Способ определения концентрации общего холестерина в плазме крови

(54)(57) СПОСОБ ЦИИ ОВЩЕГО ХОЛЕ ЕДЕЛЕНИЯИНА В ПЛА ЕНТРА КРОВИ ФВ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЭОВРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИ(56) 1. Колб В.Г., КамьппниковКлиническая биохимия. Минск,с. 156.2. АЬе 11 Ь.Ь. ей а 1. "1.Во1952, 195(1), 357-366 (прототи путем экстракции холестерина органическими растворителями и последующего проведения цветной реакции, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повьшения точности, кровь берутв объеме 0,05-0,1 ил, прибавляют 0,950,90 мл физиологического раствора, содержащего 0,3-0,4 Ж формалина, холестерин экстрагируют из плазмы 6-10 объемами смеси хлороформа и метанола (1:1),экстракт промывают водой и спектрофотометрически определяют концентрацию холестерина в плазме.1116395, 2 Изобретение относится к медицинеи биологической химии, в частностик способам определения концентрацииобщего холестерина в плазме крови,Известен способ определения концентрации общего холестерина в плазмеили сыворотке крови 1 .Недостатком известного способаявляется использование венозной крови для последующего получения плазмы 1 Оили сыворотки, что создает трудностипри обследовании больных, особеннопри повторном взятии крови для наблюдения динамики процессов и при обследовании детей. 15Наиболее близким к изобретениюпо технической сущности и достигаемомурезультату является способ определения концентрации общего холестеринав малых обьемах сыворотки крови, вклю- . 20чающий омыление липидов, экстракциюхолестерина петролейным эфиром, промывку экстракта водой и последующеефотометрирование 23,Недостатком данного способа является длительность выполнения анализа,необходимость использования специаль",ного оборудования для микроанализаи невысокая точность.Цель изобретения - повышение точ- ЗОности,Поставленная цель достигаетсятем, что при определении концентрацииобщего холестерина в плазме кровисогласно с пос обу, включающему экстрак-:З 5цию холестерина органическими раство,рителями и последующее проведениецветной реакции, кровь берут в объеме 0,05-0,1 мл, прибавляют 0,950,90 мл Физиологического раствора,содержащего 0,3-0,4% формалина,холестерин экстрагируют из плазмы6-10 объемами смеси хлороформа и ме-танола (1:1), экстракт промывают водой и спектрофотометрически определяют концентрацию холестерина в плазме. 01 х 1000,7 + Ч где 0,1 - содержание холестерина встандартной пробе, мг;Ч - объем плазмы, мл, соответствующий объему полученнойкрови (рассчитывают повеличине гематокрита);0,7 - величина аликвоты.При взятии крови у 70 мужчин и74 женщин различных возрастных группполучают следующие результаты, мг.:17-29 лет - 196+9 и 204+7; 30-39 лет -220+12 и 237+14; 40-49 лет - 205 й 17и 239+7 и старше 50 лет - 232+6 и229+23 соответственно.П р и м е р 2, При параллельныхопределениях концентрации общего холестерина в плазме крови двух обследуемых с помощью предлагаемогоспособа получены следующие результаты;196 , 194, 188, 190, 194, 188, 186 и190 мги 282, 286, 290, 292, 296,280, 280 и 286 мг %. Точность метода,рассчитанная для первого и второгослучая, составляла й 2, 1 и +2,5% соответственно. Способ поясняется следующими приме. рами.П р и м е р 1, Кровь в количест ве 0,05 мл берут из пальца, вносят в центрифужную пробирку с 0,95 мл Физиологического раствора, содержа" щего 0,35 . формалина, перемешивают, центрифугируют при 1500 об/мин, от бирают 0,7 мл в центрифужную пробирку, приливают 4,5 мл смеси хлороформа и метанола (1: 1) и 1,5 мл воды,перемешивают, центрифугируют, верхний слой удаляют, хлороформный слой переносят в другую пробирку, хлороформ отгоняют, к сухому остатку приливают 1,5 мл 0,1 -ного раствора хлорного железа в ледяной уксусной кислоте и 1,0,мл концентрированной серной кис-лоты, перемешивают, нагревают на ки" пящей водяной бане 1 мин. Оптическую плотность раствора измеряют с помощью фЭК при длине волны 560 нм против цветного реактива. Стандартные пробы обрабатывают аналогичным образом. Одновременно определяют величину гематокрита с помощью микрометода. Концентрацию холестерина в плазме рассчитывают по формуле:Концентрация общегоЕоох Кхолестерина, мг%Е сгде Еи Е - оптическая плотностьопытных и контрольных проб, соответственно;К - коэффициент, рассчитанный для данной величины гематокрита по Формуле: П р и м е р 3. При определенииконцентрации общего холестерина в3 1116395 4плазме крови одних и тех же обследуе- гаемому способу и способу-прототипумых (определения проводили с интерва- получены следующие результаты, мг Хфлом 4-7 дней) с помощью предлагаемого 77,5 н 75,0; 67,8 и 70,6; 80;5 испособа получены следующие результа,5; 52,3 и 52,0; 72,0 и 70,0;ты, мг Ж: 280 и 287; 204 и 212; 196110,0 и 113,0 соответственно. Средниеи 178; 238 и 244; 305, 296 и 308; значения равны 76,6 и 77,0 мг Х соот 348, 296 и 323; 194 и 188; 64 и 172; ветственно, т.е. результаты, полу 296, 300 н 304; 170 и 176 при первом ченные с помощью предлагаемого спо,и повторных определениях соответствен- соба и способа-прототипа, хорошо соно. гласуются,Способ дает хорошую воспроизводимость результатов. Время, затраченное на проведениеП р и м е р 4. При определении 6 анализов по предлагаемому способу,концентрации холестерина в плазме ,составило 75 мин, а по способу-протокрови 6 интактных кроликов по предла типу более 3 ч.Составитель В. КузьмичевРедактор А. Ревин ТехредЛ,Коцюбняк Корректор Е. СирохманЗаказ 6924/37 Тираж 822 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4