Способ получения 2-0-метил-д-рамнозы

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Сфюэ Сфаетспна Сфцнвпнетнчесннк Реефубпнн(51) М,ву полнительное к авт,) Заявлено 15,06,77 (21 Кл12 635 28-1 13 0 с присоединением заявки % Государствеиный комитетСовета Мииистров СССРпо делам изобретенийи открытий 3) Приоритет.(43) Опубликовано 0511,78,Бюллетень4 (45) Дата опубликования описаиия 2 Ы 1.78 нко и Е.Я.Рашба 2) Авторы изобретения,М.З 1) Заявител титут микроби акад. Д.К.За ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2-О-МЕТИЛ-Д-РАМНОЗЫ тфене микробно" а именно харида60 го живых нного ких .Тара амм выделеранится вкого Госудститута мерепаратов узе рст ици м,Л ду и 6 куль Конт биол севианити яв- льзогается тем, используют Изобретение относится клогической промышленности,к способу получения моноса2-0-метил-Д-рамнозы.Известные способы получения мсахаридов основаны на использовакультур, например, бсгер 1.ап 1 сев ап51,мер 1 ов 1 сее аВЪцэ, Васьков Того 1 орыв,Ьсе 1 оЬас 1 ег птЬохЫаць 1.Ц и 23 .Однако известные способы даюможность получения Д-рибозы иЬ-сорбозы - широко распространенныхв природе моносахаридов.Известен стособ получения 2-О-метил-Д-рамноэы путем культивированияее продуцента на питательной средев условиях аэрации, содержащей источники углерода, азота и необходимыеминеральные соли, В качестве продуцента 2-0-метил-Д-рамнозы используюткультуру микроорганизмов Мхоаасегитп 402 ЗД .Однако указанная культура хрся в коллекциях Великобританииляется труднодоступной для испования в нашей стране.Целью изобретения является упрощение процесса.Поставленная цель достичто в качестве продуцента огин и вирусологиилотного АН Украинской С льтуру Эасс 1 цв 1 аеса 1 в а амм 6.Укаэанный шт нз желчи и х м тур Московс а рольного нн д огических п и Морфология и культурально-биохимические свойства. Палочка короткая, иногда изогнутая подвижная грамотоицательная, размером 0,5-1-2 К. На бульоне растет в виде равномерной мути с образованием пленки, прнстеночного кольца и осадка. Аэроб. Оптимальная т, роста -30-37 о Хорошо растет на синтетических средах при использовании в качестве источника азота аминокислот, способна расти на аммонийных солях в качестве источника азота, если источником углерода при этом служит ацетат либо другие трехуглеродные соединения. Штамм хорошо разлагает дериваты белка типа пептона с образованием аммиака. Белки не расщепляет Не разлагает большинство сахаров, но потребляет нх окислнтельным путем.Сущность способа заключается в следующем:1529 500 мг полисахарида гидролизуют 1 Нсерной кислотой (0,5 раствор) 1,5 чпри 100 ф. Гидролиэат нейтрализуютПомех 1 х 16(НСОз), сгущают при 3540 и в объеме 3-5 мл наносят на колонку размером 3,7 х 50 см, набитую сухим порошком целлюлозы. Разделениепроводят в растворителе этанол-вода(95:5), Разделение контролируют окрашиванием отдельных фракций антроновым реактивом и хроматографией на10 бумаге,При указанных условиях достигается воспроизводимое отделение 2-0-ме тил-Д-рамнозы, а полученный препаратбыл хроматографически чистым при раз 5 делении в различных системах растворителей: п -бутанол-пиридин-вода (б:4::3), п -бутанол-уксусная кислота-вода(4:1:5), п -бутанол, насыщенный водойс 1 аммиака и др.при проявлении хроеО матограмм различными проявляющимиреагентами: анилинфталат, щелочнойраствор азотнокислого серебра, йодная кислота-бензидин и др. Препараттакже ие содержит возможной примесиб аминокислот и был серологическн активным при торможении гомологичнойреакции преципитации,Формула Изобретения Составитель М,ЛаринаРедактор И.Самедова Техред М,Борисова Корректор А,Кравченко Заказ 6287/26 Тираж 526 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Сонета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП Патент е г. Ужгород, ул, Проектная, 4 Э 63Цля получения 2-0-метил-Д-рамнозы культура Ва сс(Во в чае са ба а еса бфепез штамм б выращивается на мясо-пептонном агаре либо бульоне в течение 1-2 суток при 37 ф. Из отмытой физиологическим раствором бактериальной массы, высушенной ацетоном и эфиром, известным способом экстрагируют специфический полисахарид, Полученный полиеахарид гидролизуют 1 И серной кислотой (0,5 раствор полисахарида в кислоте) при 100 с, 1,5-2 ч. Гидролизат нейтрализуют ионна-обменной смолой либо сухим углекислым барием. Из полученной смеси сахаров 2-0-метил-Д-рамнозу выделяют разделением последней на колонке с порошком целлюлозы в системах растворителей этанол-вода (95:5) либо П - бутанол-вода (95;5), Кроме того, этот сахар можно получить иэ смеси методом препаративной хроматографии на бумаге с использованием растворителя и -бутанол-пиридин-вода (б:4:3) .Получаемый указанным способом препарат 2-0-метил-Д-рамноэы не содержит примеси .других сахаров при разделении в следующих системах растворителей: П -бутанол-пиридин-вода (6:4:3, П-бутанол-вода-(95;5), ацетон-вада (95:5), этанол-вода (95",5), а егб пик совпадает при совмещении хроматограмм с пиком этого сахара в гидролизате полисахарида при разделении последнего методом газожидкостной хроматографии в виде ацетиллированных альдононитрилов и полиолов исследуемых сахаров. Выход сахара составляет 5% от сухого веса препарата специфического полисахарида.П р и м е р, Культуру ЗассВие аесаБе айсабфепев штамм б выращивают намясо-пецтонном агаре при 370 в течение суток, смывают и промывают Физиологическим раствором, а затем ацетоном и эфиром, Специфический полисахарид получают гидролизом бактериальной массы горячим Формамидом по Фуллеру, Выход препарата - 5% от сухого веса бактериальной массы. 100 Способ получения 2-0-метил-Д-рамнозы путем культивирования ее продуцента на питательной среде в условиях аэрации, содержащей источники углерода, азота и необходимые минеральные соли, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью упрощения процесса,в качестве продуцента используюткультурупассЫв 1 аЕсайв а 1 сабепее 40 штаммИсточники информации, принятые вовнимание при экспертизе:1. Патент США Р 3919046,кл.195-30,2, Авторское свидетельство СССР АР 461116 кл, С 12 В 13/00, 1973.З.Саиас 1(ап ЗоогпаР 01 СИеиэЬ"у.1967, 45,1.987.