Способ определения устойчивости эритроцитов

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ путем заборакрови, получения взвеси эритроцитов,К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 21) 373301 2/28-14(71) Ордена Ленина и ордена Трудо:вого Красного Знамени научно-исследо- вательский институт педиатрии АМН СССР(72) В.В.Банкова и Ю.А.Юрков (53) 616.155.1 (088.8) инкубации и определения степенигемолиза и содержания малоновогодиальдегида, о т л и ч а ю щ и й -с я тем, что, с целью сокращенияколичества крови, необходимого дляанализа, и времени определения,инкубацию проводят в течение 1 О 15 мин, затем пробу центрифугируют,определяют степень гемолиэа в супернатанте, смешивают супе 9 йатант иосадок и определяют в этой пробесодержание малонового диальдегида, аустойчивость эритроцитов определяютпо отношению содержания малоновогодиальдегида к степени гемолиза,которое пропорционально устойчивости эритроцитов.руппы дет ошеннь новП ные,Зф 05+Оэ 75 0,54+0 0,4 Г группа недоношенных детей, ь = 1.5 063 3+0,30 0 6+О 1Изобретение относится к медицина;а именно к способам определения мембранных нарушений у новорожденных приразличных патопогических процессах,сопровождающихся изменениями липицкой пероксидации,Цель изобретения - сокращение количества крови, необходимого дляанализа, и времени определения.Пример осуществления способа,0,15 мл (3-4 капли) крови помещаютв пробирку с 3 мл физиологическогораствора с цитратом натрия (100 мл+20 мл 0,2 й раствора соответственно). Эритроциты трины отмываютфизраствором и 0,07 мл отмытых эрит,роцитов разбавляют 1,33 мл 25 еМ Трис-НС 1. буфера (рН=7,4) . Затемв три пробирки помещают по 0,4 мл .взвеси эритроцитов. В первую пробирку добавляют 0,43 мл буфера и0,02 мл 1 .-ного раствора сапонина,во вторую - 0,45 мл буфера, втретью - 0,3 мл буфера + 0,1 мл0,5 мМ аскорбата.и 0,05 мл0,3 мМ раствора сернокислого железа, Вторую и третью пробирки помещают в баню при 37 С на 1 О мин,непрерывно помешивая, затем центрифугируют 1 О мин при 1500 об/мин ив надосадочной жидкости определяютвыход гемоглобина по отношению кпробе с полным гемолизом (проба У 1с сапонином). При этом надосадочную.жидкость переносят в кюветудля счета пастеровской пипеткойи после измерения экстинции при532 им полностью сливают в ту жепробирку, перемешивая осевшие зрит .роциты. Затем в эту же пробу добавляют 0,5 мл 30 ТХУ, 0,15 мл 5 н,Соляной кислоты и 0,6 мл 0,67 -нойтиобарбитуровой кислоты. Пробы.встряхивают и ставят в баню при 9095 С на 20 мин, развившуюся окраску после осаядения осадка спектрофотометрируют при 532 нм, Расчет про 219967 Вводится по коэффициенту молярнойэкстинции, равному 1,56 х 10,и ответ выражают в наномолях малонового диальдегида (МДА) на 106эритроцитов.В таблице показано количествоМДА в эритроцитах, степень гемолиэаэритроцитов и коэффициент устойчивости (отношение этих параметров) 1 О у доношенных и недоношенных детейв первые 10 дней их жизни.Как видно из таблицы, у недоношенных детей с небольшим срокомнедоношенности (гестационный воз раст 36 недель) и без видимых отклонений в весе тела и развитии (наиболее благополучные" новорожденные, 1 группа) степень гемолиза иколичество МДА в эритроцитах вьппе, 211 чем у доношенных новорожденных, тогда как коэффициент устойчивости упервых не изменен. Эти данные указывают на то, что у недоношенныхдетей 1 группы, несмотря на повы шенное образование МДА в эритроцитах, нет.его накопления и, видимо,структурно-Функциональные свойствазритроцитов не нарушены. У недоношенных детей 11 группы с тем же гестационным возрастом, но с внутриутробной гипотрофией (маловесныек сроку), отмечается еще большееколичество МДА в эритроцитах, нобез увеличения ихаутогемолиза вусловиях,п чего.,Коэффициентустойчивости значительно увеличен,Еще более повышенным этот коэффициент у детей с глубокой недонОшенностью, у которыхчаще отмечаются энцефалопатии (наиболее "неблагополучные"дети).Таким образом, коэффициент устойчивости пропорционален степениустойчивости мембран эритроцитов иуказывает на степень изменения структурно-функциональных свойств мембранэритроцитов.% Р с 0,05 с группой доношенных новорожденных,Р0,05 с Х группой недоношенных детей. Редактор Т.Кугрышева Заказ 1317/52 Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул. Проектная, 4 П группа недоношенных детей И= 16 111 группа недоношенных детей,Н= 14 Составитель Н. ГуляеваТехред В.Кадар Корректор С,Шекмар