Способ определения синдрома цилиарной дискинезии бронхов

СОКИ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А фРР".;Рлое 1 И ИЬЯ кр "Гы. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБР ВТОРСКОВВГ С 8 ИДЕТЕЛЬСТВ 119) 111)15 4 С 01 Н 1/28(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНДРОМАЦИЛИАРНОИ ДИСКИНЕЗИИ БРОНХОВ(57) Изобретение относится к функциональной диагностике в пульмонологи позволяет осуществить дифференциацию органических и функциональныхнарушений мерцательного эпителия у больных. Берут образец эпителия слизистой бронхов и помещают его в 453-ный глицерин в присутствии 20 ммоль фосфата натрия (рН 7,0) и 120 ммоль хлористого калия, инкубируют 24 ч при 4 С. Пермеаболизированный препарат помещают в реактивирующий буфер состава, ммоль: 120 фосфата натрия (рН 7,0), 120 хлористого калия, 5 хлористого магния, 5 АТФ, 2 мкг/мл тестикулярной гиалуронидазы. Частоту биения ресничек регистрируют методом фазово-конт- растной микроскопии в 100 полях зре-. ния. При наличии или отсутствиис подвижности ресничек диагностируют . функциональный или органический характер цилиарной дискинезии соответственно. С:Изобретение относится к медицинеа именно к способам функциональнойдиагностики в пульмонологии,Цель изобретения - дифференциацияорганических и функциональных нару в 5шений мерцательного эпителия у больного путем пермеаболизации мембранглицерином и реактивации образцаАТФ с последуюшим наблюдением замерцательной активностью ресничекэпителия бронхов,Способ осуществляют следующимобразом.У больных с помощью щеточной биопсии отбирают образец эпителияслизистой бронхов и помещают его в457-ный глицерин, содержащий 20 ммог:ьфосфата натрия (рН 7,0), 120 ммольКС 1, инкубируют при 4 С в течение24 ч. В результате инкубации у20мембран эпителиальных клеток появляется проницаемость для АТФ, который используется в качестве субстрата динеиновой АТФ-азой осуществля 25ющей механохимическое сопряжение вресничках,Пермеаболизированный препаратпомещают в реактивирующий буфер,содержащий, ммоль: фосфат натрия 120(рН 7,0), КС 1 120; МдС 1 5 и АТФ 5,ЗОВ буфер добавляют тестикулярнуюгиалуронидазу (2 мкг/мл) для гидролиза вязких мукополисахарицов, препятствующих регистрации биения ресничек.35Реактивированный препарат наблю- .дают методом фазово-контрастной микроскопии регистрируя частэту биенияресничек в 100 полях зрения, В качестве контроля исследуют подвижность ресничек в биоптате не позднее;чем через 30 мин после отбора материала без пермеаболизации и реактивации, т.е. за счет эндогенного АТФ,Отсутствие движения ресничек в конт 45рольном препарате и наличие его вреактивированном препарате свидетельствует о том, что в результатепоражения не затронут двигательныйаппарат ресничек, а отсутствие движения как при реактивации, так и вконтроле свидетельствует о поражениях, затрагивающих динеин-тубулиновыйкомплекс, играющий ключевую роль вбиении ресничек.55П р и м е р 1. Больная М 12 лет.Клинический диагноз: кистозная гипоплазия верхней доли правого легкого, хроническая пневмония, двусторонний гайморит. У ребенка постоянный кашель с отделением гнойной мокроты. Над правым легким укорочение перкуторного звука, влажные хрипы, На рентгенограмме груцной клетки отме; чено уменьшение объема правого легкого, полостные образования в области верхней доли. При бронхоскопии выявлен двусторонний гнойный эндобронхит,При исследовании предлагаемым способом выявлены следующие нарушения функционального состояния мерцательного эпителия слизистой бронхов: клетки мерцательного эпителия контрольного препарата значительно мацерированы, большая часть их лишена ресничек или имеет неподвижные реснички, незначительная часть имеет подвижные реснички. В пермеаболизированном и реактивированном АТФ препарагах обнаружено также небольшое количество клеток с подвижными ресничками.Ребенку назначают курс антибиотикотерапии, Проводят шесть бронхоскопических санаций. Состояние больной" улучшилось. Активность эндобронхиальных изменений уменьшалась. При повторном обследовании после проведенного лечения в контрольном и пермеаболизированном препаратах слизистой бронхов у больной выявлено уменьшение степени мацерации клеток мерцательного эпителия и значительноеувеличение процента клеток с подвижными ресничками, Это свидетельствует о функциональном характере нарушения подвижности ресничек и возможности восстановления нарушенных функций при адекватной терапии.П р и м е р 2. Больная К., 9 лет. Клинический диагноз: синдром Картагенера (обратное расположение органов, поражение легких, синусит). У ребенка кашель с отделением гнойной мокроты, одышка, Над легкими с обеих сторон обилие влажных хрипов, На рентгенограмме грудной клетки деформация легочного рисунка, В области верхней доли - слева - кистозные образования. Радиоизотопное исследовазз ние регионарной вентиляции с Хе выявило дефект заполнения в области нижних,прлей, смешанный тип вентиляционных расстройств с преимущественно рестриктивными изменениями в нижних1288537 Формула из обре те ния Составитель М, ПознякРедактор А, Лишкина Техред Л.Олейник Корректор В. Бутяга Заказ 7798/39 Тираж 799 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Произвбдственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная,отделах. На бронхограмме правого .легкого - гипоплазия нижней доли с кистозными образованиями. При бронхоскопии обнаружен двусторонний гнойный эндобронхит. 5При исследовании предлагаемым способом в контрольном и пермеаболизированном препаратах мерцательного эпителия бронхов обнаруживают клетки только с неподвижными ресничками, 10 что свидетельствует о наличии нарушений в двигательном аппарате ресничек.Назначают антибиотикотерапию,осуществляют санацию бронхиального дерева, Состояние ребенка несколько 15 улучшилось. Однако сохранились значительные физикальные изменения влегких, гнойный эндобронхит.При повторном обследовании не об. - наружено восстановления подвижности 20 ресничек ни в контрольном, ни в пермеаболизированном препаратах. Данные исследования предлагаем,им способом подтверждены электронно-микроскопическими исследованиями, выявившими 25 отсутствие динеиновых ручек в структуре аксонем ресничек, Наличие такого структурного дефекта определяет неподвижность ресничек,Таким образОм, необратимый характер изменений ультраструКтуры ресничек мерцательного эпителия обусловилстойкую цилиарную неподвижность органического характера, Это, очевидно,определяет тяжесть течения процесса, отсутствие выраженного эффектатерапии и свидетельствует о неблагоприятном прогнозе,Способ определения синдрома цилиарной дискинезии бронхов путем микроскопического исследования биоптата их слизистой, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью дифференциации органических и функциональных нарушений мерцательного эпителия у больно", го, биоптат пермеаболизируют глицерином в присутствии натрий-фосфатного буфера и хлористого калия, затем по" мещают его в буфер, содержащий хлористый калий, хлористый магний и тестикулярную гиалуронидазу, и при наличии или отсутствии подвижности ресничек определяют соответственно функциональный или органический характер цилиарной дискинезии.