Способ диагностики антракосиликоза

(57) Изобретенине, в частностилью изобретенияагностика. Длятивность супероэритроцитов поПринцип методапении степени иновления нитросприсутствии НАД оизворуют аления мывают аство- активД),Прин- деле- становИзобре ине ни е относит ся кпульмонологии. обретения являе рання Целью изиагностика Спос образом У болм ос ущес т вля ют юдеи беру 1 млсан ых и здоровых щем количеств кровь ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ИСАНИЕ ИЗОБ 1(71) Карагандинский г 9 сударственныймедицинский институт и Институт гигиены труда и профзаболеваний Ан КазСС(56) Федькина Л.Г, и др. Применениеоксипроли н-глюкуронового т ес та приобследова нии бол ьных с. ра элич нымиФормами пылевой патологии, - Гигиенатруда и профзаболеваний. 1977, 8 8,с. 28-30. ОСТИКИ АНТРАКОСИЛИ" е относится к медици" к пульмонологии. Цеявляется ранняя диэтого определяют ак" ксиддисмутазы (СОД) методу Е.Е. Дубининой. заключается в опреденгибирования восстаинего тетразолия вН и Феназиметилсульфата, Та кже определя ют относит ел ь нуюи ндуци рова нную хемилюми нес ценцию гемоглобина (ИХЛ) . Измерение ее интенси вности проводят на уста новке, состоящей из термостатирующей кюветыс перемешивающим устройством, в котором находится проба, коллимирующихоптических элементов с механическимзатвором - светоотсекателем и фотоэлектронного умножителя, на фотокатод которого проецируется световойпоток, При знацении показателя СОДот 360 усл.ед /мл/мин и более и ИХЛгемоглобина от 0,350 усл.ед, и более диагностируют антракосиликоз.Предлагаемый способ прост в осуществлении, существенно улучшает диагностику, обеспецивает высокую точностьи позволяет не только осуществитьдорентгенологичес кую диа гности ку а нтракосиликоэа, цто, в свою очередь,позволит проводить эффективную проФилактику антракосиликоза на самыхранних стадиях развития, т.е. на стадии предболезни, но и является надежным дублируоцим методом при постановке диагноза антракосиликоз,1 стадии. тикоагулянтом, Забор крови и дят натощак. Кровь центрифуг 10 мин при 1000 об/мин для у плазмы. Эритроциты трижды пр охлажденным физиологическим ром, В эритроцитах определяю ность супероксиддисмутазы (С цип метода заключается в опр нии степени ингибирования воспения нитросинего тетраэолия в присутствии НАД.Н и ФеназинметасульФата. Кровь с одной каплей гепарина (берут 0,5 мл) центриФугируют 10 мин пои 10 тыс.об. в минуту, к осадку5 эритроцитов добавляют 2 мл дистиллированной воды, встряхивают 5 мин и добавляют хлороФорм (2 части) и этиловь 1 й спирт (1 цветь), смесь центриФугируют при 1000 об/мин 30-40 мин, К супернатанту добавляют КН,2 НРОи оставляют на ночь при +4 С.Определение Фермента проводят на . спектроФотометре СФпри длине вол"15 ны 534 нм в кювете с ходом светового луца 10 мм. Инкубационная смесь со. стоит из 1,3 мп ФосФатного буФера (рН 8,3, 1 л.л нитросинего тетразолия (200 мкг/1 мл), 0,3 ла Феназин" метасульФата (69 мкг/мл), 0,2 мл супернатанта и 0,2 мл НАДН(00002 И). Контролем служат пробы без НАДН .Пробы с НАДНинкубируют 10 мин.Расчет проводят по ФормулеТ-(100- -Т105 Е "хРгде Т экстинкция пробыу Т/10 экстинкция пробы. за 1 мин,Р " разведение, единицы измерения, ед.акт/мл эр/мин.Индуцирова нную хемилюми нес ценцию(ИХЛ) гемоглобина измеряют на уста"новке, состоящей из термостатируемойкюветы с перемешивающим устройством,в которой находится проба, коллимиру"ющих оптических элементов с механи"цеским затвором - светоотсекателем иФотоэлектронного умножителя, на Фото" щОкатод которого проецируется световойпоток. Для соблюдения линейности характеристики напряжение на Фотоэлектронный умножител ь уста на вливают вобласти счетного "плато.". Возможнотакже использование серийных спектральных приборов, оснащенных Фотозлек"тронными приставками типа ИСП,ДСФ 24 и др.0,02 мл зритроцитов гемолизируютв 5 мп дистиллированной воды. Послеприготовления раствора следует избе"гать попадания на него солнечных лучей. В кювету хемилюминометра вносятраствор гемоглобина в количестве0,5 мл, а затем вводят 19 х 10 И рас"твор перекиси водорода. Регистрируют вспышку света в течение 5 минут,площадь под кривой определяют весовым методом. При проведении исследования следует строго контролировать кон. центрацию гемоглобина в кювете.Предлагаемым способом обследовано 138 человек, из них 40 человек " контрольная группа по антракосиликозу " группа "К", 98 человек - с антракосиликоэом 1 стадии, в том числе с сопутствующими заболеваниями, а также 20 целовек здоровых лиц - первицных доноров. У лиц с подозрением на антракосиликоз активность СОД изменялась от 350 до 450 единиц активности, ИХЛ гемоглобина ",от 0,350 до 0,450 по отношению к крови здоровых людей, у больных антракосиликозом 1 стадии эти показатели составили 500-00 единиц активности и 0,500-0,00 соответ" ст венно. Удоноров.показатели СОД и ИХЛ гемоглобина - 250-280 единиц активно" с ти и еди ни ца, Сопутст вующи е за боле вания, например, хроницеский бронхит, не вызывали отклонений, выходящих за границы предложенных критериев.П р и м е р 1. Горняк Х, 44 года, пылевой стаж 22 г, работал на должностях проходцика, забойщика, жалоб не предъявлял, направлен на обследо" вание с подозрением на антракосили" коз (после проФосмотра) . При тщательном рентгенологицеском обследова нии установлен усиленный рисунок легких. Наши исследования показали увеличение активности супероксиддисмутазы до 350,0 усл. ед/мл эритроцитов/мин, а интенсивность индуцированной хемилюминесценции снижалась до 0,3 (при 180"250 усл.ед/мл эритроцитов/мин супероксиддисмутаэц эритроцитов и интенсивности индуцированной хемилюминесценции гемоглобина, принятой за 1, у здоровых людей).Диагноз: контрольная группа по антракосиликоэу (стадия 01).П р и м е р 2. Горняк У., 48 лет, пылевой стаж 26 лет, работал на долж" ностях забойщика, проходцика, горнорабочего очистных забоев, жалоб не предьявляп, после проФосмотра направлен на обследование с подозрением на антракосиликоз. Рентгенологицеское обследование показало начальные проявления интерстициального пневмоФиброза. Исследования выявили увеличение активности супероксиддисмутазы до 450 усл, ед/мл эритроцитов/ /мин, а интенсивность индуцировайной хемилюминесценции - 0,45 (при1522 103 6 Ф о р и у л а изобретения Способ диагностики антракосилико" за путем биохимического исследования крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ранней диагностики, определяют активность супероксиддисмутазы в эритроцитах и относительную индуцированную хемилюминесценцию гемоглобина и при значении первого показателя 350 усл, ед/мл/мин и более и второго показателя 0,30 усл.ед. и более диагностируют антрокосиликоэ. Составитель Л. ШилинаТехред Л.Олийнык Корректор И. Пожо Редактор Н. Горват Заказ 6953/41 Тираж 789 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Иосква, И, Раушская наб., д. 4/5г г Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина,101 5180-250 усл.ед/мл эритроцитов/мин,и и нтенси вности и ндуци рова нной хемилюминесценции гемоглобина, принятой эа 1, у здоровых людей). Диагноз:контрольная группа по антракосиликозу, стадия (0-1),Было обследовано 200 человек шахтеров, иэ них 100 человек с началь"ными проявлениями антракосиликоза,100 - больные антракосиликозом 1 стадии, 1 группа обследованных лиц показала, что значение активности супероксиддисмутазы не выходило из пределов 350-450 усл. ед/мл эритроцитов/мин, а интенсивность индуцирован"ной хемилюми нес цен ции гемоглобинав пределах 0,3-0,45 от значения контроля, принятого эа 1. У шахтеров,больных антракосиликоэом 1 стадии, 20указанные параметры изменялись по"другому: так, супероксиддисмутаза возрастала до 500-700 усл, ед/мин эритроцитов/мин, а интенсивность индуцированной хемилюминесценции гемоглобина - до 0,7-0,8, соответственно посравнению с контролем .(здоровыми людь"ми - первичными донорами) .Для доказательства высокой специфичности предлагаемых показателейдля. ранней диагностики антракосили"коза, был проведен эксперимент по моделированию антракосиликоза, Крысыбыли затравлены угольной пылью (све"жеобразованной), исследовалась карре"ляция между показателями, супероксиддисмутаза и интенсивность индуциро"ванной хемилюминесценции гемоглобинаи интегральными параметрами, харак"теривующими развитие фиброзного процесса, Установлено, что до началаинтенси вного колла генообра зова ния влегких опытных крыс, отмечается силь"ная корреляция между интегральнымипоказателями развития фиброзного процесса (массой легких, массой трахеобронхиальных лимфатических узлов, содержанием коллагена и общих липидов в легких) и супероксиддисмутазой, ин" тенсивностью индуцированной хемилюминесценции гемоглобина. Например, корреляция между супероксиддисмутазой и массой легких равна - 0,97,мас" сой трахеобронхиальных лимфатических узлов - 0,98, коллагеном - 0,84, об", щими липидами - 0,89Иежду интенсивностью индуцированной хемилюминесценции гемоглобина и массой легких 0,92, массой трахеобронхиальных лиматических узлов - 0,98, коллагеном,92, общих липидов - 0,85.Полученные экспериментальные данные доказывают высокую специфичность предложенных параметров, а также и то, что они адекватно отражают про" цессы, происходящие в легких до ин" тенсивного коллагенообразования.Предлагаемый способ предна.значен для выявления ранних стадий развития антракосиликоза, в связи с чем он не может быть использован для сравнения с прототипом, так как последний может быть использован только при развитом фиброзном процессе в легких, к тому же последний используется для диагностики ряда других патологий, связанных с соединительной тканью, не пылевой этиологии.