Способ определения компонентов кининовой системы гладкомышечного препарата при биотестировании

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ Союз Советск икСоциапистичесиикРеспубпии(51)М. Кл. З 01 М 1/28А 61 В 10/00 Ьоударстекнный комитет СССР по делам нзооретвннй н открытнй)СЗСОЮЗМА УиОмский государственный ордена ТрудовогоКрМйббд".фрЗнамени медицинский институт им, М. И,. КаИМЖМПЭСКв(54) СПОСОБ ОПРЕПЕЛЕНИЯ КОМПОНЕНТОВ КИНИНОВОЙ СИСТЕМЫ ГЛАДКОМЫШЕЧНОГО ПРЕПАРАТА ПРИ БИОТЕСТИРОВАНИИ1Изобретение относится к медицине и может быть использовано дпя диагностики патопогических состояний у больных.Известен способ опредепения компонентов кининовой системы гпадкомышечно 5 го препарата при биотестировании путем введения синэстропа крысам, подготовки тест-органе из рога матки и погружении его в термостатированную суперфузионную ванночку 11.о Однако в известном способе определение компонентов кининовой системы биологических проб на подготовленных такимобразом тест органах часто становитсяневозможным из-аа спонтанных сокрашений гпадкомышечных препаратов рога крысиной матки в весенний и летний периоды.Бель изобретения - возможность проведения биостирования во все времена 2 огода за счет снятия спонтанных сокрашений,Поставпенная цепь достигается тем,что согласно способу определения компо 2нентов кининовой системы гпадкомышечного препарата при биотестировании путем введения синэстрола крысам, подготовки тест-органа из рога матки и погружении его в термостатированную суперфузионную ваночку,на погруженный в суперфузионную ванночку тест-орган действуют адренапином или норадренапином в концентрациях соответственно 0,01-0, 1 мкг/мп или 1,0-100,0 мкг/мп, после чего определяют компоненты кининовой системы.Способ осушествпяют спедуюшим образом.За 24 ч опыта самкам, массой 100- 120 г, вводят внутримышечно 0,1 мп 2%-ного раствора синэстропа дпя индуцирования фазы эструса. Подопытных животных забивают и осторожно отпрепаровывают рог матки с последующим промыванием в растворе Жепона обычным способом. Один конец изопированного тест-органа закрепляют ко дну общепринятой суперфузионной ванночки объемом 10 мп лигатурой. другой конец закрепляют к953497 10 35 40 43 рычажку Энгепьмана дпя записи миограмм, Установив тест-орган, сменяютраствор Желона в ванночке, устанавпивают базовую пинию миограмм и выявпяюто Ъ,:напичие спонтанных сокращений гпадкомышечного препарата записью миограммна ленту кимографа. Убедившись в стойкости спонтанных сокрашений, в суперфузионную ванночку с самостоятельно сокращающимся тест-органом вносят поспедовательно возрастающие концентрациикатехопаминов. Так, например, тест-орган1 стойко сокращается спонтанно(самостоятельно) бопее 30 мин с максимальной амплитудой 38 мм при пикейномусилении 1:3, исключая возможность определения брадикинина обычным биопогическим тестированием, Через 30 мин кспонтанно сокращающемуся тест-органувносят адренапин в конечной концентрации 110 пг/мл, Внесение такого копи 2чества адренапина вызывает только лишьуменьшение амппитуды спонтанного сокрашения (эффект +"), Отмывшись от ад.ренапина в ванночку с тест-органом вносят 110 пг/мп адренапина, что вызы 5вает попное снятие спонтанных сокращений. Однако после второй отмывки тесторгана раствором Жепона снова возобновсляются слабые спонтанные сокрашения самплитудой до 9 мм (эффект этой концентрации ".ф),После третьей отмывки в суперфузионную среду вносят 1 "10 пг/мл адреналина. Эта концентрация вызывает стойкое снятие спонтанных сокрашений, не возобновляющееся даже после троекратнойотмывки тест-органа от воздействовавшегося адренапина (эффект этой концентрации ).Сняв спонтанные сокрашения адренапином, устанавливают как обычно чувстви-тельность тест-органа к брадикинину внесениемв суперфузионную среду нанограммовых количеств брадикинина-стандарта, Так, например, внесение брадикинина-стандарта в конечной концентрации0,1 нг/мп не вызывает сокрашения тесторгана, а концентрация 0,2 нг/мп показывает амплитуду сокращения 5 мм, Напоследующие кратно возрастающие концентрации брадикинина-стандарта тест-орган отвечает возрастанием амплитуды сокрашения соответственно копичеству внесенного брадикинина. Таким образом, порог чувствительности данного тест-органа к брадикинину составпяет 0,2 нг/мп,ВНИИПИ Заказ 6266Филиал ППП ПатентУстановив чувствительность г падкомышечного препарата к брадикинину, в суперфузионную среду вносят опытный образец ппазмы после предварительной отмыв 1 ки тест-органа от брадикинина-стандарта.Так, например, бестромбоцитарная цитратная плазма (соотношение цитрат/кровь1:9), .внесенная в объеме 0,1 и 0,2 мпне индуцировапа сокрашения тест-органа,Последующее введение к отмытому тесторгану 0,4 мп плазмы показывает амплитуду сокращения 6 мм,Следовательно, содержание брадикинина в плазме интактной крысы составляет 15 0,6 нг/мг цитратной плазмы,Ипопьзование предлагаемого способа опредепения компонентов кининовой системы гпадкомьпдечного препарата при биотестировании возможно в любое время года за счет снятия спонтанных сокращений и тем самым имеется воэможность шире использовать его в кпинико-лабораторной практике вне зависимости от сезонных особенностей тест-органов во все време-, на года, что в значительной мере повышает качество диагностики состояния кининовой системы у больных. Формула изобретения Способ опредепения компонентов иянин вовой системы гпадкомышечного препарата при биотестировании путем введения синэстропа крысам, подготовки тест-органа из рога матки и погружения его в термостатированную суперфузионную ванночку, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью возможности проведения биостирования во все времена года за счет снятия спонтанных сокращений, на погруженный в суперфузионную ванночку тест- орган действуют адреиапином ипи норадреиапином в концентрациях соответственно 001-1,0 мкг/мп ипи 190-100,0 мкг/мпу йосле чего определяют компоненты кининовой системы. Источники информации,принятые во,внимаиие при экспертизе