Способ определения циметидина в плазме крови

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН К. 31/41 51) РР Р тРо ц11 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН МУ СВИДЕТЕЛЬСТВ Н АВТО экзо жидк инский инсти иим ваС.М.Давыдов,Г.Кукес8)1. А СЬгошаг223-227. ме относится к облаизу эндогенных и(57) Изобретенимедицины, к ан ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ(56) Коятпа 1.,ег1983, ч. 273, р. 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИМЕТИДИПЛАЗМЕ КРОВИ 801296167 А 1 генных веществ в биологическихостях. С. целью повышения точнос ти определения экстракцию циметидина из плазмы крови проводят этилаце татом в присутствии избытка сухого карбоната натрия. Дансилирование ци тидина по остатку имидазола проводят при рН 6. Экстрагируют бензолом промывают 0,5 М бикарбонатом натрия и хроматографируют. Разделение на силикагеле проводят смесью хлороформ;ацетон:метанол;257-ный раствор аммиака в соотношении 86,9: 10:3 1." ;0,05 (но объему), Определение соде жания целевого продукта проводят с помощью флуоресцентного детектора.Изобретение относится к медицине, конкретно к анализу эндогенных и экзогенных веществ в биологических жидкостях.Цель изобретения - повышение точ ности способа.Экстракцию циметидина из плазмы этилацетатом в присутствии сухого карбоната натрия, модифицию циметидина проводят с помощью ДНС-хлорида10 при рН 6,0, причем переводят дансилпроизводное в гидрофобный раствори- тель (бензол) и разделяют хроматографией на силикагеле с помощью смеси хлороформ:ацетон:метиловый спирт:15 :25%-ный аммиак в соотношении 86,9; ."10:3,1;0,05 (по объему) в использованием Флуоресцентного детектора.Способ осуществляется следующим образом. Экстракцию циметидина из плазмы крови проводят этилацетатом в присутствии избытка сухого карбоната натрия, что создает необходимое для перехода циметидина в органический растворитель высокое значение рП и иопной силы, и приводит практически к количественному извлечению препарата. Дансилирование циметидина по остатку имидазола проводят при низком значении рН (рН 6,0), что зна- " чительно уменьшает возможность образования побочных Флуоресцирующих веществ, в т.ч, ДНС-пептидов и аминов, переходящих в этилацетат при экстракции из плазмы. Экстракцию 35 ДНС-циметидипа из реакционной смеси проводят с помощью неполярыего растворителя-бензола с поспедующей промывкой бензольпого экстракта водным 0,5 М бикарбонатом натрия, чтопозволяет количественно извлечь ДНС-циметидин с. минимальными флуоресцирующими примесями. Разделение хроматографией на силикагеле проводят смесью хлороформ:ацетон:метиловый спирт:25%-ный аммиак в соотношении 86,9;10;3, 1:0,05 (по объему) с использованием флуоресцентного детектора,П р и м е р 1. Изучение Фармако" кинетики циметидина при внутривенном введении препарата.Больной Т., 47 лет, поступил в городскую больницу с диагнозом язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, Больному вводили в локтевую вену 200 мг циметидина (фирма "Ог 1 оп" Финляндия) в 5 мл 0,9%-ного раство Среднее значение коэффициента детерминации, найденное для процесса распределения лекарственного средства в крови (обследовано 12 больных), составило 0,9774, а для процесса элиминации 0,9533.Элиминация циметидина при внутривенном введении;Время, мин Концентрация,мкг/мл 09,65 6,90 4,83 ра ИаС 1 внутривенно, струйно. Забор крови произвоцили из локтевой вены другой руки с помощью катетра (фирма "Чуоп", Франция) через следующие временные интервалы: 5,10,15,30,60, 120,240,300 и 360 мин. Кровь центрифугировали при 3 тыс.об./мин, Плазму отбирали и хранили при -20 С.К 1 мл плазмы добавляли сухой карбонат натрия. до насыщения (150 мг) и 2 мл этилацетата. После 5-минутного встряхивания смесь центрифугировали и 1,5 мл этилацетатного экстракта, упаривали при температурео50 С в токе азота, К сухому остатку добавляли 0,2 мл 0,17 М Фосфатного буфера (рН 6,0) и смесь инкубировали при 37 С в течение 30 мин. Дансилциметидин экстрагировали 1,5 мл бнзола при сильном встряхивании. Водную и органическую Фазы разделяли центрифугированием бензольный экстракт промывали 0.,5 М раствором карбоната натрия и водой (по 0,2 мл) .мл бепзольного раствора ДНС-циметидина упаривали при 50 С в токе азота. Сухой остаток растворяли в 0,5 мл подвижной Фазы и аликвоту (50 мкл) наносили на колонку хроматографа. Определение дансилциметидина проводили на жидкостном хрбматографе фирмы "А 1 гех" с инжектором на 50 мкл и колонкой снеобращенным силикагелем фирмы Рагг.1 з 11 РХБ 5/25 (250 х 4,6 мм) .3Подвижной фазой служила смесь хлороформ:ацетон:метиловый спирт:25%-ный аммиак в соотношении 8,6; 10:3, 1::0,05 (по объему). Скорость элюциимл/мин, скорость ленты на самописце 20 см/ч. Детекцию проводили с помощью Флуориметра Фирмы "С 11 зопТираж 596 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5 Заказ 648/8 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул,Проектная, 4 П р и м е р 2, Изучение фармакокинетики циметидина при оральном введении.Через сутки после внутривенного введения тому же больному вводили через рот 400 мг циметидина (фирма "Отоп", Финляндия). Забор крови производили из локтевой вены с помощью катетра (фирма "Чуцоп", Франция) в следующие. временные интервалы: 15, 30, 45 мин, 1,2,3,5,6 и 7 ч, Дальнейшая обработка крови и анализ проводились точно также, как описано в примере 9 1. Результаты определения концентраций циметидина в крови представлены в таблице. Среднее значение коэффициента детерминации, найденное для процесса элиминации лекарственного средства из организма при оральном введении препарата (обследовано 12 больных), составило 0,9534. Способ позволяет проводить анализциметидина в плазме крови с линейной зависимостью между высотой пика на хроматограмме и концентрацией в кро ви в пределах 0,05-10 мкг/м, что соответствует концентрациям, наблюдаемым в крови при лечении больных данным препаратом при любом способе введения. Среднее квадратичное отклонение метода составляет менее 57.В способе линейность в соотношении концентрация лекарственногосредства в плазме - высота пика на 15хроьгатограмме соблюдается в диапазоне 50-10000 нг/мл, т,е. диапазон концентраций шире чем в прототипе (30700 нг/мл) и охватывает интервалконцентраций наблюдаемых у больных 20от 0 до 12 ч после введения препарата, при оральном и внутривенном введении. Формула изобретения 25 Способ определения циметидина вплазме крови путем экстракции органическими растворителями с последую-щим разделением на силикагеле жИдкостной хроматографией, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения точности способа, экстракциюиз плазмы проводят этилацетатом вприсутствии сухого карбоната натрия,перед хроматографией цимитидин модифицируют дансилхлоридом при рН 6,0,переводят дансилпроизводное в бензол,хроматографическое разделение на силикагеле проводят смесью хлороформ::10:3, 1:0,05, а определение содержания целевого продукта проводят с использованием флуоресцентного детектора.