Способ оценки иммунного статуса

(51) 4 О СЕСО 1 ЛЗЩ ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНАВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Ю.Леплина коства аутороопределяит1,5 ч пре-аот 3 доббдо 18 ч нутоот РОК и с к диААеренцировкеотКошенив этих ччвствительнос ом стаоб им ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРпО делАм изОБРетений и ОткРытий 21) 4055205/28-1422) 11.04.8646) 15.03.88. Бил.Р 1071) Институт клинической иммунолоии СО АМН СССР,72) Е.Р.Черных, О,и Г.З.Иубинский53) 615375(088,8)56) Нащогй А.В. е 1 а 3 Тогпа 3.о Хипвпо 3.оду, 1978, ч.121, п.1,р.1-5.54) СПОСОБ. ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА57) Изобретение относится к медицине, а именно к исследовании иммунного статуса, и может быть использовано в клинической иммунологии различных заболевании. Цельв изобретения вляется повыиение точности оценки ммунного статуса за счет выявления анних этапов диААеренцировки Т-клеок. Для этого мононуклеары обследуе мых инкубирувт в течение 18 ч в приутствии и в отсутствии Т-активина. По приросту колиобразувщих клетотервалах: от 0 дРОК, от 0 до 6 илпре-Т-клетки исобность аутоПо количествуклеток, а такжек Т-активину судятусе. 1 табл.Изобретение относится к медицине,а именно к исследовании состоянияиммунного статуса, и может быть использовано в клинической иммунологии,Целью изобретения является повы,шение точности оценки иммунного статуса за счет выявления ранних этаповдифйеренцировки Т-клеток.Способ осуществляют следуищим Ообразом.Мононуклеары (МК) выделяют путемцентрийугирования гепяринизированвойвенозной крови (5 мл, содержащей500 Ед гепарина) в градиенте плотности фиколла-верограйина (3 мл, плотность 1,077) при 3000 об/мин. Выде- .ленные МК инкубируит в пробиркахв среде 199, дополненной 1 ОХ телячьей сыворотки в отсутствии или присутстнии Т-яктивина (1 мкг/мл) при37 С. Количество клеток в одной пробирке составляет 1 млн в 1 мл культуряльной смеси,Тест ауторозеткообразования проводят следующим образом.50 мкл лимйоцитов (концентрация5 млн/мл) смешивают с равным объемомсыворотки человека АВ ( И ) группы(преднарительно инактивированной прогреванием и адсорбированной бараньими и человеческими эритроцитами), инкубируит смесь при 4 С в .течение;ЗО мин и затем добавляют 50 мкл 1 Х,ной взвеси яутологичных эритропитов.Далее клеточную взвесь центрийугируит5 мин при 1000 об/мин и инкубируит во,течение ночи при 4 С, после чего производят подсчет ауто-РОК.Т-клетки выделявт методом градиент ного центриугирования Е-РОК. Дпяэтого 0,5 мл МК перийерической крови(концентрация 10 млн/мл) смешивавтс 0,1 мл 20 Х-ной взвеси эритроцитовбарана (ЭБ) в присутствии 15 Х инактинированной и адсорбированной ЭБсыворотки доноров АВ ( Я ) группы.Клеточную смесь. инкубируит 15 мин при37 С, центрийугирувт 5 мин при1000 об/мин и вновь инкубирувт в теОчение 1 ч при 4 С. Осадок осторожноресуспендируит и центри 4 угируит втечение 20 мин,При 1800 об/мин в градиенте плотности фиколла-верографина(о. = 1,077). Находящиеся в осадкес Т-клетками ЭБ после удаления надосадочной жидкости лизируит гипоосмолярным шоком. После этого оставшиеся Т-клетки троекратно отмывают средой 199 и доводят до концентрации 5 млн/мл. Инкубацив МК и сепариронанных Т-клеток проводят в течение 18 ч указанным способом. Количество ауто- РОК определяют в исходных культурах через 1,5; 3; б; 18 ч культивирования.По приросту ауто-РОК от 0 до 1,5 ч судят о количестве предшественников яуто-РОК. Диййеренцировка Е ауто клеток в Е+ ауто клетки у доноров - это Т-яктинин - зависимый процесс. Среднее количество преауто-РОК, определяемое как прирост ауто-РОК в культурах МК с Т-активином, составляет у здоровых доноров 5,1+1,ОХ (и = 11) и соответствует количеству Т-актинии-чувствительных пре-ауто-РОК, определяемому в культурах сепярированных Т-клеток 5,9 1,ЗХ (п = 1 б)Прирост ауто-РОК на шести часах обусловлен диййеренцировкой н ауто- РОК-Е пре-Т-клеток.П р и м е р 1. Больной А. В периферической крови перечисленными методами выявлено содержание пре-Т- клеток в присутствии (пре-Т -клеток) и отсутствии (пре-Т -клеток) Т-акти- нина; пре-Т-клеток=12,5, пре-Т-клеток = 18,5; пре-яуто-РОК = 6; пре-ауто-РОК = 9; ауто-РОК =1,5, Сравнивая доли содержания соотнетствувщих клеток больного с нормой, оцениваем, что доля пре-Т-клеток и пре-яуто-РОК увеличена, содержание ауто-РОК снижено. Состояние иммунного статуса характерно для лимйопролийеративного заболевания. У больного лимосяркома. П р и м е р 2. Больной Б. В периферической крови больного выявлены+следующие содержания; пре-Т -клеток==О; пре-Т -клеток=О; пре-аута-РОК = =0 пре-ауто-РОК =0; ауто-РОК=25.Сравнивая доли содержания соответствующих клеток больного с нормой, оцениваем, что содержание пре-Т-клеток и пре-яуто-РОК снижено, я ауто-РОК повышено. Состояние иммунного статуса характерно для аутоиммунного заболе-вания. У больного ревматоидный артрит,11 р и м е р 3. Больной В. В перийерической крови больного выявлены следующие содержание незрелых Т-клеточных предшественников: пре-Т -кле1381399 5 патологии Точность оценки,% Из данных таблицы следует, что точность предложенного способа по сравнении с известным повышена на 29,5-65%. редложенный Способ- способ прото- тип 20 ЛимФо гранул матоз Форм из о р е 65 26 Хронический гломеруло- неФрит 56 Ревматоидный30 аРтрит 58,Точность оценки иммунного стату са рассчитывали как 100% - % зоны перекрытия показателей, опП р чание ределяемых соответствуищим способом. Составитель Г.Криков1 выдкая Техред М.Дидык ректор О.Кундрик Редакто тираж 84 ВКИИПИ Государст по делам изобр13035, Москва, Ж181 4 Подписноеенного комитета СССРтений и открытийРаушская наб., д.4 ак Производственно-полиграФическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,ток=30,5; пре-Т -клеток=29; пре-ауто- РОК =2,5) пре-ауто-РОК =0,5; ауто- РОК,5. Сравнивая полученные результаты с нормой, видим, что доля пре- Т-клеток увеличена, доля пре-ауто- РОК и ауто-РОК снижена. Состояние иммунного статуса характерно для лимфопролиФеративных заболеваний с аутоиммунным компонентом. У больного лим ФогранулематозСравнительные данные по точности оценки иммунного статуса по известному и предложенному способам приведены в таблице. Способ оценки иммунного статуса путем определения субпопуляций Т-кле" ток, о т л и ч а и щ и й с я тем, что, с целью повышения точности оценки за счет выявления ранних этапов диФФеренцировки, определяит в присутствии Т-активина и без него содержание пре-Т-клеток, пре-ауторозеткообразующих клеток (пре-ауто-РОК), ауторозеткообразуицих клеток ауто- РОК), устанавливаит соотношение между показателями и при увеличении долипре-Т-клеток, пре-ауто-РОК и уменьшении доли ауто-РОК по сравнению с нормой оцениваит состояние иммунного статуса, характерное для лимФопролиФеративных заболеваний, при уменьшении доли пре-Т-клетокпре-ауто-РОК и неизменном или повышенном содержании доли ауто-РОК по сравнении снормой оцениваит состояние иммунногостатуса, характерное. для аутоиммунныхзаболеваний, йри увеличении долипре-Т-клеток, снижении доли пре-аутоРОК и ауто-РОК по сравнении с нормойоцениваит состояние иммунного статч-са, характерное для лимфопролиФеративных заболеваний с аутоиммуннымкомпонентом.