Способ получения ингибитора фосфолипазы с

Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 908798(28) Приоритет аф делам нэвбретеннй н открытей.94 (088.8) Дата опубликования описание 28.02,82) Заявит Всесоюзный н о - исслсдовательскии технологическии и ферментов медицинского назначен отико ОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ФОСФОЛИПАЗЫ ретение относится к медицине, а имени обам получения ингибиторов ферментов,стен способ получения ннгибитора фос ы С из нативного раствора продуцента епигментацни на анноните ФАФ с после прогреванием при 50 - 55 С, отделени.ИзобпосИзв и затем прогреваю псрнатангатив 0,00 М,7 или соч грации О, брану УАМ продуцент аагасе соа ово т фолипаз путем д дующим ем обра натанта фосфатноанием дн.001 М фосфат- 100 М.использу. зов авшегося а и очисткои супер. чвг., сега ко известный способ технологич ие поддается масштабированию изобретения - упрощение снос еск следующим образом,пигментируют, сорби.ите ФАФ в хлориднойнабухания 3,8, Затемвный раствор подшел,1, обрабатывают прии солью карбоксиметилрасчета 60 - 70 мг надобавляют при пс. слож Поставленная остигается тем, чт ингибитор ора продуце ФАФ с 55 сС, отде.очисткой сн 5 последующим прогреванием при 50 -пением образовавшегося осадка исупернатанта и лифилизацией целедепигмснтированный раствор переднием подшелачивают до рН 9,2 - 9тельно обрабатывают растворами нли карбоксимстнлцеллюлозы в ко0,06- 0,07% и алюмокалисвых кв ог та,мо.калиевых кварцо 7, последова.атриевой со. рсвают 5 минант отделяю прицентр от низко ротив 0,00 52 57ля ле М цен или сочета осуществлении способа получения фосфолипазы С из нативного раст та путем депигментацни на аниони установления рН 4,5 - 4,9в течение 4,5 - 5 мин.При этом очистку сус помощью диализа прого буфера при рН 5,2 - 5ализа, ультра- и днафильным буфером чере мемПри этом в качествеют штамм атгертогпусеаСпособ осуществляютНативный раствор деруя пигменты на анионформе с коэффииентомдепигмснтированный патичивают до рН - 9,2 - 9псремсшиванни натриевоцеллюлозы а КМЦ (из100 мл раствора), затемремещнвании раствор алюдо рН - 4,5 - 4,9 и прог50 С, после чего супернафугированисм и очищаютных примесей диализом пфатного буфера при рН -Составитель Ю, АлмазовТехред О.Легеза Корректор Г. Огар Редактор Е, Дианская Заказ 749/27 Тираж 505 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб л 4/5Подписное Филиал НПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 3 90879нисм диалиэа и ультра-и диафильтраций черезацстилцслпюлоэную мембрану УАМ - 100 Мс диаметром пор 100 - 120 Х прн давлении2,5 а 1 м, десятикратном концентрированиипри использовании фосфатного буфера(0,00 М рН 5,4) и диализованный супернатант илн концентрат лиофильно высушиваютизвестными способами,Полученные препараты ингибитора не ток.сичны. Внутрибрюшинное введение препаратав дозах 50 - 100 мг/мышь (6,5 - 11 мг/мышьпо белку) гибели белых мышей весом 18 -20 г не вызывало.П р и м е р 1. 500 мл нативного растворапропускают через колонку, загруженную 15,0 ганионита ФАФ в хлоридной форме с коэффициентом набухания 3,8. Депигментированныйнативный раствор подщелачивают до рН - 9,5,добавляют 6 мл 5% ного раствора Ма КМЦ(общая концентрация йа КМЦ в обрабатывае.мом нативном растворе 0,06%). Через 5 минперемешивания добавляют 6% ный расвтор алюмо. калиевых квасцов до рН . -4,8. Вновьперемешивают 5 мин, а затем помещают на5 мин в водяную баню при 50 С, Суспернатант отделяют центрифугированием, з затемдиализуют в течение 1 сут против 0,001 Мфосфатиого буфера (РН - 5,4) . Диализованныйсупернатант лиофилъно высушивают. Иэ 500 млнативного раствора получают 200 мг очищенно 30го препарата ингибитора фосфолипазы С, несодержащего балластных белков и характеризующегося 40 - 50%.ной ингибицией при концентрации 20 мг препарата/мл,П р и м е р 2. 500 мл нативного раствораобрабатывают так же, как в, примере 1, затемчастично диализованный в течение 15 ч супернатант концентрируют и обессоливают ультраи диафильтрацией ацетилцеллюлозную мембрануУАММ с радиусом пор 100 - 120 Х. Из500 мл нативного раствора при проведенииодной диафильтрации с десятикратным разбав. 8 4лснием получают 50 мг прспарага, харакгери. эуюшегося 60-40.ной ингибицисй при концентрации О мг препарата/мл и 30 .40 -ной ингибицией при концентрации 5 мг препарата,мнПредлагаемый способ позволяет получить новый нетоксичный и стабильный ингибитор фосфолипаэы С при сокращении числа технологических стадий и дешевизне испольэуемого сырья. Формула изобретения 1, Способ получения ингибитора фосфолипазы С иэ нативного раствора продуцента пу. тем депнгментации на анионитс ФАФ с последующим прогреванием при 50 - 55 С, отделением образовавшегося осадка и очисткой супернатанта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, делит. ментироваиный раствор перед прогреванием подщелачивают до РН 9,2 - 9,7, последовательно обрабатывают растворами натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы в концентрации 0,06- 0,07% и алюмокалиевых квасцоа до установления рН 4,5 - 4,9 и затем прогревают в течение 4,5 - 5 мин.2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что очистку супернатанта проводят с помощью диализа против 0,001 М фосфатного буфера при рН 5,2 - 5,7 или сочетанием диа. лиза, ультра. и диафильтрации 0,001 М фосфат. ным буфером через мембрану УАМ - 00 М.3, Способ по п, 1, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что в качестве продуцента использу. ют штамм 81 гертовусев вагасетсцв чаг. се - гав ов. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР К 734260,кл, С 12 О 13/00, 978,