Способ дезагрегации почечной ткани

Союз Совоцнап истнчесиРеспублик ЗОБРЕТЕН СВИДЕТГЛЬСТВУ ОРСК 61) Дополнительное к авт. свнд-ву 1) М. Кл. С 12 К 9/.10.76 (21)2411511/28 2) Заявле с присоединением заявк Государственнын комитетСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий(45) Лата оп нкования описания 030878(72) Авторы изобретения лышева, Н, Д. Хомякова и В. рохо титут 4) СПОСОБ ДЕЗАГ ИИ ПОЧЕЧНОЙ ТКАН пергирующий раствор, В качестве диспергирующего раствораиспользуют смесь 0,05-нога раствора трипсина и 0,005-ного раствора коллас назы.Растворы ферментов готовят на какой- либо питательной среде (0,5-иый гидролизат лактальбумина, СИ ЙЬ - 1969) при рН 7,4. До введения циспергирующего раствора сосудистую систему почки промывают 0,5 л раствора, Дюльбек" ко без кальция и магния. Затем в почку нагнетают диспергирующий раствор.Через 10-12 мин прокачивания диспергирующего раствора почка размягчается и перфузию прекращают. Диспергирующий раствор удаляют, почку промывают 0,5-ным гидролиэатом лактальбумина с 20 сыворотки крупного рогатого скота, Затем в колбу с 150-200 мл питательной среды пинцетом слущивают корковое вещество перфузированной почки и колбу помещают на магнитную мешалку на 2-3 мин для получения гомогенного концентрата клеток,После фильтрации через марлю концентрат, минуя центрифугирование,разбавляют до нужной концентрации питательной средой с сывороткой рассевают в культуральные сосуды различной емкости. Изобретение относится к области вирусологии.Известен способ дезагрегации почечной ткани, заключающийся в том, что в почки через сосуды органа вводят смесь 0,5-ного раствора трипсина и 0,04-ного раствора версена. Выход жизнеспособных клеток 90-120 млн Ы.Однако известны спе чивает высокого вы бных клеток.Целью изобретения является повышение выхода жизнеспособных клеток.Эта цель достигается тем, что в качестве диспергирующего раствора используют смесь 0,05-0,25-ного раствора трипсина и 0,005 - 0,01-ного раствора коллагеиазы.Способ осуществляют следующим образом.у предварительно обескровленного 3-4-иедельного поросенка асептически, не повреждая капсулы, извлекают почки с участком брюшной аорты в месте ответвления почечных артерий.Делают продольный разрез брюшной аорты и в устье почечной артерии вставляют канюлю, через которую в со- З 0 судистую систему органа нагнетают дисй способ не обе хода жизнеспосо 3 аяВНтЕЛЬ Всесоюзный научно-исследовательский ящурный623869 Формула изобретения Составитель С. МалютинаТехред А. Алатьрев КорректорА, Власенко Редактор Т, Девятко Заказ 5112/19 Тираж 568 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, %-35, РаущскаЯ наб., д. 4/5Филиал ППП фПатентф, г. ужгород, ул. Проектная, 4 3Так как отсутствует иэмельчениеткани, центрифугированне клеток нразделение перфузированной ткани наизолированные клетки в гомогенизаторе,то процент выхода живых клеток сЬставляет 95-97, Вследствие одновременного быстрого воздействия двух ферментов в пониженных концентрациях на все 5межклеточные связи клетки сохраняютморфологическую целостность наружныхмембран, дают монослой на четвертыесутки и проявляют высокую чувствительность к вирусу ящура, 10Применение предлагаемого способапозволяет осуществлять процесс дезагрегации клеток в мягких режимах, увеличить выход, клеток но сравнению склассическим способом (выход жизнеспособных клеток 400-420 млн иэ 1 гпочечной ткани, что составляет 9095, при классическом способе выходсоставляет 24-56 млн нэ 1 г почечнойткани),Предлагаемый способ поэволит значительно упростить и сократить число операций, расходы рабочего времени, растворов, питательных сред, сывороток, оборудования, животных - доноров. Способ дезагрегации почечной ткани путем введения в почки .через сосуды органа днспергирующего раствора, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повьааения выхода жизнеспособных клеток, в качестве диспергирующего раствора используют смесь 0,05- 0,25-ного раствора трипснна и 0,005- 0,01-ного раствора коллагенаэы. Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе.1, Авторское свидетельство СССРВ 340698, кл, С 12 К 9/001972.