Способ получения иммобилизованной пероксидазы

Союз Советски кСоциалисткческикРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИяК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ742434(23 ) П риоритет по делам изобретений и открытий(72) Авторы изобретения Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени институттекстильной и легкой промышленности им, С. М. Кироваи Ботанический институт им, В, Л, Комарова АН СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ПЕРОКСИДА ЗЫ Изобретение относится к области получения иммобилизованных ферментов, вчастности, пероксидаз.Пероксидазы, иммобилизованные наполимерных носителях, в настоящее время используются для предотвращения5роста микроорганизмов в реак 1 орах, дляхолодной стерилизации жидкостей (например, пиша и медицинские жидкости),для повышения стойкости пива к холоднотому помутнению,Наиболее близким к изобретению потехнической сущности и достигаемому результату является способ получении иммобилизованной пероксидазы путем обра 5ботки полимерного носителя на основемодифицированного полистирола воднымраствором пероксидазы хрена в присутстовии бикарбоната натрия при 0 4 С . Продолжительность обработки 20 ч 11,Недостатками этого способа являютсяиспользование пероксидазы из хрена (сложность и дороговизна получения фермента),длительность обработки носителя раствором пероксидазы, проведение процесса иммобилизации при низких температурах,а также использование синтетическогополимерного носителя, процесс получениякоторого длителен и многостадиен.Цель изобретения - упрощение процесса,Это достигается известным способомполучения иммобилизованной пероксидазыпутем обработки полимерного органичес"кого носителя, в качестве которого используют альгинатное волокно, культуральным фильтратом базидиального грибаСеггемвах 1 ва при 18-22 С в течениео10-30 мин,Предлагаемый способ отличается от известных использованием пероксидазы - продукта микробиологического синтезакультурального фильтрата ССггепо таетпа использованием в качестве носителя альгинатного волокна, проведением процесса обработки при 1 8-22 С в течение 1 О мин.742434 10 3Предлагаемый способ позволяет использовать более доступную и дешевую пероксидаэу, отсутствует необходимость осуществления сложного синтеза носителя, процесс проводят при комнатной температуре и в течение небольшого промежутка времени,Способ отличается простотой и хорошим качеством получаемого продукта (выход по, активности достигает 80- 100%) . Способ осуществляют следующим образом.фермент пероксидаэа получают выращиванием базидиального гриба Сеггеоа1 ъаМ 1 пав культуре поверхностным способом на питательной средесодержащей10 г глюкозы, 3 г пентона, 1 гКН РО 4 0,5 г МдВО 4 7 Н О и 1 лводопроводной воды,Продолжительность выращивания грибасоставляет 7-8 сут при температурео26 С. Данный штамм гриба синтезируетвнеклеточную пероксидазу. Активность 25фермента составляет 6,37 ед/мг белка,Активность фермента определяют по окислению бензидина,Навеску альгинатного волокна обраба"тывают в течение 10-30 мин культураль- З 0ным фильтратом, полученным в результате выращивания гриба Сеггеоо тооМта.По окончании сорбции продукт промываютдистиллированной водой.Анализ полученных данных показывает з 5наличие высокой антимикробной активностй препарата иммобилизованной пероксидазы, полученного по предлагаемому способу. Волокна обладают высокой степеньючувствительности в отношении грамотрицательных бактерий (ЕвсЪещЪ 1 о соей ). что определчет возможность использования его для санации жидких сред,4П р и м е р 1. 0,2 г альгинатного волокна обрабатывают в течение 10 минОпри 22 С 5 мл культурального фильтрата базидиального гриба Сюгег 1 авомпОс активносгью 0,357 ед/мл, Продукт отмывают дистиллированной водой, Получают препарат с активностью 0,139 ед/мг носителя (88% от исходной),П р и м е р 2, 0,2 г альгинатного волокна выдерживают в 5 мл культурального фильтрата базидиального гриба Сего гЕиаооюмо при температуре 20 С в течение 20 мин, Продукт отмывают ди стиллированной водой. Получают препарат с активностью 0,158 ед/мг носителя (100% от исходной).П р и м е р 3, 1 г альгинатного волокна выдерживают в 15 мл раствора культурального фильтрата баэидиального гриба Сег епо тамма, содержащего пероксидазу при 18 С в течение 30 мин. Продукт отмывают дистиллированной водой. Получают препарат с активностью0,095 ед/мг носителя (100% от исходной) . Формула изобретенияСпособ получения иммобилизованнойпероксидаэы путем обработки органического полимерного носителя раствором,содержащим фермент - пероксидазу, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюупрощения процесса, в качестве носителяиспользуют альгинатное волокно в качестве раствора, содержащего пероксидазу -культуральный фильтрат баэидиальногогриба Сеггепа чсъмчщ, а обработку им носителя осуществляют при 18-22 С в течение 10-30 мин.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент США М 3860486,кл. 195-68, опублик. 1975 (прототип), Составитель О. СкородумоваРедактор С. Суркова Техред М. Петко Корректор М. КостаЗаказ 3401/26 Тираж 495 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4