Способ оценки иммунологического статуса больного

(54) (57) СПОСОБ ОЦЕ КОГО СТАТУСА БОЛЬНО вания лимфоцитов в образования, о т л тем, что, с цельюти способа, перед ции розеткообразов ращивают 0,053-ным ротетразолия синег ществляют по колич разующих субпопуля их функциональной ОЛОГИЧЕС исследо- озетко 11..Б.Гуревичударственныиим. С.М."Кир Итоги науки и вопросы пато-83. ГОСУДАРСТВЕННЬЮ НОМИТЕТ СС ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКР ТОРСНОМЪ(СВИДЕТЕЛЬСТВ(7 1) Горьковский гомедицинский институ(56) 1 Петров Р.В.техники, Сер. "Общилогии". М 1976, с НКИИММУНГО путемреакции ри ч а ю щ и й с яовьвпения точнос-.остановкой реакния лимфоциты окраствором П-нита оценку осуству розеткообций лимфоцитов и активности.1146052 1 О 15 20 25 30 35 Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным исследованиям крови, и может быть использовано для оценки Т и В систем лимфоцитов.Известен способ оценки иммунологического статуса больного путемисследования популяций Т и В-лимфоцитов, включающий проведение реакции розеткообразования и .Однако известный способ не позволяет осуществлять оценку функционального состояния субпопуляций лимфоцитов и тем самым является неточным,Целью изобретения является повышение точности оценки иммунологического статуса.Указанная цель достигается тем,что согласно способу оценки иммунологического статуса больного путемисследования лимфоцитов в реакциирозеткообразования, перед постановкой реакции розеткообраэования лимфоциты окрашивают 0,05%-ным раствором П-нитротетразолия синего, аоценку осуществляют по количествурозеткообоазующих субпопуляций: лимфоцитов и их функциональной активности,Способ осуществляется следующимобразом,Для постановки реакции берутлимфоциты, выделенные из гепаринизированной веноэной крови (1-3 мл) вградиенте плотности, равном 1,08.Дважды отмывают средой 199, концентрацию лимфоцитов доводят после под 6счета в камере Горяева до 2 10 в/млВ две пробирки наливают по 0,01 млвзвеси лимфоцитов и смешивают сравным объемом 0,053-го раствораП-нитротетразолия синего, приготовленного на фосфатном буфере рН 7,27,4 и инкубируют 1 ч при 37 С. Затем клетки осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/миннадосадочную жидкость убирают, объемдоводят до исходного (О, 1 мп)средой 199 и осадок ресуспенэируют.Перед постановкой реакции розеткообразования проводят тест на жизнеспо,собность лимфоцитов 13-ным воднымраствором эозина. Процент жизнеспособных клеток составляет 95-983.Далее реакции розеткообраэования сэритроцитами барана и с эритроцитами, "покрытыми" антителами и комплементом (ЕАС-розетки) проводят какв известном способе.Количественную оценку ведут почислу розеткообраэующих клеток на100 лимфоцитов, качественную - почислу гранул восстановленного формаэана в роэеткообразующих клетках(подсчет велся в 507 розеткообразующих клеток),Используемый краситель П-нитротетраэолий,синий, химическая формула Сп Но И 1 ООС 12, мол. м. 817,66(Реанал, Венгрия), соль тетразолия,используемый в гисто- и цитохимических исследованиях для выявлениядегидрогенаэ в присутствии опредег,ленного субстрата окисления (сукцинат, лактат, глицерофосфат натрия и др.) . Предлагаемая реакцияпроходит в бессубстратной среде,поэтому свидетельствует о суммарнойактивности многих ферментов, ведающих окислением.Предлагаемая концентрация красителя в растворе 0,057 является оп-тимальной, так как при проведениисерии опытов по титрованию необходимой концентрации отмечено, чтоконцентрация, 0,047. слабо окрашивалаклетки, а концентрация 0,067 приводила к снижению их жизнеспособности,хотя окраска была так же выражена,как и при 0,057,.П р и м е р. Больной С.Е., 9 дн.,находился в городской детской больнице У 1 с диагнозом пузырчаткановорожденных. Постгипоксическая перинатальная энцефалопатия, синд ром повышенной нервно-рефлекторнойвозбудимости средней тяжести. Ребенок поступил на второй день болезни.Проводились иммунологические исследования. Концентрация иммуноглобулина 14/4 36 800 мг, 7.,3 М 144 мг/Е,3 А - следы. Содержание Т-лимфоцитов 45(Е-РОК) 67/, В-лимфоцитов 252, Функциональная активность Т-лимфоцитов18,84, активность В-лимфоцитов 25,3гранул в клетке,при этом количество розеткообразующих Т-клеток(ЕА-РОК) 67%, ЕАС-РОК 237, жизнеспособность клеток перед постановкойтеста розеткообраэования 973. Проведенные исследования показывают высокую метаболическую активность как Т, так и В-лимфоцитов. Причем активность В-лимфоцитов выше, что подтверждает острую фазу заболе3 1146052 4 вания и свидетельствует. об активномку иммунологическогостатуса больно- процессе антителогенеза. На основа- го, т.е. оценить состояние напрянии проведенных исследований можно женности клеточного и гуморального предположить благоприятный исход за- звеньев иммунитета в различные фазы болевания. Всего обследовано 30 заболевания по функциональной акдетей с различной патологией (сепсис, тивности иммунокомпонентных клеток. пиелонефрит, пеомерулонефрит, брон- Кроме того, способ позволяет вйявхиальная астма, острые респиратор- лять вторичные иммунопатии, связанные инфекции).ные с теми или иными энэиматическимиТаким образом, предлагаемый спо О дефектами. Все это позволяет повысоб позволяет осуществлять как коли- сить точность оценки иммунологи-, чественную, так и качественную оцен- ческого статуса больного.Составитель Т.КрюковаРедактор О.Черниченко Техред Л.Микеш Корректор Л.ПилипенкоЗаказ 1253/6 Тираж 722 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, ЖРаушская наб;, д, 4/5Филиал ПБП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4