Способ определения ристомицина сульфата

(19) (11) 1 й 3 31700 ННЫЙ КОМИТЕТ СССРОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ГОСУДАРСТ ПО ДЕЛАМ ТЕН ЬСТВУ ди с1 а(71) Львовский государственный мецинский институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РИСТОМИЦИНАСУЛЬФАТА(57) Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно канализу гликопептидного антибиотика,ристомицина сульфата, используемогов клинической практике для лечениясептическихфинфекций, устойчивых кдругим антибиотикам, Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения числа стадий и повышениеселективности, Для этого используют очищенную сумму лектинов семянмышиного горошка, Размолотые семена(200 г) экстрагируют, перемешивая0,9 Х-ным раствором (1000 мл) МаС 1 3 ч., рН 4,0, Осадок удаляют центрифугированием, доводят рН до 8,0,вновь образовавшийся осадок удаляютцентрифугированием, Из раствора белки осаждают сульфатом аммония, Осадок подсушивают, растворяют в дистиллированной воде, диализуют против0,9 Е-ного раствора, а затем противдистиллированной воды, далее лиофильно высушивают. Получают аморфноевещество светло-коричневого цвета,17-ный раствор которого в 0,97.-номрастворе МаС 1 используют для идентификации ристомицина сульфата,Определение ристомицина сульфата основанона следующих реакциях:1) О-мэннозоспе- Йцифичныйлектин + И-ацетил-галактоз- рраминспецифичный лектин в +компле .лектинов (растворимый); 2) комплекслектинов + ристомицин -ристомицин .3комплекс лектинов (осадок). Реакциипросты в выполненииСпособ можетВеютприменяться в аптеках, контрольноаналитических лабораториях и приконтроле производства ристомицина 4 Рсульфата, Я2Определение ристомицина сульфата основано на следующих реакциях: 1) О- маннозоспецифичный лектин + М-ацетил-О-галактозаминспецифичный лектин -комплекс лектинов (растворимый);2) комплекс лектинов + ристомицин -ристомицин - комплекс лектинов (осадок).П р и м е р 1. К 0,5 мл 17.-ного раствора реактива на О, 9 -ном Май рН 7,0, полученного из семян мышиного горошка, добавляют 0,5 мл 17-ного раствора ристомицина сульфата, Образуется обильный осадокОткрываемый минимум ристомицина сульфата при использовании 17.-ного раствора реактива при визуальном наблюдении - 70 мкг/мл раствора, Реакцию необхо 1 1302199Изобретение относится к областифармацевтического анализа, в частности к анализу гликопептидного антибиотика ристомицина сульфата, используемого в клинической практике,длялечения тяжелых септических инфекцийвызванных устойчивыми к другим антибиотикам стафилококками и энтерококкамиЦель изобретения - упрощение сно Особа за счет сокращения числа стадийи повышение селективности.Способ осуществляется следующимобразом,Для определения ристомицийа сульФата используют очищенную сумму лектинов семян мышиного горошка, которую получают по следующей методике,200 г размолотых семян экстрагируют при непрерывном перемешивании 201 000 мл 0,9 -ного раствора натрияхлорида 1-3 ч, рН раствора доводятдо 4,0 и образующийся осадок удаляютцентрифугированием, Затем рН раствора доводят до 8,0 и вновь образующий 5ся осадок удаляют центрифугированиемИэ полученного прозрачного растворабелки осаждают сульфатом аммония при667.-ном насыщении, Осадок подсушивают, растворяют в небольшом объеме ЗОдистиллированной воды и диализируютпротив 0,9%-ного раствора МаС 1, азатем против дистиллированноч воды,после чего лиофильно высушивают,Получают 350-500 мг аморфного вещества светло-коричневого цвета., 17, -ный раствор последнего в 0,97-номрастворе МаС 1 используют для идентификации ристомицина сульфата.Раствор, содержащий ристомицин 40сульфат, обрабатывают этим реагентомпри рН 4,0-10,0, а о наличии в проберистомицина сульфата судят по образованию осадка, выявляемому визуально, 45Осадок ристомицина сульфата образует О-маннозоспецифичный лектинсемян мышиного горошка, Для его визу .ального наблюдения необходимо неменьше 30 мин, При совместном присутствии в растворе О-маннозоспецифичного и Й-ацетил-О- галактозаминспецифичного лектина осадок ристомицина сульфата образуется сразу последобавления реактива, Это объясняется 55взаимодействием двух лектинов междусобой, В результате образуется ещебопее сложный комплекс, и осадок выпадает сразу,димо проводить в водных или водносолевых растворах в диапазоне рН 4,0100, так как при рН 3,0 и ниже, атакже при рН 10,0 и выше комплексразрушается, Реакцию можно проводитьв диапазоне температур 0 - 56 С, притемпературах выше 65 С происходитденатурация лектинов реагента,П р и м е р 2. Проводят, как пример 1, за исключением того, что устанавливают рН 4,0 и берут концентрацию реагента 1%, Чувствительностьспособа снижается до 200 мкг/мл ристомицина сульфата., Селективность длявыявления ристомицина сульфата сохраняетсяП р и м е р 3, Проводят, как пример 1, за исключением того, что устанавливают рН 10,0, берут концентрацию реагента 57, Чувствительностьреакции выявления ристомицина сульфата снижается до 200 мкг/мл, селективность выявления ристомицина сульфатасохраняется,Способ определения ристомицинасульфата позволяет проводить реакциюв присутствии ароматических аминокислот, белков, моносахаридов, в томчисле О-манноэы, О-глюкозы, 1 -арабинозы и -рамноэы, лептидных и гликоэидных антибиотиков,Реакпия проста в выполнении, Способ может бь 1 ть применен в аптечныхучреждениях, контрольно-аналитических лабораториях, а также при контроле производства ристомицина сульфата Формула и э обретения Способ определения ристомицина сульфата путем обработки пробы химиЗаказ 1212/44 Тираж 777 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5ПроизводсТвенно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул,Проектная,4 ческим реагентом, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа стадий и повышения селективности,в ка 199 4честве реагента используют солевой раствор суммарного препарата лектинов из мышиного горошка (Ч 1 с 1 а сгасса .),а реакцию проводят при рН 4,0-10,0.