Способ определения циркулирующих иммунных комплексов

(56) Заза У 2,Родш ейн О.А.,певтически68-72. Коси р Те 19 рх ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54)(57) СПОСОБ ОПРЕЛЕЛЕНИЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ, включающий титрование комплемента в сыворотке крови больного и определениантикомплементарности сыворотки поразности общей комплементарной актиности и оставшегося несвязанного коплемента иммунными комплексами,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения точности и упрощения способа, титрование исследуемойсыворотки больного и определения антикомплементарности сыворотки осуществляют комплементом той же сывоИзобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к способам определения циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), и может быть использовано для оценки при наблюдении эа развитием и течением болезней у человека и животных, в особенности таких как болезни с диффузным поражением соединительной ткани, почек, аутоиммунные, цитопении, некоторые 10 хронические болезни легких и сердца.Известен способ определения ЦИК пс связыванию иммунным комплексом исследуемой среды С 1 -Фракции комплемента человека, который позволяет определять количество антиген-неспецифических комплементфиксирующих ЦИКОднако известный способ недостаточно точен, что затрудняет определение ЦИК в малых концентрациях, так как используется лишь один компонент (С 1, ) системы комплемента, а также сложен в учете конечного результата, длитепен в постановке реакции, и сложен методическими приемами в получении чистой Фракции С что делает способ мало доступным. Кроме того, способ с использованием С 1 -фракции%комплемента не позволяет одновременно в одной и той же исследуемой среде определить общую комплементарную активность сыворотки и ком" племента, поглощенный ЦИК, что важно для суждения об участии комплемента в аутоиммунных реакциях.Известен также способ определения ЦИК пс антикомплементарности сыворотки, который основан на определении поглощения ЦИК исслецуемой среды4 О комплемента морской свинки 12.Однако известный способ недостаточно точен так как используется гетерслогический комплемент морской свинки.45Цель изобретения - повьппение точности и упрощение способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения циркулирующих иммунных комплексов, включающему титрование компле" ментов в сыворотке крови больного и определение антикомплементарности сыворотки по разности общей комт 1 ле" ментарной активности и оставшегося несвязанного комплемента иммунньщи комплексами, титрование исследуемой сыворотки больного и определение антикомплементарности сыворотки осуществляют комплементом той же сыворотки,Способ реализуется следующим образом.Определение общей комплементарной активности сыворотки.Берут 0,05 мл исследуемой сыворотки, 0,45 мл веронал-мединалового буфера с РН 7,3 и проводят титрацию.Определяют общую гемолитическую активность в единицах комплемента по 507-ному гемолизу сенсибилизированных эритроцитов барана (ЕД пс СН) Затем определяют антикомплементарность исследуемой сыворотки. Для этого 0,1 мл исследуемой сыворотки инактивируют на водяной бане при 56 С на протяжении 30 мин, прибавляют к ней 0,05 мл исследуемой неактивированной сыворотки (при низкой общей комплементарной активности исследуемой сыворотки добавляется О, 1 мл) и 0,35 мл веронал-мединалового буфера с РН 7,3 (при низкой комплеменгарной активности 0,3 мл вероналмединалового буфера). Помещают в тер.омостат на 2 ч при 37 С. После инкубации определяют оставшийся комплемент (ЕД по СН) . По разности общей ксмплементарной активности и оставшегося несвязанного комплементаопределяют антикомплементарность сыворотки, т.е. количество ЦИК.Частное от деления общей комплементарнсй активности исследуемой сыворотки на количество ЦИК (антикомплементарность) оценивается как коэффициент аутоиммунизации (К ), Коэффициент аутоиммунизации находим пс формуле:С С 11 К где С - общая комплементарная активность сыворотки в (ЕД поСН;о);И 1 - количество ЦИК (антикомплементарнссть) сывороткив (ЕД по ГНс) .П р и м е р. Производим расчет, Общая комплементарная активность исследуемой сыворотки 48 ЕД. Оставшийся компл лемент - исследуемой пробе на ЦИК 44 ЕД. Количество КЛК (антикомплементарность) исследуемой сыворотки определяется путем вь."чета ст общего уровЗаказ 7841/5 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5= - =12 условных ед,4По предложенному способу наличиеаутоиммунного компонента определяютпри величине коэффициента аутоиммуниэации ниже 15 условных ед, риск 1 Оразвития аутоиммуниэации процесса привеличинах 15 - 20 условньм ед ., отсутствие аутоиммунизации и риска ееразвития при величинах коэффициентаболее 20 условных ед. 15П р и м е р 1, Обследовано 20 больных с тяжелым течением бронхиальнойастмы. Ни в одном случае не полученокоэффициента аутоиммунизации выше20 условных ед., а средняя величина 20группе 16,4+3,4 условных ед.П р и м е р 2. Обследовано 18 больных ревматоидным артритом и системной красной волчанкой, ни в одном 007 4случае не получены величины коэффициента аутоиммуниэации более услов- ных ед, при средних величинах 12, 1+ 3 условных ед.П р и м е р 3. Обследовано 20 практически здоровых взрослых лиц, где во всех случаях коэффициент аутоиммунизации был выше 20 условных ед. и в среднем составлял 24,4+2,6 условных ед.Всего было обследовано 62 больных и в 73,17 случаях было определено наличие иммунных комплексов с назначением соответствующей терапии. По известному способу возможность обнаружения иммунных комплексов составляет лишь 58-593.Таким, образом, предложенный способ повышает точность определения иммунных комплексов и упрощает методику определения, что делает его доступным для лечебно-профилактических и научно-исследовательских медицинских учреждений.