Способ определения активности грамицидина

СОКИ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 1/02, 1/06 1 И 3 ЫЙ НОМИТЕТ ССС ОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТГОСУДАРСТВЕ ПО ДЕЛАМ И ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ(21) (22) (46) (71) унив СО АН л, У 33 государственныйтитут биофизики ч, И,Ю. Виделец 8)(53) (56) 1,9,68 я фармакопея СССР,Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 3828354/2824.12.8407.09.86. БюКрасноярскийрситет и ИнСССРВ. Б, ГуревН, Шендеров615.77.99(0Государстве(54) СПОСОБ ОПРКДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ГРАМИЦИДИНА С(57) Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - сокращение времени анализа. Готовят бактериальную суспензию. Стандартный и испытуемый препараты грамицидина С в разных разведениях, помещают в кюветы люминометра и добавляют туда по 1 мл бактериальной суспензии. В течение 20 мин регистрируют свечение. В опытной пробе определяют степень падения люминесценции по сравнению со стандартом. 2 табл.с1255920 Таблица 1 ПробаКонцент- рация Эксперимент Расчетная концентрация антибиотика,ед/мл грамицидина,ед/мл 0,16 0,09 0,13 0,27 0,22 0,28 0,45 0,35 0,41 Стандарт 30 20 Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано для определения активности грамицидина С,Цель изобретения - сокращение времени анализа и его упрощение.Цель достигается за счет использования в качестве тест-объекта суспензии РЬо 1 оЪас 1 егйпп 1 е 1 орпа 11 п.,что позволяет оценить активность антибиотика по степени падения люминесценции,Культуту РЬо 1 оЬаст,егЬпп 1 еодпММвыращивают на полусинтетической среде до достижения максимальной интенсивности свечения. Готовят бактериальную,суспензиюпутем центрифугирования и ресуспендироввния в фосфатносолевом буАере до концентрации око 10ло 10 кл/мл. Полученную суспензиюхранят при +4 С до использования неболее 2-х суток).Для проведения анализов используют бактериальную суспенэию, содержащую от 1 10 до 2 10 кл/мл.25Концентрацию грамицидина определяют следующим образом.Стандартный и испытуемый препараты грамицидина в разных разведенияхпомещают в кюветы люминометра туда 30же добавляют по 1 мл бактериальнойсуспензии. В течение 20 мин регистрируют свечение на ленте самописцаот всех кювет. Затем определяют степень падения люминесценции в опытнойпробе по сравнению со стандартом.П р и м е р 1. Для получения исходного препарата индикаторных бактерий штамм РЬо 1 оЪас 1 егВлп 2 еодпа 11 п.засевают в 100 мл полусинтетическойсреды, Колбу с культурой инкубируютопри 28 С на качалке, регистрируярост и развитие люминесценции описаннь.и методами, После достижениямаксимальной интенсивности свеченияклетки отделяют от среды центрифугированием (5000 я, 10 мин) и суспендируют в 10 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7,1, содержащего 0,5 М ИаС 1.Полученная таким образом суспензия1 Осодержит около 1 П кл/мл и можетхраниться без значительной потерилюминесцентной активности в течение2 сут при +4 С,Количественное определение грамицидина основано на сравнении степени угнетения свечения разными,концентрациями стандартного и определяемого препаратов,Исходную суспензию бактерий разводят в фосфатно-солевом буфере доконечной концентрации 5 10 кл/мл,В кюветы наливают по 1 мл бактериальной суспензии и такое количествостандартного раствора антибиотика,чтобы его концентрация в кюветахсоставляла 20 ед/мл, 25 ед/мл,30 ед/мл. В качестве опытного образца в кюветы с суспензией вносят известное количество того же стандартного раствора грамицидина. Все пробыстандартные в двух, а опытные в трехповторностях помещают в установкув которой регистрируют люминесценцию (3 ) в течение 20 мин на лентесамописца,При обработке результатов в качестве количественной меры степениугнетения свечения используют параметры, равные отношению свеченияпосле 15 мин контакта бактерий с антибиотиками к его исходному уровню (3/1 )Значения этого параметра усредняют по говторностям и заносят втаблицу.1255920 Продолжение табл,Проб оицентациярамиидина, / ксперимент ед пытные 2 5 ций 108, 5 10 , 1 10кл/мл. Кажз разведений разливают в кюве мл, к которым добавляют 23, 9 и 32 ед/мл грамицидина, Реируют свечение всех кювет в ие 20 мин и определяют степень ения свечения эа 15 мин.контак антибиотиком. Результаты изме- сведены в табл. 2.блица 2 я к калибровочют расчет -в пробе. 20 тными интибиотика ты по 26, 2 гистр течен нет успени нцентраа Кон Концентрациябактерийв суспензии,,31 концентра= степени уг концентрактически зволяет ормула изобретени В указанном ций бактерий з нетения люмине ции антибиотик линейный харакапазон симост б определения а С путем контакекта с антибиотценкой его дейс о т л и ч а ю щ тивности ирования Спосо мицидина тест-объ дующей о объект,что, с целью сокращее носит р, чтоходимы ом с послеия на тестпроводиния,зме я ем,авременикачествеку добав1 еорьа10- 2.т В ения, в лиза и его упротест-объекта ксуспензию РЬоСос концентрацией мя анализа нию с 20 ч также сокр оставляе о ют нтибиоти асСегьцш клеток 1 ть антиб падения сравн собу, ций з по ку ках П ому с и 8 счет устрьтивировантри,тика опреминесценции мл, аактивн яют по степе 45/ Тираж 778 БНИ 11 И За писно оектная, 4 Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород По полученным значениям дого из экспериментов строят ный график и по нему определя ную концентрацию антибиотика Расхождение между расче истинными концентрациями а в пробах не превышает 107,П р и м е р 2. Исходну зию бактерий разводят до кощается число операнения ряда операцийю бактерий на чашРасчетнаяконцентрация антибиотика,едУмл