Способ получения -триптофана

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51)М. Кл. С 07 0 209/20//С 11 й 11/04 Государстесниый коиитет Опубликовано 23,11.81. Бюллетень М 43 оо делан изобретений и открытийВата опубликования описания 23,11.81 В.Г. Озереденко, Г.А. Великжанина, В.В. Сан,Н.Г. Федичкина, 3. В. Коленова, Т,И, Стручал 1 наи Н.И, Жданова)Институт органической химии АН Киргизской С Р(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ -ТРИПТОФАНА Изобретение относится к улучшенному способу пол уцени я -триптофана, при -меняемого в биоорганицеской химии.Известен способ получения (.-триптофана из индола, пирувата калия и хлористого аммония с использованием иммобилизованной триптофаназы с добавлением в реакционную смесь пиридоксаль-фосфата, Выход триптофана составляет 703. Триптофаназу выделяют из штамма Е. со 11 В/1 йА. Иммобилизацию осуществляют на ВгСМ-сефарозе при 70 С в течение 1 О мин 11 .Недостатком известного способа является предварительная очистка фермента, так как это сложная и трудоемкая процедура использование носителя, активированного ВгС, который является дорогостоящим реактивом, и, наконец, при использовании иммобилизованной триптофаназы в реакционную смесь необходимо постоянно добавлять пиридоксаль-фосфат, который является коферментом для этого энзима.Цель изобретения - упрощение технологицеского процесса.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу получения -триптофана взаимодействием индола, пирувата калия и хлористого аммония, вкачестве катализатора берут нативные клетки Вас, 5 цЬс 1 11 з 339 1 иммо"билизованные в полиакриламидном геле.Это позволяет получить триптофан засчет использования биокатализатора стриптофансинтетазной активностьюбез предварительного выделения фермента, цто значительно упрощает технологическую цепочку при проведении синтеза, исключает из реакционной смесикофермент .П р и м е р 1, 2 мл нативных клеток Вас 111 цз 5 цЬс 111 з с содержаниембелка 100 мг/мл в 0,1 м калий-фосфатномбуферном растворе рН 7,5,смешивают с 1 млраствора акриламида и бисакриламидаФормула изобретения гСоставитель Т. МамонтоваРедактор Т. Кугрышева Техред М. Рейвес Корректор М. Коста Заказ 10111/30 Тираж 446 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 з883029 ,(475 мг и 25 мг соответственно) и прибавляют на холоду 0,3 мл 51-ного раствора (МНц) 5 О, 0,3 мл Й, М,й,й-тетра-. метилэтилендиамина. Полимеризацию ведут при 37 С в течение 3 мин. Затем . гель протирают через сито 0,5. мм и промывают калий-фосфатным буферным раствором. Полученный биокатализатор прибавляют в реакционную среду, содер жащую индол 510 М, пируват калия 10 10М, хлористый аммоний 1 ОМ. В калий-фосфатном 0,1 М буферном растворе рН 7,5, Общий объем реакционной смеси составляет 30 мл. При этом начальная скорость реакции ч 0,174 М мин , 15 Прй. проведении процесса в течение 30- 40 мин выход составляет 77,433 а при установлении равновесия в системе 96,9 индола превращается в 1-триптован, 20П ри ме р 2. В 2 хлитровых колонках с иммобилизованными клетками Вас. 5 цЬС 1 11 з (полученных по примеру 1) пропускают раствор, содержащий ,индол с концентрацией 10М, пируват 2 ,калия 1 ОМ и хлористый аммоний 10 М, Затем раствор проходит через колонку с анионитом ИА, на котором осуществляют сорбцию триптофана.После пропускания 50 мп раствора з 0 через биореактор колонку с анионитом выводят из системы и триптофанэлюируют 0,5 г 103-ного раствора аммиака, раствор упаривают до 50 мл,триптофан высаживают этиловым спиртом, Осадок промывают холодным спиртом. Получают 0,92 г -триптофана,Продукт идентифицируют методом тонкослойной хроматографии на пластинках51 ц 1 о 1 в системе изопропанол-этиловый эФир-уксусная кислота-аммиаквода (30:30:16:24).Оптическая активность продукта(р -31, С 1, НО, Т. пл. 281 С282 С,Способ получения -триптофанавзаимодействием индола, пирувата ка-лия и хлористого аммония в присутствии биокатализатора, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения технологического процесса в качестве биокатализатора берут нативные .клетки Вас 11 цз 5 цЬС 111 з, иммобилизованные в полиакриламидном геле,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. ГцКц 5 аЬнго, Ецг.,3,Арр 1.МсгоЬо 1 1975, 1(1), с, 23-39