Штамм д-13 -тест-культура для микробиологического количественного определения -тирозина

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(1 Ц 742462 Союз Советских Социалистических Республик(61) Дополнительное к авт. свид-ву - (22) Заявлено 130778 (21) 2644745/28-13 с присоединением заявки Мд -(51)М. Кл.С 12 К 1/02 С 12 О 13/06 Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Б. П. Карабеков, М. Г. Оганесян, С. В. Кажоян и А. Г. Чахмахчян Чаренцаванский филиал Всесоюзного научно-исследовательскогоинститута генетики и селекции промышленных микроорганизмов(54) ШТАММ Вас 111 цв гйцг 1 пд 1 епв 1 в РравдТЕСТ-КУЛЬТУРА ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОЛИЧЕСТВЕННОГООПРЕДЕЛЕНИЯ Ь -ТИРОЗИНА Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается ноного штамма, используемого для микробиологического количественного определения ь-тирозина в органических смесях и веществах, а также в медицине при диагностике некоторых заболеваний, имеющих место в результате нарушений окислительного обмена фенилаланина и тирозина.Известны различные пигментообраэующие микроорганизмы, которые исполь эуются для количественного и качест-. венного определения ). -триптофана микробиологическим способом (1 .5 Предлагаемый штамм является производным от штамма Вас 111 цв гпцг 1 п .д 1 епв 1 в 9 58 и получен под действием мутагена И-метил-М-нитро-М-нитрозо гуанидина. Штамм Др 1 д отличается способностью к пигментообразованию, проявляемой только в присутствии аминокислоты тирозин, что делает его пригодньк для количественного 25 определения 4 -тирозина в различных органических смесях и веществах.Интенсивность пигментообразовавия про порциональна концентрации (. -тирозина в анализируемых пробах, Рост штамма 30 наблюдается уже в присутствии 1 5 -20 мкг/мл тироэина в среде. Предлагаемая культура характеризуется следующими свойствами.Штамм Вас 1 Кцв Сйцг 1 пд 1 епв 1 в Др 1 д-тест"культура для микробиологического количественного определения с-тирозина. Хранится в музее культур промышленныхмикроорганизмов филиала ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов.Морфологические признаки. Споро- образующая, кристаллообразующая, подвижная, граммположительная палочка. Размеры (1,2-1,4) (3-6) мк.Культуральные и физиологические признаки. Хорошо растет на мясо-пептонных средах, окрашивая их в красно- коричневый цвет, На твердых агаризованных средах (мясо-пептонный агар, агар на бульоне из рыбного гидролизата, .агар на переваре Хоттиигера) образует сероватые колонии, окруженные на первых стадиях роста (18-36 ч) розоватым ореолом; при дальнейшей инкубации среда полностью окрашивается в красно-коричневый цвет. В жидких органических средах и минимальных соленых растворах, содержа742462 колориметре ФЭКМ по стандартнойкривой, отражающей зависимость оптической плотности от концентрации тироэина в среде. щих тирозин, пигментообразование н чинается после 1.2 ч инкубации с аэрацией на качалке при 37 ОС, Интенсивность окраски возрастает с увеличением длительности инкубации.Минимальная солевая среда с глюкозой и .-тироэином. Наблюдается пиг.ментообраэование, интенсивность окраски пропорциональна концентрации тирозина в среде.Факультативный аэроб. Оптимальнаятемпература для роста 28-30 С, Оптимальная температура для пигментообразования 37 С. Оптимум рН 7,0-7,4.,Синтезирует водо-растворимый пигменткрасно-коричневого цвета при наличиив среде (, -тирозина. Непатогенен длячеловека и животных. Остальные физиологические признаки характерны длявида .Наибольшая чувствительность тесткультуры наблюцается в пределах 20- 2 О200 мкг/мл . -тироэина,Составы сред для размножения культуры.1. Органическая среда: мясо-пептонный бульон, бульон на переваре 25Хоттингера, бульон из рыбного гидролиэата и т. д.2. Минимальная солевая среда:КНРО 4 30 г, КНРО 1,0 г, йа БО 4. 01 г, МдВО 4 7 Н О 10М, СаСГМпСЕ, 10"фМИН СООСН., 3 10 М, глюкоза 4 10 М, Ь-глутаминовая кислота0,15, вода 1000 мл .П р и м е р. Использование предлагаемого штамма Дрщ в качестветест-культуры для микробиологическогоопределения 4-тирозина,Определение проводят в минимальнойсолевой среде, состав которой указанвиае, Анализируемые образцы предварительно отделяют центрифугированием от40взвешенных частиц и разводят в минимальной среде в определенное числораз в зависимости от ожидаемой концентрации Ь -тирозина.Параллельно готовят стандартныйряд пробирок с минимальной средой, вкоторые добавляют различные количества чистого тирозина - 10, 20, 30, 40,50, 60, 70, 100, 150, 200 мкг/млВсе пробирки с анализируемыми пробами и контрольными растворами инокулируют определенным количеством суспензии индикаторной культуры. Инкубируют на качалке в течение 20 - 22 ч.Количество тирозина определяют по интенсивности пигментообраэования коло 5,риметРйчески на фотоэлектрическомСоставительРедактор П. Горькова Техред Н Ков Индикаторную культуру предварительно инкубируют в питательном бульоне и перед началом определения дважды отмывают буфером от бульона.Наибольшая чувствительность тест- культуры наблюдается в пределах 20- 200 мкг/мл тирозина в среде. Формула изобретения Штамм Вас 1 Иця Ю)цг 1 пд 1 епя 1 я Д р 1 д - тест-культура для микробиологического количественного определения).-тироэина. Хранится в музее культурпромышленных микроорганизмов филиалаВНИИ генетики и селекции промышленныхмикроорганизмов,Морфологические признаки. Спорообразующая, кристаллообразующая, подвижная, граммположительная палочкаразмером (1,2-1,4) (3 - 6) мк.Культуральные и физиологическиепризнаки. Органическая среда. Мясопептонный бульон, бульон на перевареХоттингера, рыбном гидролиэате . Синтезирует красно-коричневый пигмент сокрашиванием среды. На твердых агариэованных мясо-пептонных средах образует сероватые колонии; при длительной инкубации среда полностью окрашивается в красно-коричневый цвет.Минимальная солевая среда с глюкозой и ).-тирозином. Наблюдается пигмеитообраэование; интенсивность окраскипропорциональна концентрации тирозинав среде.Факультативный аэроб. Оптимальнаятемпература роста 28-30 С; оптимальная температура пигментообразования37 фС. Оптимум рН 7,0 - 7,4. Сахаролитические, протеолитические свойстваи серологические признаки - типичныедля Вас 1 Иця Ыцг 1 пд 1 епя 1 я айаг.ЙепйхоС 1 щця,Непатогенен для человека и животных,Наибольшаячувствительность тесткультуры наблюдается в пределах 20200 мкг/мл Ь-тирозина.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Вюасх И. Б., МНея Р. 6 , 1960Мусоо 91 а, 52, 574М. Ларинаалена Корректор С. щомак Подписное Заказ 3407/27 Тираж 522 ЦНИИПИ Государственного комитета СССР пс делам изобретений и открытий 113035 Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5