Способ идентификации антител к поверхностному антигену гепатита в

Союз Советских Социалистических Республик(43) Опубликовано 07.10.82, Бюллетень Ъ 3 (45) Дата опубликования описания 07.10.82 1616-07(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ АНТИТЕЛПОВЕРХНОСТНОМУ АНТИГЕНУ ГЕПАТИТА В повышение Изобрететтие относится к медицине иможет быть использовано в диагностикегепатотропных заболеваний.Известен способ идентификации антител к поверхностному антигону гепатита Вв реакции встречного иммуноэлектрофореза 11).Цель изобретения -ствительности способа.Цель достигается тем, что при осуществлении способа идентификации антителк поверхностному антигену гепатита В вреакции встречного иммунозлектрофорезапробу исследуемого образца последовательно разводят стандартной сывороткой,содержащей поверхностный антиген гепатита В, полученные разделения инкубируют в течение 30 - 60 мин и наличиеспецифических антител определяют поснижению титра антигена стандартнон 20сыворотки,П ри м е р 1. На тщателыно обезжиренную стеклянную пластинку размером9 Х 12 (13 Х 18 см) наносят тонкий слой(3 - 4 мм) 1%-ного агара на ацетат-мединаловом буфере, рН 8,3 - 8,6,В застывшем агадире строго по трафарету вырезают лунки, которые располагаютрядами так, чтобы верхний находился состороны анодного, а нижний - катодного электродов. Диаметр лунок - 4 мм, расстояние между центрами лунок по горизонтали и веопикали - 7 мм. Элекпродные сосуды заполняют соединительным буфером - тем же что и для приготовления агара.Параллельно с этим в пластмассовой пластине для гемагглютинации или в стеклянных пробирках лроводят последовательное пипрование исследуемого образца, иапользуя в качестве растворителя сыворотку, содержащую поверхностный антиген гепатита В в титре 1: 16 - 1: 32, Всего готовят .10 последовательных разведений от 1:1 до 1:10 (1:1, 1:2, 1:3, 1:4,1: 10) в объеме 0,1 - 2,0 мл. Содержимое тщательно перемешивают н инкубируют при 37 С и течение 30 - 60 мнн. После этого все пробы вносят в лунки со стороны катодного электрода. В лунки со стороны анодного электрода вносят специфические антитела тест-системы. Параллельно с исследуемыми образцамн производят титрование стандартной сыворотки, содержащей поверхностный антиген гепатита В. Эти контрольные пробы также вносят в соответствующие лунки, Таким образом на пластине с агаром одновременно исследуются контрольные и испытуемые образцы.Формула изобретения Составитель С. Малютина Техред И. Пенчко Редактор Е. Хейфиц Корректор С. файн Заказ 1026/742 Изд,241 Тираж 717 ПодписноеНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж.ЗБ, Раушская наб., д. 4/5 Тип. Харьк. фил. пред. Патент Встрс шый цмму)оэлсктрофорсз прова. дят,в течение 90 мин лри силе тока 35 - 40 мЛУчет результатов проводят в проходящем свете на темном фоне. Первоначально учитывают контрольные разведения стандартной сыворотки, содержащей поверхностный антпген гепатита В (для удобства попользуют обратные разведения: титр 1: 6 - учитывается как титр 6), затем - титр а)тигс)а исследуемого образца. Полученные данные рассчитывают по следующей формуле: где ПИ - процент ингибиции,К - обратный титр стандартного ан виген а;20О - обратный титр исследуемогообразца,Положительным результатом реакциисчитается вел ичи)а процента ингпбиципбольше 10%2 оИспользование предложенного способапозволяет осуществлять диагностику специ.фических анпител к поверхностному анти.гену гепатита В у доноров крови, больныхвирусным гепатитом (острых и хроничес.ких), в группах высокото риска заражениявирусным гепатитом и при выборе сырьяи производстве специфического направле;:ного иммунотлобулина потратив вирусногогепатита типа В, что улучшает системупрофилактических, противоэпидемическихмероприятий и позволяет организоватьпромышленный выпуск специфичных противовирусных поофилактическшх и лечебных препаратов,40Всего было Обследовано 1560 образцовсывороток плацентарной и абортной кроьи. В реакции встречного иммуноэлектрофореза обнаружено 3 (0,19%1 положительных образца в то время как при использовании предложенного способа 24(15,8%) образцов.Предложенный способ в 83 раза чувствительнее, чем способ встречного иммуноэлсктрофореза, прп его массовом применении. Все пологкительпьс образцы были идентифицированы па наличие специфичеснпх антител в методе пассивной гемагглютпнацпи. Этп результаты указывают на 85 - 90% совпадение между двумя методами.Е(роме того, было исследовано 20 образцов сывороток, содержащих антитела к поверхностному антигену генапита В. В реакции встречного иммуноэлектрофореза выявлено 4 образца, в ,реакпни пассиьной гсмаплюти)ации19 образцов, в радиопммунном методе - 20. Прп приыснсцип предлоисенного способа было обнару"кено 15 образцов.Предложенный апособ превосходит метод встречного иммуноэлектрофореза, незначительно уступает реакции, пассивной гсмап лютинации и значительно отличается от радиаиммунного метода, Все это указывает )а значительные перспективы его применения.Предложенный способ более чувствителен, что увеличивает его информативность ,и тем салым повышает свойства, неоохо. дпмые при диагностике и лечении ряда гспатотропых заболеваний Способ идентификации антител и поверхностному антпгену гепатита В в реакции встречного иммуноэлектрофореза, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, пробу исследуемого образца последовательно разводят стандартной сывороткой, содержащей поверхностный аптиген гепатита В, полученные разведения инкубируют в течение 30 - 60 мин и наличие специфических антител определяют по снижению титра антигена стандартной сыворотки. Источник информации, принятый вовнимание при экспертизе: 1, Фримель Х. Иммунологнческие методы. Ч., Мпр, 199.