Способ получения модифицированного макропористого кремнезема

нов, С. Брыкалов, В 72) Авторы ьцов,) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОДИФИЦИРОВАННОГО МАКРОПОРИСТОГО .КРЕМНЕЗЕМАзосоставляюще нием кием и азософормулы СИ -Я -С Изобретение относится к технологии обработки кремнезема, в частности к способу получения макропористого кремнезема, используемого в качестве носителя для афинной хроматографии гемина,Известен способ получения модифицированного макропористого кремнезема обработкой его основания аэотсодержащим органическим соединением - производны- . ми биурета 1.Недостатком известного способа является невозможность получения носителя для афинной хроматографии гемина ввиду низкой разделительной способности.131Цель изобретения - получение носителя для афинной хроматографии гемвна с повышенной разделительной способностью.Цель достигается тем, что в качестве азотсодержащего соединения используют глутаровый альдегид и ароматический диамин, процесс ведут в водной среде при рН 1,0-2,0 с послеюующим диаэотвроваНМкачестве ароматвческого двамина используют, например, м-фенинендиамин, И -фенинендвамвн, бензидвн. Полученный после первой стадии продукт, содержащий 0,8-0,7 мг-екв/г ароматвческих амине групп, диазотируют с помощью нвтрита натрия для последуюива о азосочетаниа с селектввным, лигаидом (Й, ю гиствдин)П р и м е р 1. В колбе емкостью 280 мл суспендирувт 6 г макропарвстого кремнезема с 50 мл хларофарма, затем вводят 0,0 г менвиендиамина, пооле чего смесь перемещввавг при комнатной температуре 30 мин. Жидкую фазу отделяют декантацией, твердую сушат прв 50 С в течение 1 ч, после чегоее при перемешиванвв обрабатывают смесью иэфракции по 5 мл элюируют из колонки30 мл фосфатного буфера рН 7,0, Всеоперации проводят при 4 О С, Выход очищенного ог гемопигментов гамма-глобулина составляет 60-80 мг. Гемогенностьполученного препарата подтверждена электрофорезом в полиакриламидном геле.Регенерация отработанного носителяосуществляется следующим образом: использованный носитель промывают раствором 0,01 н йаОН и для последующего использования промывают фосфатным буфером(рн 7,0),Носитель полученный в соответствиис предлагаемым способом, обладает высокой механической прочностью, отличается отсутствием набухания в органических растворителях, ие подвержен микробиологической атаке, устойчив к условиямстерилизации, отличается достаточной емкостью и многократностью его использования,формула изобретения Способ получения модифицированного макропористого кремнезема обработкой его основания аэотсодержащим органическим соединением, о т л и ч а ю-.щ и й с я тем, что, с целью получения носителя для афинной хроматографии гемица с повышенной разделител.,ной способностью, в качестве азотсодержащего органического соединения используют глутаровый альаегид и ароматическими диамин, процесс ведут в водной среде при рН 1,0-2,0 с последующим диазогированием и азосочетанием с азосоставляющей формулы ЩНЮ ф" СН-СН-СООНМ Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР Ь 6078361 кл. С 08 К 9/04 ф 1978з 8571 , Ь г глутарового альдегида, 3 мл НС 6 и ЗО мл дистиллированной воды и инкубируюг при 20-25 С в течение 20-30 мин с,оцелью поликонденсации. Жидкую фазу вновь отделяют декангацией, полученный продукт последовательно отмывают 200 мл ацетона и 300 мл дистиллированной воды. Йалее 1 г полученного продукта суспендируют в 30 мл НСЕ, охлаждают до 0 С, добавляют 0,3 г йаМО и диазоти О руют в течение 10-15 мин.Полученный продукт отмывают охлажденной водой, фосфатным буфером (рН 7,0), эатеЪ добавляют 200 мг Ь-гистидина, растворенного в том же буфере, и 15 ведут азосочетание в течение 1 ч, после чего носитель промывают фосфагным буфером (рН 7,0), В результате количество ковалентно связанного Ь-гистидина с макропористым кремнеземом составляет 30-58 мг на 1 г носителя.П р и м е р 2. Получение носителя осуществляют так же, как и в примере 1, только вместо м-фенилендиамина использу-. ют И -фенилендиамин.25П р и м е р 3. 0,2 г бензидина раст,воряют в 5 мл концентрированной НСВ, добавляют ЗО мл воды. Полученный раствор при пвремешивании приливают к суспензии, состоящей из 3 г макропористого кремнезема и 4 г 25%-ного глутарового альдегида, и проводят реакцию поликонденсации в течение 30 мин .при комнатной температуре. Жидкую фазу отделяют, а продукт последовательно отмывают 200 мл ацетона, 300 мл дистиллированной воды. Далее носитель получают так же, как в примере 1.П р и м е р 4. Использование модифицированного кремнезема в качестве носителя для афинной хроматографии при очи 40 стке плацентарного гамма-глобулина чело- чека от гемопигментов.В хроматографическую колонку 1,5 х хЗО см помещают 2 г носителя, полученного по периметру 1-3, и уравнивают фос 45 фатным буфером (рН 7,0), наносят 1 мл 10%-ного плацентарного гамма- глобулина, содержащего 6-12 мг гемопигментов.Заказ 7139/38 Тираж 530ВНИИПИ Государственна" о комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж-З 5, Ра ская наб., д, 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Составитель А. МолинРедактор Н, Лазаренко ТехредА, Ач Корректор М, Демчик