Способ получения антисыворотки к фактору уш

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК 39/395 4 (51) ПО ТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬ(7 1) Ленинградский ордена ТрудовогоКрасного Знамени научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови(54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИСЫВОРОТКИ К ФАКТОРУ Ч 111 путем иммунизации животных специфическим антигеном с последующим забором крови, отделением сыворотки и ее очисткой посредством адсорбции плазмой, не содержащей фактора Ч 111, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, животных иммунизируют криопреципитатом плазмы человека, содержащем фактор Ч 111, циклом, состоящим из 4 инъекций с трехдневным интерваломи 1 инъекции через 20-22 сут, при разовой дозе ан-. тигена 50-60 мк/кг веса животного, а забор крови осуществляют дробно через 5-7 дней после последней инъекции в течение 7-9 дней.2, Способ по п. 1, о т.л и ч а- Я ю щ и й с я тем, что адсорбцию сыворотки осуществляют плазмой больных болезнью Виллебранда. С:1 10597Изобретение относится к медицине,преимущественно к иммуногематологии,и может быть использовано для дифференциальной диагностики гемофилии,болезни Виллебранда.5Известен способ получения антисыворотки к фактору Ч 111 путем иммунизации животных специфическим антигеном, с последующим забором крови,отделением сыворотки и ее очисткой 1 Опосредством адсорбции плазмой, несодержащей фактора Ч 111 Я .Однако известный способ трудоемкий, поскольку для его выполнениятребуется предварительное выделение 15высокоочищенного специфического антигена.Целью изобретения является упрощение способа.Поставленная цель достигается 20тем, что в способе получения антисыворотки к фактору Ч 111 путем иммунизации животных специфическим .антигеном с последующим забором крови,1отделением сыворотки и ее очисткой 25посредством адсорбции плазмой, несодержащей Фактора Ч 111, животныхиммуниэируют криопреципитатом плазмы человека, содержащим фактор Ч 111,циклом, состоящим из 4 инъекций стрехдневным интервалом и 1 инъекциичерез 20-22 сут, при разовой дозеантигена 50-60 мг/кг веса животного,а забор крови осуществляют дробночерез 5-7 дней после последней инъ 35екции в течение 7-9 дней.Кроме того, адсорбцию сывороткиосуществляют плазмой больных болезнью Виллебранда,П р и м е р, 200 мл крови человека стабилизируют 3,87.-ным растворомцитрата натрия в соотношении 9: 1,Затем ее центрифугируют при 4000 об/минв течение 30 мин при 4 С, Полученн ю,плазму (около 100 мл) замораживаютпри (-50)-(-70)С. Через сутки размо. раживают в проточной воде и центриФугируют при 2500 об/мин в течение40 мин при 4 С, Недостаточную жидкость отбрасывают, а полученный осадок, содержащий фактор Ч 111, растворяют в 1 мл цитратного буфера. 18Кроликов иммунизируют антигеномбез адъюванта подкожно в областьспины в течение цикла, состоящегоиз 4 инъекций с трехдневным интервалом и 1 инъекции через 21 день, приразовой дозе антигена 50 мг/кг весаживотного, через 5 дней осуществляют забор крови из ушной вены с определением титра антител к Фактору Ч 111(не ниже 1:16) и затем ежедневно втечение 7 дней до начала падениятитра, Полученные 10 мл крови выдерживают при 3 С в течение 2 ч и оставляют в холодильнике на ночь.После этого кровь центрифугируютпри 1500 об/мин в течение 10 мини получают 4 мл сыворотки, Полученную,антисыворотку адсорбируют плазмой больных болезнью Виллебранда,у которых отсутствует антиген Фактора Ч 111, при соотношении сыворотки к плазме 1:05 и 1:0,25, Пробирку со смесью инкубируют при 37 Св течение 4-6 ч и оставляют на ночь при 4"С. После этого преципитат удаляют центрифугированием при1500 об/мин в течение 10 мин. К полученным 3,5 мл сыворотки добавляют 0,7 мл 3,8 Е-ного раствора цитрата натрия, нагревают при 56 С в течение 30 мин и центрифугируют при1000 об/мин в течение 10-15 мин при комнатной температуре. Осадок отбрасывают. Диагностическую сыворотку стабилизируют мертиолятом в соотношении 1000: 1, разливают в стерильных условиях во Флаконы или ампулы, по 1 мл и замораживают при -20 С для хранения.Данные об активности антисыворотки приведены в таблице.Из данных, приведенных в таблице,видно что активности предлагаемой(4 серии) и известной сывороток кфактору Ч 111 идентичны,Использование изобретения позволит упростить способ получения анти- сыворотки к фактору У 111, удешевить целевой продукт, многократно использовать животных продуцентов.1059718 Активность антисывороток, титр по прототипу В серии По Ухтерлони 50781 1.16-32 1:32 1:32 Усредненныеданные 1:32 1:32 1:32 1:32 1:32 1:32 Редактор Л. Горькова Техред И. Гергель Корректор Е. Рошко Заказ 132/3 Тираж 722 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 12108130482170682 Сравнительные данные активности антисыворотки пц, предлагаемому изобретениюпо Бринкхаузу Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4