Способ получения антительного диагностикума сальмонелл

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ЯО, 1082401 ъа) А 61 В 10/00 0 ПИСДНИК ИЗ 0 БРЕтЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ СР 00 в 9 ь СР ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Кишеневский государственный медицинский институт(56) 1. Военно-медицинский журнал,1963,8, с. 51 - 53,(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИ- ТЕЛЬНОГО ДИАГНОСТИКУМА САЛЬМОНЕЛЛ путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки . сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, в качестве сорбента используют суспензию, состоящую из 2,Д%- ной суспензии целлюлозы и 5%-ной суспензии белка А стафилококков штамма Сочап - 1, с последующей сенсибилизацией его антисальмонеллезной сывороткой в объемных соотношениях 10:10:1.25 30 35 40 45 50 55 Изобретение относится к медицине, в частности к способам приготовления диагностических препаратов, и может быть использовано в медицинской микробиологии дл я определения тифопаратифозных и других патогенных для человека сальмонелл.Известен способ получения антительного диагностикума сальмонелл путем сенсиби. лизации гамма-глобулином иммунной сыворотки сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя 11.Однако известный способ является длительным и получаемые препараты обладают недостаточной чувствительностью.Цель изобретения - повышение чувствительности диагностикума.Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения антительного диагностикума сальмонелл путем сенсибилизации гамма-глобулином иммунной сыворотки сорбента из нитроцеллюлозы после ее термогидролиза в растворе едкого калия с последующим добавлением красителя,в качестве сорбента используют суспензию, состоящую из 2,5 О/,-ной суспензии целлюлозы и 5 О/о-ной суспензии белка А стафилококков штамма Сожап - 1, с последующей сенсибилизацией его антисальмонеллезной сывороткой в объемных соотношениях 10:10:1.Пример. Способ получения цветного антительного диагностикума сальмонелл включает 4 основные операции: получение 5%-ной суспензии белок А-содержащих стафилококков штамма Сочап - 1; получение 2,5 О/о-ной суспензии целлюлозы; получение целлюлозно-стафилококкового сорбента; нагрузка целлюлозно-стафилококкового сорбента 1 дб-антителами диагностической сыворотки.Получение 5 О/о-ной суспензии белок А- содержащих стафилококков штамма Сожап - 1.Музейную культуру стафилококков штамма Соъап - 1 вначале проверяют на наличие белка А и затем засевают в ряд пробирок со скошенным агаром и инкубируют в термостате в течение 20 - 24 ч при 37 С. Затем суточные культуры из 5 пробирок смывают 5 мл стерильного физиологического раствора, полученную суспензию вносят в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в дезраствор. Осадок ресуспендируют в 19 об, стерильного физиологического раствора, содержащего мертиолят в концентрации 1:10000, и таким образом получают 5/о-ную суспензию белок А-содержащих стафилококков штамма Сочап - 1.Получение 2,5/о-ной цветной суспензии целлюлозы.В центрифужную пробирку вносят 30 - 50 мг целлюлозы, содержащей 12 - 14% нитрогрупп, 1 мл 3/о-ного раствора КОН и проводят термогидролиз при 100 С на водяной бане в течение 3 - 5 мин до полного растворения нитроцеллюлозы. Затем при постоянном перемешивании в пробирку добавляют 1 - 2 капли 1/О-ного раствора бриллиантовой зелени и 2 - 3 капли уксусной кислоты. Полученную зеленую суспензию нитроцеллюлозы отмывают в центрифуге 5 мл дистиллированной воды и таким образом получают 2,5/О-ную цветную суспензию целлюлозы.Получение целлюлозно-стафнлококкового сорбента.Целлюлозно-стафилококковый сорбент получают путем соединения равных объемов 2,5/О-ной цветной суспензии целлюлозы и 5%-ной суспензии белок А-содержащих стафилококков штамма Соъап - 1.Нагрузка целлюлозно-стафилококкового сорбента 1 дб-антителами диагностических сывороток,В центрифужную пробирку к 2 мл целлюлозно-стафилококкового сорбента добавляют 0,1 мл брюшнотифозной (паратифозной А, В или др. противосальмонеллезной) сыворотки с достаточно высоким титром антител 1:12800, 1:25600. Пробирку закрывают резиновой пробкой, несколько раз переворачивают и выдерживают при 37 С в течение 30 мин для адсорбции 1 дбантител на целлюлозно-стафилококковом сорбенте. Одновременно происходит инактивация стафилококков под действием мертиолята и бриллиантовой зелени. В конце этого периода в пробирке формируется зеленый хлопьевидный осадок, который подвергается однократному отмыванию в 5 мл дистиллированной воды и затем ресуспендированию в 3 мл физиологического раствора рН 7,2 и таким образом получают цветной антительный диагности кум сальмо нелл.Процесс приготовления цветного анти- тельного диагностикума сальмонелл занимает 30 - 40 мин, в то время как для получения цветных антител по прототипу требуется более суток.Кроме того, экспериментально установлено, что цветной антительный диагностикум характеризуется стабильностью: не дает спонтанной агглютинации, не реагирует с гетерологичными культурами микробов 1 эшерихии, шигеллы и др.) и высокой чувствительностью, реагируя на стекле с гомологичными культурами сальмонелл, разведенными до концентрации 3 млн клеток в 1 мл исследуемого материала. Прототнпный препарат цветных антител обла. дает меньшей чувствительностью, позволяя выявлять только большие количества саль(стафилококковый) Соста вител ь П. Бона рцев Техред И. Верес Корректор И Муска Тираж 688 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4(5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Редактор А. МотыльЗаказ 1603/3 3монелл ЗО - 50 млн. клеток в 1 мл исследуемого материала.В табл. 1 представлены результаты определения чувствительности и специфич"ности брюшно-тифозных препаратов, полученных по предлагаемому способу с использованием целлюлозно-стафилококкового сорбента, по прототипу с использованием только целлюлозного сорбента и по известному способу с использованием стафилококкового сорбента. В табл, 2 представлены результаты определения чувствительности и специфичности паратифозных В препаратов, полученных по трем упомянутым способам. Таким образом, чувствительность препаратов, получаемых по предлагаемому способу, примерно в 10 раз превосходит прототип и известный способ, Кроме того, применение предлагаемого способа позволяет получить более специфичный препарат.