодействии автотрофов и гетеротрофов в водной среде обитания и почве и создание устойчивых консорциумов.Т а б л и ц а 1 Длина мицелия (см) на фильтре К Присутствие тропизма Культура стрептомицетовСЬ 1 оге 11 а чц 1 раггя шт 234 Без водоросли БГ.гергошусея (Б)цг 1 яо 1 цяштамм 140 1,5 Имеется 2 13- 72 314+25 Б.р 1 цг 1 со 1 огеясепяштамм 18 М 197+ 96 1,3 Имеется 250+25 Б.СЬгуяоша 11 цяштамм К 63 0,9 Отсутствует 2930+ 100 2660+430 Б.ацгеойас 1 епяштамм 42 0,9 Отсутствует 1080+110 1020+140 Т а б л и ц а 2 Длина мицелия (см) на фильтре Культура стрептомицетовт АрЬапосаряа гпегша 11 яштамм 14 Без водоросли БггергошусеяРгдяео 1 цяштамм 140 7547+72 1,12 Имеется 852290 Б.р 1 цг 1 со 1 огеясепя штамм 18 М 686+60 989 184 1,41 Имеется Б,сйгуяоша 11 цяштамм К 63 110 ф 55 1,90 Имеется 210+50 Б.аигеойас 1 епяштамм 42 364 216 137 т 54 2,65 Имеется Б,а 1 Ьоп 18 ега 46 440+50 15660+50 0,02 Отсутствует 3 13069 формула изобретенияСпособ выявления тропизма стрептомицетов к водоросли, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью отбора стрептомицетов для образования устойчивых консорциумов, осуществляют посев стрептомицета на твердую питательную среду, раскладывают на засеянную поверхность среды мембранные фильтры, на которые наносят суспензию водоросли и инкубируют, о степени тропизма судят по отношению (К ) длины мицелия стрептомицета на фильтре с водорослью к длине мицелия на контрольном Фильтре без водоросли, при этом при Кт)1 судят о положительном тропизме.