Способ дифференциальной диагностики гемобластозов

(19) (11) 3(51) А 6 1 В 1 О/ 0 0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) (57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ путемисследования клеток крови, о т л ич а ю ш н й с я тем, что, с цельюповышения точности способа, проводят реакцию розеткообразования лейкоцитов пациентов с тучными клетками в соотношении (50-100):1 соответственно, полученную смесь центрифугируют, осадок ресуспендируют,подсчитывают образовавшиеся розетки и при величине розеткообраэования 5,0-6,2 диагностируют лимфогранулематоэ, а при величине этогопоказателя 16,7-31,5 диагностируютлейкоэ.Изобретение относится к медицине,в частности к диагностике гемобластоэов.Известен способ диагностики гемобластоэов, основанный на цитоморфологическом исследовании, позволяющемпроводить количественную дифференцировку отдельных элементов гемограммы,миелограммы и констатироватьстепень зрелости клеток крови 1 П .Недостатком способа является егоневысокая точность.Иэвестен также способ дифференциальной диагностики гемобластозовпутем исследования клеток крови С 21.Однако известный способ также 15не обладает высокой точностью.Целью изобретения является повышение точности способа.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу дифференциальной диагностики гемобластозовпутем исследования клеток в крови,проводят реакцию роэеткообразования лейкоцитов пациентов с тучнымиклетками в со тношении (50-100):1 25соответственно,. полученную смесьцентрифугируют, осадок ресуспендируют, подсчитывают образовавшиесярозетки и при величине розеткообраэования 5,0-6,2 диагностируют,лимфогранулематоэ, а при величинеэтого показателя 16,7-31,5 диагностируют лейкоз,Способ осуществляют следующимобразом.Из гепариэированной крови пациента в градиенте фиколла и верографина выделяют лимфоциты известным способом.Тучные клетки получают путемпромывания брюшной полости крыс 4010 мл раствора гемоцелл с последующей очисткой суспензии клетокв градиенте Фиколла и верографина.Пробы, содержащие смесь.лейкоцитов и тучных клеток в соотношении (50-100):1 соответственно, центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин.Образовавшийся осадок клеток ресуспендируют пастеровской пипеткой и в виде капли переносят на предметное стекло, покрытое тонким слоем 0,1 нейтрального красного. Тучные клетки окрашивают при трехкратном пипетировании капли, Суспенэию вносят в гемоцитометр и подсчитывают количество розеток на 200 тучных клеток. Розеткой считают клеточную ассоциацию, включающую тучную клетку с присоединенными к ней тремя и более лейкоцитами. 60И при величине розеткообразования 5,0-6,2 диагностируют лимфогранулематоз, а при величине этого показателя 16,7-31,5 диагностируют лейкоз. 65 П р и м е р 1. У больного Аберут кровь на исследование. Вцентрифужную пробирку наливают 2мл смеси фиколла и верографина(плотность 1,077) и наслаивают нанее 2 мл гепаризированной кровибольного. Полученную смесь центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин.По окончании центрифугированияв интерфазе на границе плазмы крови и смеси фиколла с ферографиномнаблюдают образование белогокольца, содержащего преимущественно лимфоциты.Клетки кольца отбирают пастеровской пипеткой и переносят в пробирку, где дважды отмывают растворомгемоцелл, ресуспендируют в этомрастворе, подсчитывают в гемоцитометре и разводят до концентрации 10/мл.Тучные клетки получают следующим образом. Под гексеналовым внутримышечным наркозом крыс м,весом150-200 г внутрибрюшинно вводят10 мл подогретого до 37 С раствора/гемоцелл.В течение 2 мин. делают массажбрюшной стенки, затем делают еесрединный разрез и кишечник крысыперекладывают в стеклянную воронку,помешенную в центрифужную пробирку.Введенный в брюшную полость растворгемоцелл, содержащий вымытые клеткиперионеальной полости, собирают впробирку, затем 5 мл этой взвесиклеток наслаивают в центрифужной про.бирке на 2 мл смеси фиколла и центрифугируют 15 мин нри 250 об/мин,По окончании центрифугирования вгетерофазе собираются лимфоциты,атучные клетки оседают на дно пробирки. Содержимое пробирки до самогоее дна отбрасывают, а тучные клетки,лежащие на дне пробирки,ресуспендируют в растворе гемоцелл.и 2 разаим же открывают.Затем взвесь клеток в виде каплипереносят пастеровской пипеткой напредметное стекло, покрытого тонкимслоем высохшего 0,1 нейтральногокрасного.Каплю 3 раза пипетируют пастеровской пипеткой. При этом нейтральныйкрасный окрашивает тучные клетки,алимфоциты, содержащиеся в виде небольшой примеси, остаются бесцветными.Затем эту взвесь переносят в гемоцитометр, подсчитывают количествотучных клетбк и разводят до концентрации 10 ф/мл.В пробирку помещают 1 мп взвесилейкоцитов больного лимфогра,нулематозом и 1 мл взвеси тучных клеток,содержимое перемешивают и центрифугируют 5 мин при 250 об/мин,1068100 Составитель Н. ХрусталеваТехред Л.Пилипенко КоррЕктор Й.Зимокосов Редактор А. Черных Заказ .11351/3 Тираж 691 ПодписноеВНИИИИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 филиал иии фиатент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 Образовавшийся осадок клеток ресуспендируют паетеровской пипеткой и в виде капли переносят на покровное стекло, покрытое тонким слоем 0,1 нейтрального красного. Вносят суспензию в гемоцитометр и подсчитывают количество образовавшихся розеток на 200 тучных клеток. Ири этом наблюдают величину розеткообразования равную 6,0, что соответствует диагнозу лимфогранулематоз. 10И р и м е р 2. У больного Б берут кровь на исследование. В пробирку помешают взвеси лейкоцитов больного лейкозом и взвесь тучных клеток, полученные способом описанным . 15 в примере 1,. в соотношении 50:1 соответственно.Пробы центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин., осадок ресуспендируют и подсчитывают количество образо- . 20 вавшихся розеток на 200 тучных клеток. В данном случае наблюдают величину розеткообразования равную30,0, что соответствует диагнозулейкоза. И р и м е р 3. Пробу, содержащую смесь лимфоцитов больного лейкозом и тучных клеток в соотношении 100:1 соответственно, центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин., осадок ресуспендируют. и подсчиты- . вают количество образовавшихся розеток на 200 тучных клеток, Ири этом величина розеткообразования составила 16,7, что соответствует диагнозу лейкоза.Использование предлагаемого способа дифференциальной диагностики гемобластозов позволит повысить точность диагностики, способствовать развитию представлений о природе этих патогенетических процес,сов, что позволит повысить эффективность лечения больных.