Способ получения термолабильного энтеротоксина кишечной палочки

, А 61 К 39 1 ЫЙ НОМИТЕТ СССРБРЕТЕНИЙ И 07 НРЫТИИ ГОСУД АРСТВЕННПО ДЕЛАМ ИЗ ОБРЕТЕН ПИСАНИ, Оогйап 8,. Ь.,1 его 1 ох хп Ггошазвс 3.а 1 ей 3 СЬп шап". Ч. ЬаЬогей 1 с 1 пе, 1971,8(71) Ленинградский ордена Трудовог Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (53) 576.8,097.29(088.8)(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕРМОЛАБИЛЬНОГО ЭНТЕРОТОКСИНА КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ путем, выравнивания микробной культуры йа питательной среде, с последующим смывом микробных клеток, их разрушением, центрифугированием полученного лизата и.отделением целевого продукта, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, смыв проводят дистиллированной водой до концентрации 90-100.млрд. бактерий в 1 мл, полученную суспензию микроорганизмов инкубируют в течение 1,5-2 ч при 36-37 С, а центрифугирование лизата ведут при 24-25 С и 8-9 тыс, об/мин.ФВЗаказ 6408/2 Тираж 713 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, ж, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент 1, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно получению препаратов энтеротоксина дляидентификации энтеротоксигенныхкишечных палочек - возбудителейхолероподобных заболеваний у людей.Известен способ получения термолабильного энтеротоксина кишечнойпалочки путем выращивания микробнойкультуры на питательной среде споследующим смывом микробных клеток,их разрушением, центрифугированиемполученного лизата и отделениемцелевого продукта (1 .Однако известный способ трудоемок, так как требует использования 15дорогостоящего и мало доступногооборудования и длителен по времени(для получения препарата требуетсяне менее 4-5 дней).Целью изобретения является упрощение и ускорение способа,Эта цель достигается тем, чтоспособ получения термолабильногоэнтеротоксина кишечной палочки осуществляют путем выращивания микробной культуры на питательной среде споследующим смывом микробных клеток,их разрушением, центрифугированиемполученного лиэата и отделением целевого продукта, смыв проводят дистиллированной водой до концентрации90-100 млрд. бактерий в 1 мл, полученную суспензию микроорганизмов инкубируют в течение 1,5-2 ч при 3637 оС, а ценорифугирование лизата ведут при 24-25 ОС и 8-9 тыс.об/мин,П р и м е р. Штаммом кишечной па-.лочки, выращенным в течение 5-6 чпри 36-37 С в пробирке с 3-4 мл бульона Хоттингера (1:2, рН 7,2-7,4),засевают мясо-пептонный агар (рН 7,2" 407,4) в чашках Петри (100 мм в днам.) .По поверхности влажного (неподсушенного) агара шпаделем распределяют1-2 капли бульонной культуры, Через18-20 ч роста при 36-37 С на газонкультуры каждой чашки наносят 3-3,5 млдистиллированной воды и смывают культуру при помощи шпаделя. Взвесь культуры на дистиллированной воде отсасывают с чашки пастеровской пипеткой в центрифужную пробирку, Концентрация такой взвеси составляет 90- 100 млрд. в 1 мл, Поэтому вэвесью можно пользоваться, не определяя всякий раз ее концентрации. Взвесь бактерий на дистиллированной воде ставят на 1,5-2 ч в термостат (36- 37 ОС), после чего дважды центрифугируют на центрифуге без охлаждения (при 24-25 С) при 8-9 тыс.об/мин. в течение 30-45 мин получая препарат в виде недосадочной, слегка опалесцирующей жидкости - лиэата. Полученный препарат испытывают на соответствующих экспериментальных моделях на наличие термолабильного энтеротоксина,Полученный препарат по своей биологической активности и специфичности не уступает ультразвуковомулизату, изготовленному по известномуспособу.Предлагаемый способ ускоряет по"лучение препарата по крайней мерев 2 раза (вместо 4-5 дней в течениене полных 2 дня). Он существенносокращает рабочее время, занятоесоответствующими операциями, Числопроцедур минимально, они лишенытрудоемкости. Взамен ультразвуковойдезинтеграции (или других, также довольно грубых способов разрушения бактериальной клетки) по предлагаемому способу использовано непродолжительное щадящее действие дистиллированной воды. Упрощена и ускорена процедура центрифугирования. Предлагаемый способ не нуждается в дорогостоящем и мало доступном оборудовании - в скоростной центрифуге с холодильной установкой, ультразвуковом дезинтеграторе или других заменяющих его аппаратах. Нет необходимости и в аппаратуре для встряхивания, используемой в ряде случаев для получения микробной массы. Отпадает также необходимость в наличии Фильтровальных установок, миллипоровых фильтров, в аппарате для лиофильной сушки.