Способ выявления энтеротоксигенных штаммов стафилококков

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 090277(21) 2450659/28-13 Союз Советских Социалистических Республик(5)М. Кд.2 с присоединением заявки Йо С 12 К 1/04 Государственный комитет СССР ио дедам изобретений и открытий(088. 8) Опубликовано 150779. Бюллетень МВ 2 б Дата опубликования. описания 150779 1цА. И. Коротяев и Е. А. КеропианА,г-, у /тф всКубанский государственный медицинский институт.имени Красной Армии(54) СПОСОБ ВЦЦЕЛЕНИЯ ЭНТЕРОТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ СТАФИЛОКОККОВ Изобретение относится к областимедицины, а именно лабораторнымспособам выявления энтеротоксигениости стафилококков.Известен способ выявления энтеротоксигенных штаммов стаФилококковпутем посева исследуемого материалана питательную среду с последующейинкубацней посевов (1Однако известный способ не обес-,печивает высокой точности,Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.Цель достигается тем, что попредлагаемому способу посев осуществляют на среду, содержащую РНК,и после инкубирования определяютактивность образовавшейся РНК-азыи по этому показателю выявляют энтеротокснгенные штаммы стафилококков.Способ осуществляют следующимобразом.На питательную среду, напримермясо-пептонный. агар, содержащийрибонуклеиновую кислоту(РИК),.Производят посев суточной агаровойкультуры исследуемого штамма.Используют препарат сухой дрожжевой полимерной РНК, который добавляют из расчета 0,2 г на 100 мл расплавленного и остуженного до 45-50 о 2-ного мясо-пептонного агара. Дабавление РНК к агару вызывает сдвиг реакции в кислую сторону, поэто- му после внесения ее в агар и перемешивания необходимо довести рй до 7,5-8,5 путем добавления 20-ного раствора едкого натра под контролем рН-метра, Среду стерилизуют текучим паром в течение 20"30 мин и разливают в чашки Петри по 8-10 мл. Чашки со средой подсушивают при 37 С 30-45 минНа подсушенную среду производят посев приготовленной обычным способом суточной агаровой .культуры, посев делают бттяшками диаметром 8-.10 мм. Инкубируют при,37 С в течение 18-24 ч. После этого заливают поверхность питательной среды 5-10 мл 0,5 н. раствора соляной кислоты. Вся поверхность среды, содержащая РНК, образует видимый на глаз преципитат, кроме прозрачной сФеры вокруг,макроколоний (бляшек) которая образуется за счет действия РНК-азы.Прозрачную зону вокруг макроколоний измеряют линейкой, начиная от края микроколднии до края зоны просветления, Ширина просветления зависит от активности РНК-аэы, По наличию и673656 ширине эоны просветления судят о способности исследуемого штамма вырабатывать энтеротоксин.Ширина зоны просветления более 4 мм в 100 случаев свидетельствует об энтеротоксигенности.испытуемого, штамма; 2"4 мм - в 75-80, а менее 2 мм - в 47-50 случаев. Отсутствие зоны деполимериэации (просветления) вокруг бляшек в 87,5 случаев свие энтеротоксиген 12 85 14 58 Таким образом 85,3 культур стафилококков, образующих РНК-азу, энтеротоксигенны,:а среди штаммов, не продуцирующих РНК-аэу, число таких культур составляет лишь 12,5. Предложенный способ позволяет определить способность штамма стафилококка вырабатывать энтеротоксин за 18-24 ч, т. е, экономить время исследования на 2-3 суток; кроме того, дает меньше неспецифических реакций, повышает точность выявления энтеротоксигенинформ экспер д. Бирг кробиол метода 428,нятые ации,тизеера Оогичем исс чник е пр од р по ми ески 3, с внимани1. П вочник сологич М., 197 М. Спра ким и вируедования ксиген посева ставитель С. Малютинах е А. Богдан Ко екто Н. Стец Ре Н. Коган 4017/25 Тираж 525 ЦНИИПИ Государственного комитетпо делам изобретений и откр 035 Москва ЖРа шская наб а ПоСССий сно лиал ППП Патент, г. ужгород, ул, Проектная, 4 ных штаммов. Формула изобретения Способ выявления энтеро штаммов стафилококков путемдетельствует о неспособности исследуемого штамма продуцировать энтеротоксин:Для подтверждения существующей взаимосвязи между энтеротоксигенностью штамма стафилококка и активностьюРНК-азы исследовано 180 культур стафилококков, выделенных из молока и сыра. Полученные данные приведены в таблице,исследуемого материала на питательную среду с последующей инкубацией посев о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности иоускорения способа, посев осуществляют на среду, содержащую РНК, и после инкубирования определяют активностьобразовавшейся РНК-азы и по этому показателю выявляют знтеротоксигенные штаммы стафилококков.