Способ получения ацетилированных водорастворимых экстрактов, обладающих иммуностимулирующим действием

Союз Советских Социапистическик Ржпубпии.0 5,7 уларствеииый но СССР лелам иаобрет и отнрнтий(088, 8) о 150180, Бюллетень ата опубликования описания 1801.8 Иностранцыь (Швейцария) и Даниель Миглиор-Самур (Франция)(72) Авторы изобретени Пьер Иностранная фирманс Насьональ де Валоризасьон де ля Реш (Франция) 71) Заявите(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦЕТИЛИРОВАННЫХ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ЭКСТРАКТОВ, ОБЛАДАЮЩИХ ИММУНОСТИМУЛИРУЮРИМ дейстВиемнг ом в прие ых палочек обеэжири- путем могут ветст- пособами Изобретение относится к химикофармацевтической пюомышпенности,к получению лекарственных препаратов, применяемых в медицине.Известен способ получения ацети-.лированных водорастворимых экстрахтов, обладающих иммуностимулирующимдействием, путем обработки обезжиренных остатков бактерий смесью пиридина и уксусного ангидрида с последующей экстракцией целевого продукта этанолом, водой, выделениеми очисткой физико-химическими м тодами ИОднако известный способ не позволяет получить экстракт с высокимииммуностимулирующими свойствами.Целью изобретения является усиление иммуностимулирующих свойстви сопротивления инфекциям вирусногопроисхождения,Эта цель достигается тем, что вкачестве исходного материала используют псевдодифтерийные палочки СогпЕЬас 1 еГ 1 цттт рагчцтттСпособ осуществляют следующимобразом,Клетки псевдодифтерийнпредварительно подвергаютванию, затем ацетилируют обработкисутствииПотомэкстрактыс последуВодораляют путенолом) реной посленерастворрованием,раствор,Затем обрабатывают полученныйостаток дистиллированной водой,отделяют нерастворимые в воде фракции центрифугированием и лиофилизируют верхний водный слой, которыйсодержит ацетилированные водорастворимые экстракты, растворимыеодновременно в смеси спирт - пиридин и в воде,В качестве смеси спирт - пиридиниспользуют смесь этанола и пиридина25 (примерно в соотнощении 10: Ц по обьму. Все этапы центрифугирования проводят при низкой температуре предпочтительно при 0-6 С.Водорастворимые экстрактыбыть очищены и выделены соотвующими Физико-химическими с;,.4 цд7105фу,а именно хромахогр, 4 иеферфадОЮебентах, таких как фМФЕ-Ъ 1 офб 5 АА ,или путем фильтроэани 1 н 4 првмер,через гель полиакрМламйда с использованием Водаб Р 10, 51 одеЕ Рб или31 оде 1 Р 4. 5Сырой (неочищенный) водорастворимый экстракт, полученный после Аильтрования, затем хроматографии, элюированный растворителями, такими какразбавленная уксусная кислота или 10смесь пиридин- уксусная кислота,образован совокупностью ацетилированных веществ, включающих ацетилированный дисахарид-тетрапептид, ацетилированный тетрасахарид-гептапеп.тид, также его димеры, тримеры итетрамеры, в известных случаях ассоциированные с неаминированными ацетилированными редуцируюшими сахарами. Впроцессе фильтрования и хроматогра.фии водорастворирые вещества выделяются в порядке возрастающих мблекулярных весов,Активность водорастворимых экстрактов связана с присутствием диаминопимелиновой кислоты,25Ацетилированные водорастворимыеэкстракты,полученные предлагаемым способом,обладают усиленным июуностимулирующим свойством и сопротивлениеминфекциям вирусного происхождения, ЗОТак у морской свинки водорастворимые экстракты вызывают увеличениепроцентного содержания антител придозах вьгае или равных 0,1 мг подкожно.Водорастворимые экстракты совместно с добавками, например антибиотиками, можно использовать как средства,уменьшающие -прилив крови. В этихкомпозициях процентное содержаниеацетилированных водорастворимых экс- щтрактов обычно выше 0,1,Композиции могут быть примененыперорально, ректально, парентеральноили в виде аэрозолей,Для взрослого человека дозы составляют 10-50 мг в день. 45П р и ме р 1, 20 г бактериальных обезжиренных остатков, полученных из клеток СоупеЬас 1 ег 1 цщрахчцп,перемешивают в течение 66 чпри 28 ОС в 500 смз смеси уксусный ангидридпиридин (2-3 по объему), затемдобавляют 5000 смэ этанола,потом ещеперемешивают 5 ч. Нерастворимуючасть отделяют центрифугированием(4000 об/мин). Верхний слой концентрируют досуха при пониженном давлении, Остаток извлекают 100 см З дистиллированной воды. Нерастворимую вводе часть отделяют центрифугированием (4000 об/мин) . Верхний слойлиофилизируют, Получают таким образом 3,280 г сырого ацетилированноговодорастворимого экстракта.ЦНИИПИ Заказ 8785/53 Филиал ППП .Патент, г, У П р и м е р 2. Ацетилированныйводорастворимый сырой экстракт,полученный в примере 1, очищаютпутем Фильтрования на колонне сВоде 1 Р 10, собирая фракции по 1,5 смМ 1-500, причем элюирование осуществляют с помощью 0,1 н.уксусной кислоты и затем оптически контролируютна спектрофотометре при 220 и 280 нм.Фракции Р 293-340 объединяют и диофилизируют. Получают таким образом0,195 г водорастворимого экстракта,который очищают хроматографией наБЕАР- В 1 оде 2 А уравновешенном 0,01 М раствором пиридина срН 7,7. Элюируя 0,01 М раствором пиридина, получают 0,110 г вещества,обогащенного диаминопимелиновойкислотой, затем, элюируя градиентомрастворителя от 0,01 до 0,2 М раствора пиридина с рН от 7,7 до 5,5,получают 0,080 г ацетилированного водорастворимого экстракта.Водорастворирьй экстракт представляет собой порошок желтоватого цвета,включает следующие аминокислоты: алании, глутаминовая кислота, диаминопимелиновая кислота, аспарагиноваякислота и глицин; аминосахара; Н-ацетилглюкозамин, И -ацетилмураминовая кислота; редуцирующие неаминированные сахара: манноза, глюкоза иследы галактозы. Молекулярный вес(считая на основание с 3 остаткамиаланина в молекуле) 3750+250,Процентное содержание аминокислот 22+3; аминосахаров 26+2.Предлагаемый способ позволяетполучить ацетилированные водорастворимке экстракты, которые обладаютусиленными иммуностимулирующимисвойствами и сопротивлением инфекциям вирусного происхождения и могут быть использованы в терапии человека или в ветеринарии. Способ получения.ацетилированныхводорастворимых экстрактов, обладающих иммуностимулирующим действием,путем обработки обезжиренных остатков бактерий смесью пиридина и уксусного ангидрида с последующей экстракцией целевого продукта этанолом,водой, выделением и очисткой Физикохимическими методами, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью усиления иммуностимулирующих свойстви сопротивления инФекциям вирусногопроисхождения, в качестве исходногоматериала используют псевдодифтерийные палочки СогзпбЬас 1 Ейоп ра) чцвИсточники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Патент СССР по заявке 91937749/28-13, кл, А 61 К 39/02, 1973,Тираж 673 Подписноежгород, ул, Проектная,4