Способ получения индикатора из анилинового синего красителя

ОП ИСАН И ЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕ НТУ рц 67 УЗБ Союз Советских Социалистических Республик(23) Приоритет - (32) 03.05.7 Государстееиимй комитетссСРпо делам изобретеиийи открытий 1) 68265 3)(45) Дата опубликования описания 30.06.79 2) Авторы изобретения Клифтон Олд Иностранцы ридж и Майкл Чарльз(США) Иностранная фирма Макдоннелл Дуглас Корпорейш(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДИКАТОР ИЗ АНИЛИНОВОГО СИНЕГО КРАСИТЕЛ.1Изобретение относится к области синтеза органических красителей анилинового ряда; в частности к способу получения восстановленной формы анилинового синего красителя - индикатора микроорганизмов 5 в питательной среде по реакции на выделяемую ими кислоту.Известен способ получения индикатора из анилинового синего красителя анилинфенилфеназинхлорида, введением в его ще лочной водный раствор 0,5 - 0,6 вес. % сильного восстановителя - атомарного водорода в присутствии катализатора или гидросульфита натрия при кипячении с по 4 следующим охлаждением раствора 1. 15Недостатком известного способа является жесткие условия восстановления, что приводит к получению индикатора, токсичного к микроорганизмам в питательной среде и исключающего корректное определе ние их наличия. Помимо этого известным, способом .получают индикатор, имеющий широкий интервал рН, в котором .происходит изменение окраски, в частности рН 6,5 - 5,0. Это обстоятельство не позволяет 25 определить микроорганизмы сразу после их появления в питательной- среде: в Восстановленный известным способом красйтель под действием факторов окружающей среды - температуры, света - окисляется до исходной окрашенной формы, что также увеличивает погрешность анализа,С целью получения индикатора, нетоксичного к микроорганизмам, устойчивого к окислению и имеющего узкий диапазон рН изменения окраски, предложено в щелочной 1%-ный водный раствор красителя вводить восстановитель тиогликолят натрия сначала в количестве 0,076, затем 0,024 и 0,02% от веса раствора до полного восстановления красителя.Цвет восстановленной формы анилинового синего красителя - рыжеватокоричневый или бесцветный при рН 7,0. При выделении кислоты микроорганизмами в питательной среде восстановленная форма анилинового синего меняет цвет на синий. Изменение это происходит достаточно быстро - в течение 12 - 18 ч, что позволяет быстро определить микроорганизмы. Питательная среда может быть в свою очередь объектом измерения концентрации синего цвета, например, с помощью фотометрического метода.- Найденный согласно изобретению вос. станавливающий агент тиогликолят натрия671735 Составитель А. МолйнРедактор Л. Герасимова Техред А. Камышникова Корректор Л,Корогод Заказ 1312/17 Изд.390 .Тираж 779 Подписное ЦНИИПИ НПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж.35, Раушская наб., д, 4/5пр. Сапунова, 2 Типография,не йодавляет роста микроорганизмов в питательной среде. Удачное сочетание его применения с подобраинымй, согласно предложенному способу, концентрацией реагентов и чередованием необходимы 1 х приемов позволило получить индикатор с узким значением рН интервала изменения окраски 6,4 - 6,6. Благодаря этому же сочетанию индикатор нечувствителен к описанию, а также не дает ошибки, связанной с присутствием протеина в питательной среде,Реакция восстановления анилинового синего красителя сводится к удалению одной или двух аминогрупп в исходной молекуле красителя. Основным условием способа является необходимость 100%-ного восстановления анилинового синего.Способ включает обработку при кипячении водного раствора красителя в присутствии щелочи тиоглнколятом натрия, причем тиогликолят добавляют в три этапа - сначала 0,076, затем 0,024 и 0,027 о от веса раствора. На каждом этапе добавляют уменьшенное по сравиейию с:предыдущим количеством восстановителя, Соответственно сокращают и время кипячения,Восстановленный анилиновый .синий как индикатор микроорганизмов пригоден .для определения Е. Со 11 в питательной среде, а также дрожжей штамма Сапйда и грибковых микроорганизмов,Пример. В химический стакан объемом 1000 мл с делениями помещают 5,0 г анилинового синего, 100 мл однонормальной гидроокиси натрия и 400 мл дистиллированной воды, Смесь перемешивают для растворения анилинового синего. Затем раствор слегка подогревают. Добавляют 7,5 г натрийтиогликолята к раствору, После этого:раствор нагревают до кипения и при этой температуре раствор нагревают в течение 45 мин. Затем добавляют еще 2,5 г натрий тиогликолята в раствор и кипятят.в течение .10 минПотом добавляют 2,0 гнатрий ттнЬглиКолята и кипятят в течение3 мин, Раствор охлаждают. Дистиллиро",5 ванной водой доводят объем до 500 мл.Последнюю операцию выполняют в мерномцилиндре,Применение избытка натрий тиогликолята не вредит способу. Осиовйым ."гр 66 ова 10 нием является .то, чтобы все 106% -аналинового синего восстановлены.Описанная выше обработка вызывает выделение аммиака из молекулы анилиново.го синего и эти 1 расителнреагцруют на неЫ значительное изменение рН. Восстановленный анилиновый синий индикатор начинает изменять цвет в присутотвии кислоты.При рН 7,0 восстановленный анилиновыйсиний либо бесцветен, либо окрашен в ры 20 жевато-коричневый цвет. В кислой средеанилиновый синий становится синим,Анилиновый синий полностью меняет свой цветпри значениях рН от 6,4 до 6,6,Ф.о;р мул а изобретенияСпособ получения индикатора из анилинового синего красителя, введением в егощелочной водный раствор восстановителяпри кипячении с последующим охлаждениЗ 0 ем раствора, о"т л и ч ающ ий с я тем, что,с целью получения индикатора, нетоксичного к микроорганизмам, устойчивого кокислениюи имеющего узкий диапазон рН.изменения окраски, в щелочной 1 %-ный35 водный раствор красителя вводят восстановитель тиогликолят натрия сначала в количестве 0,076, затем 0,024 и 0,02 оо от веса раствора до полного восстановлениякрасителя.40 ИстОчники информации,принятые во внимание при Экспертизе1. "Индикаторы.:Под.ред, Э. Вишопа,:М.,Мир, т. 2,:1977, с.71 - 79.