Способ выделения специфического фактора уш

,5 П а 01 И ЗЗ/4 БРЕТЕНИ АТЕНТ шего имино алкил 11 ьдс и Робер 2. Способ по ющийся те указанный полим взаимодействию амином. 3. Способ по щ и й с я тем,указанный полим взаимодействию 4Способ по й с я тем,одной жидкос осуществляюп.1, о т л что исполь р, прдверг метоксивт п.1, о т л что взаимо и с полиэл при рН 5, иую ламином. ичаюействиектроли,5. СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗО(72) Джосеф Эдвард ФилЦжэксен Слокомб (США)(54) (57) 1. СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ФАКТОРА Ч 111 из сыворотки или плазмы крови путем контактирования исходной жидкости с нерастворимым в воде поперечно-сшитымполиэлектролитом - сополимероммалеиновой кислоты или ее ангидрида и ненасыщенного мономера, выбранного из группы, состоящей изэтилена, стирола и иэобутилена,со степенью замещения карбоксильных или ангидридных групп аминоимидами, выбранными из группы, состоящей из динизшего алкиламино-низда, ра чества ангидр послед ч а ю устран ции фа ния, и мер, и с алко алкокс атомов ве 50 лкилимида и низшего алкили-(низшего-алкилимида), где содержит 1-5 атомов углеровной 2-10 от общего коли- указанных карбоксильных или идных групп в сополимере, с ующим элюированием, о т л и щ и й с я тем, что, с целью ения предварительной активактора 7111 в процессе выделеспользуют указанный сополиодвергнутый взаимодействию ксиалкиламином, в котором игруппа и алкил содержат 1-5 углерода, взятым в количест мол.Ъ.п.1, о т л и ч ам, что используют ер, подвергнутый с метоксипропил1082338 18 Таблица 4 Добавка МОЭА,Выход. продукта,г Прогон М,%С, Ъ 8,61,206 8,15 3,18 205 15, 0 Формапродукта Н, 3 Амин, мол.В Соединение для взаимодействия МИБПА,мол,Ъ Про- - флмАПА, гон 1 5(7,66 г) 5(10,89 г) 85(87,05 г) Этаноламин Свободный 8,57амин2 5 5 85 (87,05 г) НС 1 8,41 1,81 85 (107 г) 3-Оксипропил- Свободный 8,02 амин аминб 5 7 5 85 (113 г) НСЕ 7,75 1,85 7(15,25 г) 81(85,2 г) Этаноламин Свободный 8,63амин 8 5 81(85,2 г) - ф ф -НСВ 8,49 2,57 П р и м е ч а н и е 3 Все молярные соотношения составов в этом и остальныхпримерах - в пересчете на амин; поскольку сшивающийагент взаимодействует на обоих концах, его молярныеколичества вдвое больше рассчитанных на ангидриднуюоснову,П р и м е р б. Повторяют способпримера 5 за исключением того, чтопосле взаимодействия ДМАПА и МИБПАвместо метоксипропиламина (МОПА)добавляют 85,77 г (1,27 моль)МОЭА (метоксиэтиламина), Получают П р и м е р 7, Применяют способ примера 1, получая продукты, в которых избыточные ангидридные группы, остающиеся после взаимодействия ДМАПА и МИБПА, подвергают полному взаимодействию либо с оксиэтиламином, либо с 3-оксипропиламином, либо с 2-оксипропиламнном (табл.5). Продукты получают и как свободные амины (с применением 2 продукта, один в виде свободногоамина путем обработки способамипримера 1, другой - в виде солихлористоводородной кислоты обработкой способами примера 2. Результаты синтеза по примеру 6 даны в табл.4,способов примера 1),и как соль хлористоводородной кислты (с применением способов примера 2). Первый час периода агрегации ЭАМК в ксилоле с обратным холодильником осуществляют с аэеотропным удалением воды, причем в каждом случае МИБПА добавляют в виде смеси с 1,5 мл воды.Результаты приведены в табл.5.Т а б и и ц а 5.2 Диэтиламиноэтиламин 8,71 3 Диме тиламинопропилами н 7,66 9,84 4 Диэтиламинопропиламин 5 Диоксиэтиламинопропиламин 12,20 6 Дибутиламинопропиламин 13,98 2-Амино-диэтиламинопентан 11,86 240 8,63237 7,50 2-Аминометил-этилпирролидин 9,61 3-Амино-Ю-этилпиперидин 9,61 10 И-Аминоэтилпиперидин 9,61 11 3-Аминопропил-пирролидон 10,66 12 И-Аминоэтилморфолин 10,06 10,81 13 И-Аминопропилморфолин 14 М-Аминоэтилпиперазин 9,69 15 2(2-Аминоэтил)пиридин 9,64 16 И-Фенилэтилендиамин 10,27 249 8,91 П р и м е р 8. Получают целый .ряд полиэлектролитов, в которых содержание сшивающего агента (МИБПА) выдерживают при 5 мол,В, а блокирующим амином, взаимодействующим с избытком ангидридных групп, в каждом случае является этаноламин в концентрации 85 мол.Ъ. Функциональное звено, выполняющее потен - циальную катионную функцию, выдерживают в количестве 5 моль, но природу и структуру функционального звена варьируют с помощью применения 16 различных реакционноспособных аминов.Во всех случаях применяют оборудование, ЭАМК и ксилол согласно примеру 1. Шлам нагревают до 90- 95 С, добавляя 10,89 г (0,075 моль) МИВПА с перемешиванием 1 ч при 95 фС, Затем добавляют 0,075 мольфункционального амина и перемешивают 1 ч при 95 С. Шлам затем нагревают с обратным холодильником(134 цС), удаляя полностью воду азеот.ропной дистилляцией при конечной тем.пературе 139 С. Затем шлам охлаждают до 95 С, добавляя 87,05 г оксиэтиламина и перемешивая шлам 1 чпри 95 С. Затем температуру шламаповышают до 134 бС, полностью удаляя воду от реакции азеотропнойдистилляцией до конечной температуры 139-140 С. Целевой шлам фильтруют в горячем виде и перераба,тывают в виде свободного амина поспособу примера 1, сушат, дробятна шаровой мельнице и пропускаютчерез отверстия 100 меш, Результатысинтеза даны в табл.6. 240 8,86 255 8,68 252 8,71 228 8,61 256 8,56 255 8,58 232 8,67 219 8,73 221 8,35 250 8,75 252 8,78 240 9,13 240 8,971082338 22 21 алкилимидного замещения, а 3-аминоИ-этилпиперидин и И-аминопропилморфолин (прогоны 9 и 13 выше)вкачестве примера гетероциклического аминоалкилимидного замещения.Во всех трех случаях полиэлектролиты н ниде соли получают с применением оксиэтиламина и метоксипропиламина н качестве третичного амина, взаимодействующего со всеми 10 избыточными ангидридными группами.Эти продукты приведены нтабл. 7,Таблица 7 Выход продукта,г Состав, мол.% СР, Ъ Прогон МИБПА Функциональный амин Третичный амин 5 5-Диметиламинопропил-Оксиэтил 8,41 1,81 амин амин 85-Метоксипро 7,79 2,62пиламин 5 То же 5 5-3-Амино-И-этил- . 85-Оксиэтиламин 238 7,37 1,54 пиперидин 85-Метоксипропил8,19 1,20амин 5 То же 85-Оксиэтиламин 250 8,55 1,68 5 5-3-Аминопропил- морфолин 85-Метоксипро 7,58 1,59пиламин 5 То же П р и м е р 9. При получении гидрохлоридных солей полиэлектро литов общего состава (5 молЪ сшивающего агента МИБПА, 5 мол.З трех различных функциональных аминоалкилимидных звеньев и 85 мол,Ъ нефункциональных имидных звеньев) работают по методике примеров 1 и 2 (см,табл.7).П р и м е р 10. Получают метоксипропилимидные проиэнодные сополимера, содержащего стирол и ангидрид малеиновой кислоты, как в примере 5. Оборудование то же, что и в приме-. ре 1. Первоначальную смесь 101,1 г (0,5 моль) стирола - ангидрида малеиновой кислоты и 2,7 л ксилола нагревают с обратным холодиль ником при 135 оС, аэеотропно дистиллируя воду 1 ч и затем охлаждая до 125 С; затем добавляют 2,55 г (0,025 моль) ДМПА, нагревая смесь без обратного холодильника 1 ч. 65 Амины прогонов 1-7 янляются примерами диалкиламиноимидного замещения в полиэлектролите, в то время как амины прогонов 8-15 представляют сббой примеры петероциклического аминоалкилимидного замещения. Для оценки 3 из них обрабатывают как соль хлористоводородной кислоты. Применяют метод примера 1, а при переводе в соль работают по способу примера 2. Диметиламиноропиламин (прогон 3 выше) выбирают в качестве примера диалкиламиноЗатем добавляют смесь 2,91 г (0,025 моль) гексаметиленднамина (ГМДА) и 1,0 мл воды, продолжая нагревать с обратным холодильником 1 ч. Через час снова добавляют 2,55 г ДМАПА (0,025 моль) и 1 ч, нагревают при 125 С. Шлам затемФнагревают до 135 оС с обратным холодильником н течение 4 ч с азеотропной дистилляцией воды (собрано 1,25 мл). По охлаждении до 125 С добавляют 40,56 г метоксипропиламина, нагревая затем шлам 1 ч до 125 С, Затем шлам нагревают с обратным холодильником (136 С) с азеотропнойодистилляцией в течение б ч, удаляя тем самым 8,2 мл воды с помощью ловушки Дина-Старка. Продукт получают в виде гидрохлоридной соли с применением способа примера 2 и 5,0 мл концентрированной 12 н. хлористоводородной кислоты. Целевой промытый продукт составляет 113,0 г5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 и по анализу содержит 5,27 азота и 1,00 хлора.П р и м е р 11. Получают метилок. сипропилимидные производные сополимера, содержащего изобутилангидрид малеиновой кислоты, как в примере 5, применяя оборудование примера 1. Исходная смесь 154,16 г (1,0 моль) изобутилена-ангидрида малеиновой кислоты и 2,7 л ксилола обрабатывают с обратным холодильником при 1350 С при азеотропном удалении воды в течение 1 ч, после чего охлаждают до 125 С. После этого добавляют 5,11 г (0,05 моль) ДМАПА, нагревая шлам 1 ч при 120- 125 С без обратного холодильника. К этому шламу добавляют 7,26 г (0,05 моль) МИБПА и 1,0 мл воды, после чего смесь снова нагревают 1 ч при 120-125 С без обратного холодильника. После этого шлам нагревают с обратным холодильником (135 С), удаляя воду азеотропной дистилляцией в течение 4 ч. Конечная температура 137 С, количество отобранной воды 1,20 мл. После снижения температуры шлама до 120 С добавляют 84,7 г метоксипропиламина, нагревая смесь потом без обратного холодильника при 120-125 СО 1 ч. После этого температуру шлама повышают для дефлегмации (135 С) и 6 ч удаляют воду от реакции азеотропной диетилляцией. Конечная температура 137 С, количество собранной воды 16,3 мл. Продукт получают в виде гидрохлоридной соли с применением способа примера 2 с помощью 10,0 мл концентрированной 12 н. хлористоводородной кислоты. Целевой промытый и высушенный продукт составляет 186 г и содержит 6,44 азота и 1,25 хлора.П р и м е р 12. В колбу емкостью 5 л, оснащенную обратным холодильником, ловушкой Дина-Старка, мешалкой, емкостью для добавления реактива, термометром и оборудованием для очистки азотным газом, загружают 193,05 г сополимера типа ЭАМК, содержащего этиленангидрид малеиновой кислоты (1,5 моль ,в пересчете на ангидрид) и 2700 мл ксилола. Смесь перемешивают при 200 об/мин с помощью лопастной мешалки (6,5-дюймовой) с нагревом до температуры дефлегмации. При этой температуре шлам выдерживают 60 мин с полным возвратом флегмы при 135 С. По истечении 1 ч реактор охлаждают до 125 С под азотом, добавляя затем смесь 10,89 г МИБПА (0,075 моль) и 1,5 мл воды. Смесь затем нагревают с обратным холодильником (134 С) и выдерживают 1 ч при этой температуре, непрерывно удаляя воду азеотропно до конеч-. ной температуры 137 С. Температуру реакционной смеси снова понижают до 125 С в атмосфере азота, добавляя затем смесь 153,3 г (1,5 моль) ДМАПА и 4,5 мл воды. Затем нагревают до 133 С, выдерживая при этой температуре 1-10 мин до начала дефлегмации. В результате реакции образуется вода. Перемешивание и нагревание с обратным холодильником продолжают до завершения азеотропной дистилляции воды. Конечная температура 139 С,оДля получения гидрохлоридной соли приведенный шлам фильтруют в горячем виде, повторно растворяя жмых в 2700 мл смеси 3:1 ксилола со спиртом, перемешивая затем 1 ч с обратным холодильником и фильтруя в горячем виде. Этот прием повторяют при дефлегмации еще раз в течение 2 ч и третий раз в течение 3 ч, причем после каждого прогона фильтруют в горячем виде. Полученный экстрагированный продукт снова растворяют в 2700 мл ацетона в течение 1 ч при комнатной температуре и фильтруют, после чего жмых снова растворяют в 2700 мл ацетона в течение 1 ч при комнатной температуре и фильтруют. Этот экстрагированный жмых растворяют в 2700 мл спирта при комнатной температуре и переводят в гидрохлоридную соль путем добавления в течение 10 мин 112 мл концентрированной 12 н. хлористо- водородной соли с перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 ч, Фильтрованный продукт после этого промывают(при наличии шлама - с перемешиванием) три раза подряд 10 л деионизированной воды (каждый раз по 2 ч) и фильтруют. Солевидный жмых снова растворяют 4 раза в 2700 мл ацетона, каждый раз по одному часу в целях удаления воды, фильтруют, сушат на воздухе 30 мин и в вакуумной печи при 55 С в течение ночи. Целевой продукт состоит из 333 г проходящего через отверстия 100 меш продукта (не дробленого.), содержащего 10,65 азота и 13,03 хлора в виде хлоридного иона.П р и м е р 13. Применяя обо,рудование и способ примера 1 получают пробу-образец полиэлектролита с содержанием только звеньев сшивающих агентов МИБПА и МОПА, т.е. без ДМАПА или других функциональных аминовСмесь 193,05 г ЭАМК и 2700 мл ксилола нагревают с обратным холодильником 1 ч с удалением воды при 135 С в количестве 1,2 мл. Этот шлам охлаждают до 125 С, добавляяозатем 13,37 г (0,150 моль) МОПАс перемешиванием при 125 С в течение 1 ч. После этого за два приема добавляют: МИБПА - сначала в количестве 21,79 г (0,150 моль) и1,5 мп воды с перемешиванием 1 чбез обратного холодильника при125 С с последующим повышением темОпературы до 135 С и удалением водыазеотропно с обратным холодильником в течение 4 ч. Удаляют 7,4 млводы. По охлаждении до 125 С добавляют вторую порцию МИБПА в количестве 21,79 г (0,150 моль) и1,5 мл воды с нагревом шлама при125 С в течение 1 ч без обратногохолодильника. При 183 С осуществаляют второй процесс удаления водыазеотропной дефлегмацией, удаляя5,7 мл в течение 7 ч. Шлам снова охлаждают до 125 С, добавляя 80,23 гМОПА, перемешиваяпри 125 С 1 ч и,азеотропно удаляя воду с обратнымхолодильникам (135-138 С) в течеоние 8 ч в количестве 16,2 мл. Целевой шлам фильтруют в горячем видеи перерабатывают в виде свободного амина с применением способа примера 1. Продукт состоит из 260 г вещества, содержащего 8,57 азота.П р и м е р 14Проводят адсорбцию фактора УШ сгусткообразованияиз плазмы крови человека различными полиэлектролитами по приме-рам 1-13 с элюированием и выделением Фактора УШ из полимерного комплекса.Плазма крови человека, используемая для исследования Фракционирования, представляет собой свежезамороженную плазму из цельнойкрови доноров. Общее содержаниебелков такой плазмы колеблется впределах 60-80 г,на литр, причемболее высокие концентрации наблюдаются летом, а не зимой.Полученные звенья представляютсобой либо О-положительные либоА-положительные по типу.Фактор 1 Х сгусткообразованияможет быть удален из плазмы первым до адсорбирующего Фактора УШ.При этом процесс будет включатьследующие стадии:1. Оттаивают 5 звеньев свежезамороженной плазмы в водяной бане.при 37 С.2. Помещают оттаянную плазму вполиэтиленовый или полипропиленовыйхимический стакан. Отмеривают 1 лв полиэтиленовый мерный цилиндри выливают в 2"литровый полиэтиленовый химический стакан.3. Добавляют 0,35-0,50 г полиэлектролита примера 12 и доводятрН до 8,0 с помощью.1,0-малярнойгидроокиси натрия магнитной ме"шалкой. Мешают 20 мин, выдерживаярН 8,0,,цо 5,8 с помощью 1,0-моляоной ли 65 монной кислоты. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4, Отфильтровывают на воронкеБюхнера (12,5 см) с применениембумаги ватман Р 54 в полиэтиленовую бутыль, содержащую 4-литровую бездонную колбу на стекляннойпластине. Фильтрат сохраняют.5. Сцарапывают отфильтрованныйполимер с бумажного фильтра вполиэтиленовый химический стаканемкостью 100 мл, промывают бумажный фильтр 20 мл дистиллированнойводы и добавляют полимер в стакан,5 мин перемешивают магнитной мешалкой. Фильтруют через бумагуватман Р 1 в воронку Бюхнера(4,Я см) так же, как в полиэтиленовый стакан,6. Соединяют фильтраты ступеней 4и 5 в качестве плазмы без фактора1 Х, из которой фактор УШ может бытьудален на следующих стадиях.Для пропускания через сито применяют 10 мл аликвоты этой плазмыбез фактора 1 Х в ходе последующего Фракцианирования фактора УШ.При соответствующих модификацияхоборудования этот же общий способ применяют при удалении фактораУШ из 1-литровых порций неразбавленной плазмы, не содержащей фактора 1 Х,7. Диспергируют 0,50 г применя- . емого полиэлектролита в 10 мл 154-малярного рассола, доводят рН до 4,0 или 1,0 н или 1,0-малярной лимонной кислотой. Лимонная кислота предпочтительнее вследствие стабилизирующего действия на Фактор УШ В случае применения аминовой формы полиэлектролита рН следует регулировать хлористоводородной или лимонной кислотой. Если же применять предварительно полученную Форму соли хлористоводородной кислоты, рН будет приближаться к 4,0. Все последующие приемы с применением 10-миллилитровой аликвоты осуществляют в полипропиленовых или поликарбонатных центрифугах емкостью 50 мл. Перемешивают очень маленькими магнитными стержнями.8. Центрифугируют дисперсию ступени 7 в течение 5 мин при 2000 об/мин и выбрасывают всплывший продукт.9. Добавляют 10 мл 0,154-малярного рассола и осторожно доводят рН до 5,8 0,1- или 1,0-малярной гид-" роокисью натрия.10. Центрифугируют дисперсиюступени 8 пять мин при 2000 об/мин и выбрасывают всплывший продукт.11. Осторожно доводят рН плазмы без фактора 1 Х ступени 630 12, Добавляют 10 мл аликвотыплазмы ступени 11 к выпавшему полиэлектролиту ступени 10. Перемешивают 20 мин, выдерживая рН при 5,8.13. Центрифугируют 5 мин при2000 об/мин.14. Отбирают соответствующуюпробу всплывшего продукта ступени 13 для биоопытов по неадсорбированному фактору УШ (см. методикупримера 15). Выбрасывают всплывшийпродукт,15. Добавляют 10 мл 0,154-молярного рассола полимерного комплексана основе фактора УШ ступени 13, перемешивают 5 мин, центрифугируют и 15выбрасывают всплывший продукт.16. Добавляют 10 мл 1,7 молярного рассола к полимерному комплексу на основе фактора УШ (от ступени 15), доводят рН до 6,0 0,10 молярной лимонной кислотой с цельюэлюирования фактора УШ.17. Размешивают 20 мин, выдерживая рН при 6,0.18. Центрифугируют 5 мин при 252000 об/мин и отбираютсоответствующий образец-пробу от всплывшего продукта для проведения биоопытов на определение выделенногофактора УШ. Выбрасывают всплывший продукт.С применением надлежащих модиФицированных приборов и оборудования для фильтрации и незначительных отклонений от процессов промывки и элюирования Фракционируютфактор УШ в объеме 1 л (от ступе-ни 6), используя 60 г полиэлектролита на 1 л плазмы. Снова на Фильтрате ступени 14 проводится биоиспытание по определению фактора УШ 40(не адсорбированного), а на фильтрате ступени 18 - по выделениюфактора УШ.П р и м е р 15. Для сопоставления выходов описанных смол относительно выделения фактора УШиз неразбавленной плазмы кровичеловека методикой примера 14 иоценкой уровня. активации полученного таким образом фатора УШ прово.дят два опыта.Выделение или выход фактора УШ.В качестве модификации опытаполучения тромбопластина (ТСТ)проводится двухступенчатый биоопытизмерения фактора УШ. В основном,в этом опыте измеряют время, необходимое для образования сгустковстандартной плазмы-субстрата (свежей, обедненной тромбоцитами) после выделения из продукта среднего фуровня сгусткообразования, посредством контролируемого по времени добавления факторов сгусткообразования из других источников.фактоРы, необходимые для обычного 65 времени сгусткообразования в опытеТСТ в пробирке (12-20 с), этофакторы ХП, Х 1, 1 Х, ХШ, У, фосфолипид и хлористый кальций. Эти факторы получают из исходных смесейхлористого кальция, сыворотки крови человека для факторов Х 11, Х 1и 1 Х, сыворотки крови крупного рогатого скота для фактора У и хлороформный экстракт человеческогомозга для фосфолипида с применениемшкалы времени, после чего добавляют обедненную тромбоцитами плазму.Время образования сгустков целевойплазмы-субстрата замеряют автоматически. Перед последним добавлениемплазменного субстрата добавляютсвежий плазменный контроль (таже плазма, что и Фракционированияфактора УШ) или целевые злюентыфактора УШ в соответствующем разбавлении в качестве измеряемого источника фактора УШ.Составляют стандартные кривыес применением стандартизованнойплазмы известного содержания Фактора УШ с содержанием 1 единицы факто.ра УШ на мл. Стандартные кривыенаносят на миллиметровую бумагу вкоординатах: время образованиясгустков в секундах против единицактивности фактора УШ на мл (разбавления укаэанного плазменногоконтроля) . По этим стандартнымкривым получают содержание фактораУШ в единицах/мл для испытуемыхпроб-образцов.Стандартные кривые составляютдля каждодневных прогонов при определении фактора УШ,Весь опыт заключается в определении времени и температуры сприменением фиброметра ВВЬ Г 1 Ъгощесег "Г(Ьго Буяещ ТИ", поставляемого ВВЬ Р 1 ч 1 з 1 оп оГ Весоп,Р 1 с 11 пяоп апд Со., Сос)еув 7111 е,Магу 1 апй и оснащенного двумя обогревательными блоками ТЪегтпа 1 РгерВо 1 сЕ и автоматической пипеткойконтроля времени.Био-испытание на активацию фактора УШ.Опыт предназначается для замера относительного времени активации фактора УШ вне плазменныхусловий в качестве модификации описанного опыта на частичное тромбопластиновое время. В этом тесте добавляют только фосфолипид и хлористый кальций к субстрату, обедненному тромбоцитами, Время сгусткообразования замеряют на укаэанномфиброметре путем добавления соответствующих разбавленных растворов фактора УШ в плазменный суб -страт. Не активированный контроль(плазма) в этом тесте дает срокисгусткообразования в 190 с. Более30 1082338 Та блица 8 г ПЭна10 млплазмы Полиэлектролитныйсоставпо примеру Применяеформа Предвари отрегули ное знач,72 299 Нет вободный амин 0 Лимонной кислото 4 0,56 2 0,еэ регулирования 8 лимонной кислотой Беэ предварительногодоведения рН до 4,0 Н доведен д 259 Н,42 27 Есть 0,43 10 прогон 0,53 быстрое сгусткообраэование(150 с) говорит об активации или же о присутствии активирующих ферментов. В каждом прогоне определения активации применяют два контроля препаратов быстрого сгусткообраэования, а также плазменный контроль и буфер.Био-испытания на выделение проводят с остающимся от ступеней 14 и 18 (пример 14) продуктом, в то время, как опыты на активацию проводят с остающимся от ступени 18 продуктом. Все остающиеся продукты соответствующим образом разбавляются в имидазоловом буфере с получением целевого рассола с молярностью ниже 0,08.П р и м е р 1 б. Выход фактора УШ и активации продуктов, полученных в примерах ,с применением 10 мл продукта фракционирования плазмы примера 14.Широкий спектр получения в примерах 1-13 продуктов испытывают на фракционирование фактора уШ и активацию способом примера 14, подвергая био-испытаниям на эти два параметра по способу примера 15, Приведенные дальше результаты действительны для фракциоцирования с при.менением 10 мл плазмы и 0,1-0,8 гПЭ на 10 мл плазмы. Предварительной настройкой значения рН дляполиэлектролитов, полученных иприменяемых в виде аминов (ступень7, пример 14), во время процессафракционирования получают 1 п э 11 ц (О соль, применяя для этого хлористоводородную или лимонную кислотууказанным образом. Как указано в примере 14, плаз ма меняется от смеси к смеси, атакже зимой или летом относительнообщего содержания белков. Аналогично изменяются и различные звенья плазмы, применяемые для этихисследований, а именно по содержанию фактора УШ: от 0,8 до 1,3 звена на мл (пример 15, опыт 1). Время сгусткообразования плазмы по опыту на активацию (пример 15, опыт 2)колеблется между 185 и 240 с.Результаты испытаний приведеныв табл.8,0,5 11 11 0,4 НСВ 0,49 296 1 1 1 1 810,5 Лимонной кислотой 0,57 277 11 1 91 1 0,64 314 0,5 11 11 Без регулирования 0,76 258 0,5 5 прогон 1 НС 0,5 0,72 254 0,80 261 в- 1 - 3 0,80 338 10,5 11 11 4 0,62 111 0,5 вв 4 в 9 7 прогон 2 31 0,5 1082338 Без испытания Без испытания Без испытания 32 0,49 0,56 0,65 0,50 198 270 308 324 Нет Нет Нет Есть1082338 34 33 Продолжение табл,8 2 3 4 В 6 7 252 0,61 Нет 2 НСС 0 5 11 1240 0,58 Без регулирования 0,43 198 Лимонной кислотой Нет 2 НС 3 11 1 Без регулирования 0,57 0,5 107 Есть 11 11 3 Свободный амин 0,5 0,55 225 Лимонной кислотой Нет НСС 11 11 0,60 910,49 2480,57 94 0,5 Без регулирования Есть 1 1 5 Свободный амин 0,5 Лимонной кислотой Нет 6 НС 8 0,5 Без регулирования Есть 117 Свободный амин 0,5 0,45 231 Нет 117 Есть Без регулирования 8 Нса,0,5 0,51 0,45 Лимонной кислотой 299 Нет.Нет 0,5 0,33 210 0,4 0,30 253 12 0,1 НСР 13 Свободный амин 0,5 НСЯ 12 10 Без регулирования 223 210 Нет Свободный амин 60 Лимонной кислотой 600 287 Нет 406 3 прогон 3 60 301 737 300 4 1 60 650 265 3 в- 5160 3 - 1 - 7 510 60 364 770 4 -- 2 60 336 480 3 - - 9 60 239 П р и м е р 17, 2 образца фактора УШ полученных с применением полиэлектролита примеров 1 и 7 (прогон 2), сравнивают относительно токсичного действия путем внутри. венного вливания гончим собакам. 0,54 205 0,52 263 Опыты проводят на животных весом8-9 кг; фактор УШ получают в сте Рилизованной воде (10 единиц на мл),Единичные дозы по 100 единиц10 Изобретение относится к фракционированию крови, в частности кспособам выделения специфическогоФактора УШ.Процесс свертывания крови является сложным Физиологическимявлением, включающим взаимодействие многих веществ, содержащихсяв обыкновенной цельной крови, Известно, что в некоторых организмах отсутствуют или же содержатсяв слишком малом количестве определенные Факторы, связанные с ме- .ханизмом свертывания крови. У пациентов, страдающих классическойФормой гемоФилии, в недостаточном 15количестве содержится антигемофильный Фактор А (АГФ, фактор УШ). Ворганизме пациентов, страдающихгемофилией В, отсутствует в кровиплаэменно-тромбопластиновый компонент 20(ПТК, Фактор 1 Х), У небольшого числа страдающих гемофилией также нехватает так называемого фактора ФонВиллебранда, родственного факторуУШ. Известен целый ряд иных Факторов, играющих: важную роль в механиз"ме свертывания крови, отсутствиекоторых также может привести к нарушениям кровотечения, это, например, факторы П, УН и Х. Последниетри фактора совместно с фактором1 Х зачастую называют Факторамипротромбинового комплекса,В системе развития современныхпрограмм хранения крови, включающих сбор и складирование больших З 5количеств крови и ее компонентов,отработка надлежащих систем консервирования стоит очень остро.Начиная с периода второй мировойвойны вошло и практику хранениекрови н растворе лимонной кислоты,цитрата натрия и декстрозы, известного как АСО-Ь 1 оос 1.Проблема консервирования кровисильно упрощается, если она сводится к консервированию отдельныхкомпонентов крови, поскольку легче достичь условий, необходимыхдля данного компонента, чем дляцельной крови. Более того, совершенно излишне и даже вредно вводитьв организм пациента большее числокомпонентов крови, чем требуется.Так, страдающим гемофилией и требующим определенных факторов свертывания крови, лучше всего вводитьтолько эти факторы или, по меньшеймере, очищенный концентрат этихфакторов.Известно фракционирование Факторов свертывания крови, в частности фактора УШ, и Факторов, родственных протромбиновому комплексу,К ряду различных соединений, находящих применение при таком Фракционировании, относятся, например, 65 сульфат бария, гидроокись алюминия, полиэтиленгликоль, ринанол- -(6,9-диамино-этоксиакридинлактат) глицин, ДЭАЭ-целлюлоза и ДЭАЭ-сефадекс 1 .Однако данный способ является многостадийным и поэтому трудоемким.Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ выделения различных компонентов крови, в том числе и фактора свертывания УШ, из сыворотки или плазмы крови с помощью не астворяющегося н воде поперечносжатого полиэлектролита. Способ предусматривает контактирование исходной жидкости с нерастворимым в воде поперечно-сшитым полиэлектролитом - сополимером малеиновой кислоты или ее ангидрида и ненасыщенного мономера, ныбранного из группы, состоящей из этилена, стирола и изобутилена, со степенью замещения карбоксильных или ангидридных групп аминоимидами, выбранными из группы, состоящей из динизшего алкиламинонизшего-алкилимида и низшего алкилимино-ди-(низшего-алкилимида), где алкил содержит 1-5 атомов углерода, равной.2-100 общего количества указанных карбоксильных или ангидридных групп и сополимере, с последующим злюированием. Процесс выделения основан на адсорбционном взаимодействии выделяемого белкового продукта и используемого полиэлектролита, имеющего в своей структуре электростатически заряженные группыОднако при Фракционировании фактора УШ определенными полиэлектролитами, известным способом обнаружено, что применение выделенных факторов крови в стандартных опытах определения времени сгусткообразования вызывает значительное сокращение времени сгусткообраэонания. Эта предварительная активация выделенного компонента - фактора УШ представляет собой серьезный недостаток при использовании этого материала в клинической практике, Такую преждевременную активацию наблюдают и на собаках при внутриненном введении этого фактора в организм собаки, Реакции состоят н следующих симптомах: изменение понедения - собака крутится н клетке в течение 24 ч.; реакция гемолиза, что проянляется н выделении гемоглобина с мочой; заметное сокращение количества тромбоцитов при одновременном повышении давления крови,Обнаружено, что эта преждевременная активация связана со структурой и составом адсорбирующего полиэлектролита, в котором могут содержаться свободные гидроксиль,37 Продолжение табл. 9 Таблица 9 Поведение собаки послевведения полиэлектролита по примеру Поведение собаки послевведения полиэлектролита пб примеру Показатели Показатели погон 2 7(погон 2) В ШШ ЭС 1 О Гемоглобин Беэ изменений Поведение со- Нормальбаки после ноевведения9 Крутится вклетке (расстройствоПНС) Химиэм кро- Нормальвиф" " ный%По бедренному катетеру, подключенному к записывающемуфизиографу для замера пульса и кровяного давления.По гемоцнтометру.ф По счетчику Социо 1 ег,Прогон по системе Теспп 1 сопЯМАС (18 биоопытов).Технико-экономическая эффективность способа заключается в получении специфического фактора уШ беэ предварительной активации. Время сгусткообраэования при использовании выделенного данным способом специфического фактора УШ значительно увеличивается, что обеспечивает воэможность эффективного использования данного компонента крови. Нормаль- Значительно ное пониженное (1-24 ч),Давлениекровищ Без изме- На 60нений виже(1-24 ч) Число тром"боцитовфф 25 Пульс Нормальный Без иэиенений(1-24 ч) Белые шарики 30 Красные шарики То же Заказ 1589/55 Тираж 823 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д. 4/5. Ф М О С С аю 4 ая групп омов гтаю 4 5 ные группы, способные к образованию водородных связей. Так, полигде В - алкил с числом ат Улерода 1-5;Е - двухвалентный углеводородный остаток с числом атомов углерода 2-18.Согласно известному способу полизлектролит может содержать 2-100 аминоимидных связей, причем ос щиеся карбоксильные группы - в ангидридной форме. Остаточные немодФицированные полимерные ангидридные звенья превращают в нейтральные группы или звенья путем взаимодействия непрореагировавших ангидридных звеньев с такими соединениями, как алкиламины, аминоспирты и спирты. В приведенной структурной формуле - Функциональные аминоимидные связи показаны при 1, по- перечно-сшивающие связи при 111, а остающиеся карбоксильные группы в ангидридной форме показаны в состоянии превращения в нейтральные группы блокированием или взаимодействием с аминовым спиртом при 11, вызывая образование оксиалкилимидных звеньев.Несмотря на указанное блокирование остаточных ангидридных групп аминовым спиртом при П, обнаружено, что свободные гидроксильные группы, введенные таким образом в полимерный каркас в виде оксиалкФлимидных групп при 11 (см.формулу), содействуют упомянутой преждевременной активации фактора УШ, фракционированного этим типом полиэлект. ролита. электролит может содержать следующиеструктуоные полимерные зыенья: Предполагается, что активацияфактора УШ может быть частично связана с присутствием плазменныхзимогенов или Ферментов от активации зимогена в выделенной фракции фактора УШ. Эти зимогены, как 35 известно, активируются отрицательно заряженными поверхностями илигидроксилированными поверхностями,могущими образовать водородныесвязи, такие как коллаген. Указан 4 Д ные полимеры, содержащие свободные гидроксилы, способны образовывать внутри- и межцепочную связь сбелками через образующиеся отрицательно заряженные воны.Целью изобретения является устранение предварительной активациифактора УШ в процессе выделения,Укаэанная цель достигается способом выделения специфического фактора УШ из сыворотки или плазмы крви путем контактирования исходнойжидкости с нерастворимым в водепоперечно-сшитым полиэлектролитомсополимером малеиновой кислоты илиее ангидрида и ненасыщенного мономера, выбранного из группы, состоящей иэ этилена,стирола и изобутилена, со степенью замещения карбоксильных или ангидридных группаминоимидами, выбранными из группы 60 состоящей иэ динизшего алкиламинониэшего-алкилимида и низшего алкилиминоди-(низшего-алкилимида), гдеалкил содержит 1-5 атомов углерода, равной 2-10 от общего коли чества указанных карбоксильных или5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 65 ангидридных групп в сополимере с последующим элюированием, причем используют указанный сополимер, подвергнутый взаимодействию с алкоксиалкиламином, в котором алкоксигруппа и алкил содержат 1-5 атомовуглерода, взятым в количестве50-85 мол.%.Обычно используют указанный полимер, подвергнутый взаимодействиюс метоксипропиламином, или метоксиэтиламином,Взаимодействие исходной жидкости с полиэлектролитом осуществ"ляют при рН 5,5-9,5Таким образом, весьма предпочтительным является перевод непрореагировавших ангидридных звеньев вовремя получения алкоксиалкилимидныхединиц с применением алкоксиалкиламина, например метоксипропиламина,Это ангидридное блокирование можетнестись в любой последовательностисинтеза полиэлектролита.Полимеры типа ЭАМК (этиленангидрид малеиноной кислоты или самакислота) на основе карбоновых кислот или их ангидридов, в частностиолефиноные полимеры на основе маленковой кислоты или ее ангидридаукаэанного типа. Сополимеры получают путем взаимодействия этиленаили иного ненасыщенного мономера илиих смесей с ангидридом кислоты вприсутствии перекисного катализатора в растворителе на основе алифатического или ароматического углевОдорода, растворяющего мономеры,но не растворяющего полученныйпромежуточный полимер. К соответствующим растворителям следует отнести бензол, толуол, ксилол, хлориронанный бензол и т,п. Перекисьбензоила обычно является предпочтительным катализатором. Другие перекиси: ацетила, бутирила, дитретичного бутила, лаурила и т.п. или желюбой из множества азо-катализаторов также удовлетворительны вследстние их растворимости в органических растворителях. Сополимер содержит, в основном, эквимолярныеколичества олефинового и ангидридного остатка, Он обладает степеньюполимеризации примерно 8-10000,предпочтительно примерно 100-5000при мол. массе около 1000-1000000,предпочтительно примерно 10000500000. Свойства полимера, как,например, молекулярная масса, регулируют выбором катализатора и регулировкой одной или нескольких переменных, таких, как соотношениереактивов, температура, концентрация катализатора или же добавлениемрегулирующих перенос цепи средств,,таких как диизопропилбензол, пропиононая кислота, алкилальдегиды и ТППосле образования исходного полимера ЭАМК его агрегатируют путемнагрева в инертном органическомрастворителе при температуре примерно 155-160 С, но ниже точки размягчения полимера, н течение приблизительно 15 мин. Вследстние этойагрегации улучшаются фильтруемость,качестна при сушке и физическиесвойства полимера, используемогопри получении полиэлектролита безсущественного уменьшения способности его поглощать белок,Однако для предлагаемого способа эта агрегация не играет существенной роли.Упомянутый перноначально полученный полимер, агрегатированный илине агрегатиронанный, представляетсобой поперечно-сшитый продукт,замещенный аминоимидными группамин последовательности, оптимизирующей свойства продукта, что осуществляется надлежащим распределениемспецифических групп внутри самихчастиц.Эти группы н общем основные имогут быть алифатическими илиароматическими. Предпочтительнымиалифатическими неразветнленнымигруппами являются динизшиеалкиламино-низшие алкилимидные илинизшиеалкилимнноди-(низшие-алкилимидные).Исходные сополимеры ангидридов и другого мономера можно перевести в карбоксилсодержащие сополимеры путем взаимодействия с водой и их соли аммония, щелочных и щелочно- земельных металлон и алкиламиновые соли - путем нзаимодейстния с соединениями щелочных и щелочно- земельных металлов, аминами или аммонием, К прочим пригодным производным приведенных полимеров относятся алкил или другие сложные эфиры, алкиламиды, диалкиламиды, фенилалкиламиды или фениламиды, полученные путем взаимодействия карбоксильных групп на полимерной цепи с выбранными аминами или алкилом, или фенилалкилоным спиртом, а также сложные аминоэфиры, оксиамиды и сложные оксизфиры, где функциональные группы отделяют алкиленом, фенилом, фенилалкилом, фенилалкилфенилом или алкилфенилалкилом или иными арильными группами. Звенья, содержащие амины или аминосоли, включая группы четвертичных солей, обычно получают взаимодействием карбоксильных групп .их ангидридных предшественников, где это возможно, с полифункциональными аминами, такими как ди 1082338жащей формой полимера в соответствуюметиламинопропиламино, при повышенных температурах с образованием имидной связи с вицинальными карбоксильными группами, Такие дополнительные свободные аминогруппы тогда могут переводиться в их простые или же четвертичные соли.Частичные имиды исходного полимера, например .типа ЭАМК, содержащего карбононую кислоту или ееангидрид, получают нагревом ограничевного количества вторичного илитретичного амино-низшего-алкиламина с ангидрид- или карбоксилсодерщем растворителе (например, ксилоле) при температуре примерно 140- 150 С до тех пор, пока больше неОбудет отниматься вода. Такая реакция одновременно дает имидные группы в соответствии с количеством добавленного амина; при этом снова образуются ангидридные группы для остатка полимерных звеньев. Таким образом образуются имид-полимерные продукты, для которых характерно содержание 2-100-ных имидных связей, причем если образуются остаточные карбоксильные группы, то н виде ангидридов.Альтернативно частичный амидный полимерный продукт можно перевести в частичный имидный продукт путем нагрева частичного амидного полимерного продукта в вакууме при 140-150 оС до прекращения отдачи воды, Такой имидный полимерный продукт также содержит сравнимые количества имидных и ангидридных групп в зависимости от числа амидных групп, первоначально содержащихся в исходном амидном полимерном продукте,Частичные вторичные или третичные амино-низшие-алкиламиды исходного полимера, например типа ЭАМК, содержащего карбоксильную кислоту или ее ангидрид, получают взаимодействием полимера с ограниченным количеством выбранного амина, взвешенного в таком растворителе, как бензол или гексан, с образованием производного полимера, содержащего частичный амид и ангидрид кислоты,или же его соответствующего амидкарбоксилатного производного. Число амидных групп зависит от количества применяемого амина в сравнении с количеством используемого полимера. Такие амидполимерные продукты обычно содержат 2-100 групп, причем остающиеся карбоксильные группы содержатся н виде кислотных или ангидридных групп.При необходимости может проводиться блокирование и деблокирование аминового звена реактива, применяемого при получении аминов 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 или иминов. Остаточные немодифицированные полимерные звенья можноперевести в нейтральные группы илизвенья путем взаимодействия с определенными нефункциональными группами, такими как алкиламины, аминоспирты и спирты.Альтернативно в полимере можнодостичь дополнительно катионногохарактера путем введения мономеров,придающих основный или катионныйхарактер, таких как С-винилпиридины, ниниламин, различные аминозамещенные винилбензолы (или толуолы и т.п.), аминосодержащие акрилаты (или метакрилаты и т.п,), винилимидазол и сходные мономеры такого же рода,Таким образом, в любом случеполимерный продукт будет содержать остаточные активные илй реакционноспособные группы, которыемогут принадлежать к различнейшим типам,включая смеси,при этом однакоэти активные или реакционноспособные группы или остаточные реакционноспособные места внутри полимера тем или иным образом содержат определенное процентное количество групп основного характеран целях придания полимеру необходимой оснонности.В частности, предпочтительныеполимеры, соответствующие приведенным требованиям и свойствам, выбранны из группы, включающей сопол 1 м .алимеры, содержащие этиленмалеиновуюкислоту или ее ангидрид, стиролмалеиновую кислоту или ее ангидрид, метилпентенмалеиноную кислотуили ее ангидрид и изобутиленмалеиноную кислоту или ее ангидрид.Как видно из сказанного, основные группы поликатионного или полиамфолитического электролита (ПЭ)обладают имидным характером, включая динизшие-алкиламино-ниэшие алкилимидные группы, полученные путем взаимодействия динизшего алкиламино-низшего-алкилимида с карбоксильными группами предварительнополученного полимера или же полимеризацией ненасЫщенного олефина сненасыщенными кислотой или ее ангидридом, содержащими также предварительно полученные имидные группы в количестне не менее части ненасыщенного реактива - поликарбоновой кислоты.Имидные группы можно образоватьпоперечным сшиванием полимера с помощью низшей алкилимино-Бос в (низшего-алкиламина), который в процессе поперечного сшивания путемвзаимодействия между конечными аминогруппами сшивающего агента и карбоксильными группами в полимерной цепи образует имидогруппы на обоихконцах сшивающей цепи с образованием желаемых низших-алкилимино-Ьс(низших-алкилимидных) связей. Другие группы, такие как диниэшие-алкиламино-низшие алкиламидные, иэ которых путем нагрева при повышенных температурах могут быть получены требующиеся имидные груп-. пы, также могут присутствовать. Могу 1 присутствовать и динизшиеалкиламино-низшие алкильные сложно- эфирные группы, так же как и другие группы, если только в полиэлектролитной молекуле содержатся требуемые процентные количества имидных групп необходимого типа, равно как и остаточные кислотные группы исходной ненасыщенной кислоты или ее ангидрида в случае, если полиэлектролит представляет собой полиамфолит. Кислотные и имидные группы не обязательно должны присутствовать в полиэлектролите, они могут присутствовать в виде своих простых производных, например солей.К алициклическим или ароматическим группам, которые могут быть замещены на агрегатированных полимерах типа ЭАМК, например, относятся амино-низший алкилпиридин, пиперидин, пипераэин, пиколин, пирролидин, морфолин и имидазол.Эти группы могут быть замещены на агрегатированном полимере способом, аналогичным аминам с алифатической цепью, но с применением вместо циклических аминов, например, следующих соединений:2-Аминопиридин;2-Амино-метилпиридин;2-Амино-метилпиридин;2-(2-Аминоэтил)-пиридин;4-(Аминоэтил)-пиперидин;3-Амино- И-этилпиперидин;И-(2-Аминоэтил)-пиперидин;И-(2-Аминометил)-1-этилпирролидин;3-Пиколиламин;4-Пиколиламин;2-(Аминоэтил) -1-этилпирролидин;М-(3-Аминопропил)-2-пирролидин;В-(2-Аминоэтил)-морфолин;И-(3-Аминопропил) -морфолин;4-Имидазол.Ангидридные блокирующие группыможно ввести в любой желаемой последовательности во время получения приведенных полиэлектролитов.Предпочтительно их вводить после образования поперечных связей и замещения желаемой функциональнойаминоимидной группой. Таким образомможно блокировать любую свободнуюангидридную группу путем примененияизбытка блокирующего агента.Наиболее предпочтительными блокирующими агентами являются метокси 510 пропиламин и метоксиэтиламин. Блокирующие ангидрид-агенты, такие какоксипропиламин и оксиэтиламин, являются недейственными для предотвращения предварительной активации факторов свертывания крови, фракционированных полиэлектролитами.Вместо них могут найти применениедругие агенты, характерные дляблокирования гидроксильной группы:алкилирующие (например, диазометан),ацилирующие (например, ацетилхлорид) и этерифицирующие всложный эфир (например, уксуснаякислота) средства.15 П р и м е р 1. В 5-литровую колбу, оснащенную обратным холодильником, ловушкой Дина-Старка, мешалкой, емкостью для добавления реагента, термометром и оборудованием 2 О для очистки азотом, загружают193,05 г сополимера типа ЭАМК, содержащего этилен и ангидрид малеиновой кислоты, (1,5 моль, ангидридная основа) и 2700 мл ксилола.Смесь перемешивают со скоростью200 об/мин с помощью мешалки, оснащенной лопастями в 6,5 дюйма, инагревают до температуры дефлегмации, которая колеблется в пределах 135-139 С в зависимости от соодержания воды в ЭАМК и азеотропногоудаления воды в течение периодадефлегмации. Шлам обрабатывают собратным холодильником 60 мин приполном возрасте флегмы при 135 С,После одного часа реактор охлаждают до 125 С в атмосфере азота,добавляя 7,66 г (0,0/5 моль) диметиламинопропиламина (ДМАПА) . Пере-.мешивание продолжают в течение 1 ч 40 при 125 С без обратного холодильника, после чего добавляют 10,89 г(0,075 моль) метилимино-бас -пропиламина (МИБПА), после чего всю смесьперемешивают еще 1 ч при 125 С, 45 Смесь затем нагревают с обратнымхолодильником (134 ОС) и выдерживают при этой температуре 7 ч,удаляя воду непрерывно азеотропнойдистилляциейКонечная температурасоставляет 138 С. В общей сложносоти собирают 5,3 мл воды. Температуру шлама снижают до 115 С, добавляя затем 127,02 г (1,42 моль) метоксипропиламина (МОПА). Смесь перемешивают 1 ч без обратного холодильника при 115-118 С, послеочего температуру повышают до 120 Св момент начала азеотропной дефлегмации ксилол-вода. Дефлегмациювыдерживают 6 ч, удаляя воду непрерывно азеотропной дистилляциейпри конечной температуре 138 С иавыходе 23,6 мл воды.Продукт выделяют в виде свободного амина по следующему способу.65 Указанный целевой шлам фильтруют в12 1082338 Таблица 1 Наличиеводы вовремяагрегации Блокирующийагент МОПА МИБПА ДМАПА Общий Молярвыход ностьпродук-та, г Прогон мол.Ъ г мол.Ъ г мол.Ъ Нет 7,66 5,0 10,89 10,89 5,0 7,66 5,0 5,0 10,89 5,0 7,66 5,0 7,66 5,0 10,89 5,0 горячем виде (100 СС, жмых еще разрастворяют в 2700 мл смеси (3:1)ксилола с этанолом, перемешивают собратным холодильником 1 ч и фильтруют. Эту ступень повторяют второй раз,применяя экстракционную 5смесь 3;1 ксилола со спиртом. Затем снова Фильтруют, жмых повторно растворяют в ксилоле (2700 мл)и перемешивают 1 ч при температуредефлегмации с последующей фильтрацией. Экстрагирование ксилолом повторяют еще раз, целевой жмых сноварастворяют в 2700 мл гексана в течение 1 ч при комнатной температуреи фильтруют. Экстрагирование гексаном повторяют еще 3 раза, послечего целевой жмых сушат на воздухев вальцовой мельнице с вращающимсяперфорированным дном в течение 1 ч,пропускают через сито с отверстиями 100 меш без дробления и сушат подвакуумом в течение ночи при 50 оС.Получают 165 г тонкого продукта,проходящего через 100 меш-отверстия,и 14 г более грубого продукта, не.проходящего через эти отверстия.Тонкий продукт испытывают, определяя присутствие в нем 8,09 азота и немедленно без трудностей диспергируют в 0,04-молярном рассоле.рН такой дисперсии (0,2 г продукта З 0в 20 мл 0,04-молярного рассола)составляет 8,10П р и м е р 2. В целях переработки в виде гидрохлоридной соли це левой реакционный шлам примера 1 фильтруют в горячем виде, после чего жмых снова растворяют с обратным холодильником в смеси 3:1 ксилола со спиртом два раза, снова 40 растворяют с обратным холодильником два раза в ксилоле аналогично приме. ру 1 и затем дважды экстрагируют при комнатной температуре в течение 1 ч каждый раз порциями по45 2700 мл ацетона. Фильтрованный продукт превращают в гидрохлорид повторным растворением в 2700 мл ацето. на с последующим постепенным добав - лением при перемешивании в течение 10 мин 14 мл концентрированной 12 н. хлористоводородной кислоты. Домешивают затем еще 2 ч при комнатной температуре. Фильтрованный продукт затем сразу же промывают (в случае шлама - с перемешиванием) трижды подряд 10 л деионизованной воды в течение 2 ч каждый раз и наконец фильтруют. Оставшуюся на фильтре соль 4 раза растворяют повторно в 2700 мл ацетона (каждый раз в течение 1,ч) в целях удаления воды, фильтруют, сушат на воздухе 30 мин и затем в вакуумной печи при 55 С,оВысушенный целевой продукт пропускают через сито без дробления, причем 95 продукта проходит через отверстия в 100 меш; затем разливают по бутылям. Анализ: 7,79 азота и 2,62 хлора - ионистый хлорид. Получают 186 г продукта в виде соли, проходящей через отверстия 100 меш. Ее растворяют в 0,04-молярном рассоле (5 г на 120 мл); рН дисперсии составляет 3,85.П р и м е р 3. Повторяют пример 1, изменяя состав продукта добавлением разных количеств аминов примера 1. Работают по той же методике, что и в примере 1, но ни в одном случае к аминам не добавляют воды для облегчения хода процесса. Все ,продукты обрабатывают в виде свободных аминов, как в примере 1. Первый 1-часовой период дефлегмации ЭАМК в ксилоловом шламе осуществляют с полным обратным холодильником аналогично примеру 1 (без удаления воды) или же согласно таблице (с азеотропной дефлегмацией всей воды).Результаты синтеза по примерай 1-3 приведены в табл.1. 127,02 85 166 8,24 127,02 86 210 7,89 127,02 85 208 7,60 127,02 85 211 7,814 1082338 Продолжение табл, 11 Блокйрующийагент МОПА ДМАПА МИБПА Наличиеводы вовремяагрегации Молярность," Во время прогона 8 МИБПА добавляют в виде двух последовательных порций, каждую в течение 1-часового периода дефлегмации, в виде двухступенчатого сшивающего варианта перед удалением воды от реакции конденсации из ДМАПА и МИБПА,Таблица 2 ДМАПА МОПА Общийвыходпродуктаг Нормальность,% Прогон вода мол.В вода мол.Ъ вода 1,5 85 200 7,79 10 1,5 75 226 8,34 3,0 75 10 4,5 242 8,25 1,5 10 75 4,5 240 7,63 П р и м е р 4. Если первоначальный 1-часовой период дефлегмации ЭАМК в этилене проводить в условиях азеотропной дистилляции, т.е, удаляя всю воду от этих реактивов перед последующими аминовыми реакциями, 40 то последние протекают с замедлением. В результате общее время завершения реакций процесса увеличивается. Путем добавления небольших количеств воды с различными аминами эту проблему 45 можно решить. С применением способа по примеру 1 проводят несколькопрогонов, но в прогонах 7,8,10 и 11удаляют воду от дефлегмации ЭАМК вксилоле в течение первого часа, какв примере 3, (табл.1), В этих прогонах воду добавляют дополнительнос 3-аминами. Все прогоны обрабатывают как свободный амин примера 1. Результаты синтеза по примеру 4 даныв табл.2.1082338 16 15 Продолжение табл. 2 МИБП МОПА Нормаль -ность, В Общийвыходпродуктаг Прогон мол. Ъ мол.% вода вода вода 3,0 75 0 225 8,45 10 8,56 210 1,5 75 10 50 1,5 267 9,59 20 10 1,5 75 10/ 7,49 268 7,69 2.61 1,5 55 20 МИБПА добавлен перед. ДМАПА, во всех других случаях - наоборот; ГИДА - гексаметилендиамин,используемый в качестве сшивающегоагента вместо МИБПА. Таблица 3 Добавкаконц.НС 6,Количество С 8 в виде ионногохлорида, Ъ С(, Ъ Прогон Ъ оттеории Выход,грН шлама 8,0 0,5 206 6,95 8,24 1,77 1,70 1,0 207 15,0 5,55 8,10 3,00 2,76 30,0 2,0 214 4,40 8,22 3,32 60,0 4,0 4,10 8,21 219 3,40 3,37 П р и м е р 5. Оборудование примера 1. Загружают 193,05 г (1,5 моль) ЭАМК и 2700 мл ксилола, нагревая все с обратным холодильником (137 С)о с перемешиванием при 200 об/мин, после чего дефлегмацию выдерживают 1 ч. За это время непрерывно всю воду удаляют из смеси азеотропной дистилляцией. В ловушке Дина-Старка собирают общее количество воды (1,6 мл) .З 5 Через час шлам охлаждают до 125"С, добавляя 7,66 г (0,075 моль) ДМАПА и выдерживая эту смесь 1 ч при 125 бС, после чего добавляют смесь 21,70 г (0,15 моль) МИБПА и 1,5 мл 40 воды. Смесь выдерживают еще 1 ч при 125 С, затем нагревают с обратным холодильником (136 С) и выдерживают при этой температуре, непрерывно удаляя воду ловушкой Дина-Старка, 45 в течение 15 ч, собирая в общей сложности 6,3 мл воды при конечной температуре 138 дС. Шлам охлаждают до 125 С, затем добавляют 113,65 г (1,25 моль) МОПА, выдерживая полученный шлам еще 1 ч при 120 С. Температуру затем повышают до 136 С, проо должая удалять воду азеотропной дефлегмацией в течение 6 ч с получением ее 21,5 мл. Продукт переводят в гидрохлоридную соль по способу примера 2. Осуществляют 4 прогона с применением разных количеств концентрированной 12 н. хлористоводородной кислоты для определения действия избыточного и недостаточного количеств хлористоводородной кислоты на свойства продукта.Результаты синтеза по примеру 5 даны в табл.3.