Способ определения бластных клеток в смешанных клеточных популяциях на гистологическом препарате

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИН 09) 01) 4 6 01 М 1/28; 3100 ОПИСАН К АВТОРСКОМ Е И ВИДЕТЕЛЬСТВУ оении очГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) 1-й Ленинградский ордена Трудвого Красного Знамени медицинскийинститут им, акад.И,П, Павлова иИнститут цитологии(56) Попеску Э,Р., Лейкемии, Бухарест, 1965, с, 355.Петрова А,С. и др. Использованицитологического метода в определестепени дифференцировки плоскокленого рака полости рта. - Лаборатоное дело, 1982, 2, 79.(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЛАСТНЬРКЛЕТОК В СМЕШАННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕпутем их окрашивания и анализа состояния ядрышек в клетках, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности способа, в популяции определяют количество клеток сусиленно аргентофнльными ядрышкамии их соотношение с общим числом клеток, при этом препарат перед окрашиванием обрабатывают в 2 н,растворе муравьиной кислоты в течение 10-20 мин,а в качестве красителя используют50 7-ный раствор азотно-кислого серебра, 1201 720Изобретение относится к гематологии и онкологии и может быть использовано для быстрого обнаружения всмешанных клеточных популяциях незре.лых лейкозных и опухолевых клеток,/для одновременной оценки их Функцио-.нальной активности, в том числе нафоне цитостатической терапии, а также в экспериментальной гематологии,онкологии и цитологии при изученииразных аспектов роста, дифференцировки и созревания лейкозных и опу"холевых элементов,Целью изобретения является повышейие точности способа,Способ осуществляют следующимобразом,Препараты клеток крови, костного мозга и лимфатических узлов готовят стандартным способом во времявзятия крови, стериальной пункцииили пункции лимфатического узла,В то же время для получения клетокиз плевральной и асцитической жидкости последние предварительноцентрифугируют при 1000 об/мин втечение 10 - 15 мин. Затем надосадок удаляют, а из осадка делают,мазки. Все препараты высушивают навоздухе, а затем в течение 15 минфиксируют в смеси метиловый спирт -уксусная кислота, приготовленной всоотношении 3:1, После повторноговысушивания на воздухе их, в зависимости от толщины мазка, помещают на10-20 мин в 2 н. раствор муравьинойкислоты. По окончании инкубации стекла ополаскивают дистиллированной водой и после высушивания окрашивают50%-ным раствором азотно-кислого серебра согласно стандартной методике,После скрашивания серебром препараты тщательно ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и в течение 10 - 20 с подкрашивают 1%-ным раствором Гимзы, приготовленным на фосфатном буфере срН 6,8. В приготовленных препаратах в анализируемых клетках под иммерсионным объективом оценивают количество, величину и форму яцрышек, а также содержание в последних аргентофильнык гранул, принимая во внимание, что одним из важнейших признаков незрелости клеток является наличие в иих гипертрофированных ядрышек с активным синтезом рибосомной РНК ( ) 10-15 гранул на ядрышко)и/или увеличение общего количества. ядрышек в клетке. Окончательнуюидентификацию клеток осуществляют5 с учетом величины и формы ядра, со-отношения ядра и цитоплазмы, а такжехарактера окрашивания хроматина.П р и м е р . Больной П.Н.,48 лет, поступил в клинику 22 янва 10 ря 1982 года, Направлен с диагнозомцирроза печени с явлениями гиперспленизма. Поводом для госпитализации послужила нарастающая слабость,связанная с анемиэацией. Из анамне 15 за было известно, что ранее больнойстрадал болезнью Крона и оперированпо поводу ректального свища. В1979 году перенес гепатит, Измененияв крови выявлены в конце декабря,20 когда содержание эритроцитов равнялось 2,4 х 10 /л, гемоглобина.1 г85 г/л, тромбоцитов 4 х 10 /л,юретикулоцитов 0,2%, лейкоцитов3,4 х 10 /л, базофилов 1%, метамие- , 25 лоцитов 2%, п/я нейтрофилов 6%,с/я нейтрофилов 6%, лимфоцитов 81%и моноцитов 4%. В миелограмме от16,ХПг. содержание бластных элементов. не увеличено (3%), промиело 30 цитов 1,4%, миелоцитов 19%, метамиелоцитов 5,8%, п/я нейтрофилов 29,2%,с/я нейтрофилов 23%, базофилов 1,6%,лимфоцитов 10,4%, моноцитов 3,2%,эритроидных элементов 3%, митозов0,4%, Мегакариоциты не встретились.При осмотре в клинике состояниеотносительно удовлетворительное,бледность кожных покровов и слизис,тых, Явлений геморрагического диатеэа, увеличения лимфоуэлов, печении селезенки не обнаружено,В анализахкрови и костного мозга помимо стойкой анемии, тромбоцитопении и гранулоцитопении повторно регистрировалось увеличение бластных элементов до 9 - 20%, что поставило лечащих врачей перед необходимостью проведения дифференциального диагнозамежду гипопластической анемией с 50избытком бластов и острым лейкозом.Избирательное окрашивание клетоккрови с помощью азотно-кислого серебра показало, что в этом наблюдении содержание бластных элементов достигало 32%, что позволило остановиться на диагнозе малопроцентной формы острого лейкоза и ограничиться в клинике назначением симптоматичес1201720 4тов 5,3 х 1 Оф/л, бластов 49 ., промиелоцитов 27, миелоцитов 13, метамиелоцитов 17, п/я нейтрофилов 77, с/я нейтрофилов 117., лимфоцитов 223, моноцитов 7 Х, Наблюдение за больным продолжается. кой терапии и гемотрасфузиями. Больной находится под наблюдением гематологического диспансера. В последнем анализе крови эритроцитов1,9 х 10 /л, гемоглобина 60 г/л, .тромбоцитов 15 х 10/л, лейкоииСоставитель М. Позняк, Техред М.Пароцай Корректор М, Максимишинец Редактор Л, Повхан Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Заказ 7997/44 Тираж 896 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5