Способ дифференциальной диагностики тиреотоксического и нетоксического зоба у детей

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 091 (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯцК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И О 1 НРЫТИЙ(7 1) Ленинградский ордена ТрудовогоКрасного Знамени педиатрический медицинский институт(56) Авторское свидетельство СССР У 602162, кл. А 61 В 10/00, 1978.(юА 6 1 В 1 О/00 6 0 1 Р 33/ 48 определения активности фермента вкрови, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью ранней диагностики, вэритроцитах определяют активностьсупероксиддисмутазы и при значенияхее у детей в возрасте 3-12 лет1, 41-1, 69 усл. ед, /мп и 1, 041, 26 усл, ед. /мл диагностируют соответственно тиреотоксический и нетокси"ческий зобы, а при значениях активности супероксиддисмутазы 1,691, 87 усл. ед. /мл и 1, 26-1, 48 усл. ед. /мпв 13"14 лет диагностируют тиреотоксический и нетоксический зобы соответственно.Изобретение относится к педиатрии,точнее к лабораторным способам дифференциальной диагностики тиреотоксического и эутиреоидного увеличениящитовидной железы у детей.Цель изобретения - проведениеранней диагностики тиреотоксическогои нетоксического зобов у детей путемопределения в эритроцитах активностисупероксиддисмутазы.Способ осуществляют следующим образом,У ребенка с увеличенной щитовидной железой берут 1-2 мп крови, в,качестве антикоагулянта используютгепарин. Эритроциты отмывают отплазмы физиологическим раствором3-4 раза с повторным центрифугированием (6 тыс.об./мин при= 4 С),ьОтмытые эритроциты геомолизируютдобавлением раствора трис-НС 1(5 мИ) в соотношении 1: 10. Гемоглобин осаждают смесью этанола с хлороформом (соотношение 1:0,25:О, 15) споследующим перемешиванием и центри 1)угированием (12 тыс.об./мин при= 4 С) По 15 мин.Об активности фермента в нацосадочной жидкости судят по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия в присутствии НАДН и феназинметасульфата,Инкубацию осуществляют в течение 10 мин в темноте при комнатной температуре (20-22 С) в аэробных усоловиях, В состав инкубационной смеси входят 1 мкИ ЭДТА, 1 мг жела- тины, 0,407 мИ нитросинего тетразолия, 1,8 мкИ Феназннметасульфата и 0,1 мл 1 мИ раствора НАДН . Общий объем инкубационной смеси доводят до 3,0 мл Фосфатным буферным раствором (О, 15 И) с рН 7,8. В контрольной пробе содержатся всекомпоненты реакционной смеси за исключением препарата Фермента. НАДН добавляют в контрольную и опытную пробы в последнюю очередь, В опытную пробу помещают 0,04-0,06 мл надосадочной жидкости, что вызывает торможение восстановления нитросинего тетразолия от 30 до 707, Наблюдают линейную зависимость между объемом надосадочной жидкости (количеством фермента) и скоростью ферментативной реакции. Измерение проводят на спектрофотометре при длине волны 540 нм. 214090 2 Степень ингибирования определяют по следукзцей Формуле:т - " Е . 100),Екгде Т - процент ингибирования скорости реакции,Е - оптическая плотность инхукбационной смеси в отсутст вии фермента,Е - оптическая плотность инкубационной смеси в присутствии фермента.Активность супероксиддисмутазы 15 выражают в условных единицах. 503ингибирования скорости реакциисоответствует одной условной единице (1 усл.ед.),Т100 - Т )где А - количество условных единицфТ - процент ингибирования скорости реакции.25 Полученное количество условныхединиц относят к 1 мл эритроцитови к 1 мг гемоглобина.0,14 Ау )30О, 02667 А7 Е У.агде А, - активность фермента,(0,024 н.) при длине волны45540 нм,О, 14 - постоянный коэффициент,отражакиций разведениеэритроцитов;0,0266 - постоянная цифра,Юскладывающаяся изразведения эритроцитов и постоянного коэффициента экстинкции (190,5) 1 г гемоглобина в кювете 3 см при дли 55 не волны 540 нм.Активность супероксиддисмутазыэритроцитов у детей с зобом сравнивают с активностью Фермента в контСоставитель И,ПознякТехред А.Бабинец Корректор А.Зимокосов Редактор И.Петрова Заказ 811/5 Тираж 659 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 12рольной группе здоровых детей соответствующего возраста.П р и м е р 1. Больная П-ва,возраст 9 лет. Поступила с жалобамина раздражительность, увеличениещитовидной железы. При поступлениищитовидная железа диффузно увеличена(11 степени). Клиническая картинатиреотоксикоза стерта. В пользудиффузного токсического зоба свидетельствовала тахикардия (100 уд./мин)Глазные симптомы не выражены: несколько расширены глазные щели, небольшой блеск глаз. Симптомы Мебиуса, Грефе, Кохера отрицательные,Артериальное давление нормальное(110/60 мм рт.ст.). В это время ак -тивность супероксиддисмутаэы былауже повышена: 1,52 усл.ед./мг гемоглобина, 364,0 усл.ед./мл эритроцитов. При повторном клиническом наблюдении через 2 мес, кьгда у девочкиразвилась типичная картина тиреотоксикоза, и после определения супероксиддисмутазной активности эритроцитов (1,63 усл.ед./мг гемоглобина,38 1,5 усл.ед./мл эритроцитов) былуточнен диагноз диффузного токсичес-кого зоба 11 степени, тиреотоксикоза 1 степени,П р и м е р 2. Больная Ч-на,возраст 14 лет. Поступила с подозрением на диффузный токсический эоб.За год потеряла в весе 4 кг, отмечалась потливость, чуство жара,утомляемость, повышенная раздражительность, плохой сон. Увеличениещитовидной железы замечено месяцназад. У матери также имеется увеличение щитовидной железы. При поступлении клиническая картина стерта.В пользу диффузного токсического 14090 4зоба свидетельствовала тахикардия(100 уд./мин)Щитовидная железадиффуэно увеличена (11 степени).Активность супероксиддисмутаэыизмерена на следущций день пребывания ребенка в отделении и соответствовала возрастной норме:1,42 усл.ед./мг гемоглобина;319,0 усл,ед./мл эритроцитов. При 10 повторном осмотре поставлен диагноз:ДиффУзный нетоксический зоб 11 степени. Вегетососудистая дистония. П р и м е р 3. Больная К-на,15 возраст 8 лет. Поступила с подозрением на диффузный токсический зобс жалобами на боли в области сердца,сердцебиение, периодически возникающее чувство жара, Наследственность20 отягощена: у матери бып диффузныйтоксический эоб, леченный оперативно. При поступлении отмечена тахикардия (92 уд./мин), при беспокойстве - до 120 уд./мин. Щитовидная же 25 леза диффуэно увеличена (11 степени). Активность супероксиддиомутазы также соответствовала нормальнымвозрастным показателям:1,04 усл.ед./мг гемоглобина,30 223,5 усл.ед./мл эритроцитов. Диагноз: диффузный нетоксический зоб11 степени. Вегетососудистая дистония. Во всех случаях диагнозы бьцти подтверждены клиническим наблюдением и параклиническими методами обследования (ЭКГ, определение холеастерина в сыворотке крови, в некоторых случаях радиоиммунологические и радиоизотопные методы исследования функции щитовидной железы).