Способ получения липазы

724 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСопиалистически Республик ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(45) Дата опубликования описания 02.08.8. Кл.С 12 Государственнын комитет Совета Министров СССР К 663.. А. Казаков, Г, Б. Ксаидопуло, А, А, Казак,Ю. М, Хохлова, О. Л. Рудаков, Л. Н. Сергеев и Л. П. Мурзина нститут микробиологии АН СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПА бдо 9 и емом про- зрога а га 1 гадгапз ВегЫ 1 живают на скошенномпри пересевах через уру Оозро 2024 поддер аре при 4"С сяцев, засева посев ную культур В К 1 ИГ сусло 4 в 6Для 10-сут ют ал х колб испо Посевной ма Изобретение относится к технике получения липазы и может быть использовано впищевой и медицинской промышленности,а также в животноводстве.Известен способ получения липазы, предусматривающий культивирование ее продуцента на питательной среде, содержащейисточники углерода, азота, фосфора и минеральные соли, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости иего очисткой 11,Этот способ является наиболее близкимк предлагаемому по технической сущностии достигаемому результату.11 родуцент липазы - гриб пшсог 1111 о 1111 снз синтезирует липазу, активную в интервале рН б,О - 8,0, т. е. с охватом и щелочной области, Однако время культивирования этого продуцента, а также других известных продуцентов не менее 5 б ч. Это приводит к тому, что в культуральной жидкости, примерно с конца вторых суток, идетнакопление наряду с липазами и протеаз,которые снижают со временем липазнуюактивность. Для уменьшения влияния протеаз в культуральную жидкость вводят ста 25билизаторы. Все это ведет к усложнению иудорожанию ферментационных процессов.Целью изобретения является повышениеактивности фермента и увеличение диапазо- З 0 на его действия при рН от температуре от 25 до 45 С.Это достигается тем, что в предлага способе получения липазы в качестве дуцента используют гриб вида Оо гадгапз ВегЫ 1,1 ри этом из вида Оозрога гадгапз Вег 1 Й используют штамм ВКМЕ,Кроме того, в качестве источника углерода используют соевую муку и сахарозу.Гриб Оозрога гадгапз ВегЫ 1 ВКМГотносится к группе несовершенных грибов, сапрофнт, выделен из зараженных семян подсолнечника, Колонии на сусло-агаре простирающиеся, телесного цвета. Гифы ветвистые, собраны в тяжи, частично приподнимающиеся и придающие колонии ветвистый вид. Гифы, субстратные и воздушные, с возрастом полностью распадаются на сидии 7 - 12;(15 - 50 мкм, удлиненно-цилиндрической формы, с тупо закругленными концами.Способ осуществляют следующим обр621724 Формула изобретения Составитель А, Бражиикова Редактор М, Дмитриева Техред А, Камышникова Корректор 3. ТарасоваПодписное Заказ 1700(8 Изд.593 Тираж 554 НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова. 2 выращивают в колбах объемом 3 л. Среду для посевного материала готовят на водопроводной воде.Состав питательной среды, ,6:Соевая мука 2,5 5 Сахароза 0,25 К,НРО 4 0,2 (МН 4) з 304 0,5 Мдко, 0,1 СаСОз 0,5 10 Оливковое масло 0,05 - 0,5В трехлитровые колбы помещают по 500 мл указанной среды и вносят суспензию культуры гриба, приготовленную смывом со скошенного сусла-агара стерильной 15 водой. Колбы с посевом помещают па круговые качалки (220 об/мин) и инкубируют при 28 С в течение 48 ч. Затем содержимое колб переносят через посевной люк в 100- литровые ферментеры, содержащие 30 л 20 среды того же состава. Ферментацию проводят при 28+ 1 С, рН 6,5 - 7,0 с перемешиванием при 360 об/мин и подачей воздуха на барботаж 1 - 1,5 объема на объем среды в минуту, 25Наилучший выход липазы достигается при внесении инокулята в количестве 3 - 4% от объема среды.После культивирования гриба в ферментере в течение 24 - 48 ч, по достижении 30 активности культур альной жидкости 600 мкМ олеиновой кислоты на 1 мл за 1 ч проводят слив культуральной жидкости и ее обработку по известной схеме выслаиванием сернокислым аммонием с последую щим диализом в проточной воде по схеме с противотоком и дальнейшей лиофилизацией на сублимационной сушке.Липазная активность продуцируемого фермента не менее 600 мкМ олеиновой кис лоты на 1 мл за 1 ч после 24 - 48 ч культивирования в ферментере.Использование высокопродуктивного 24 - 48-часового продуцента липазы гриба Оозрога 1 гадгапз Вег 1 Ь на полусинтетической 45 среде, содержащей в качестве источника углерода соевую муку и сахарозу, позволяет повысить удельный выход ферментного препарата липазы с единицы объема питательной среды по сравнению с бактериаль ными продуцентами липаз, а также получнть более широкий диапазон ее действия: рН от 6 до 9 и температура от 25 до 45 С.Липаза с таким температурным диапазоном и интервалом по р 11 представляет большой интерес для медицины и животноводства. В медицине она может быть использована как лечебный препарат при нарушении функции подкелудочной железы, В животноводстве она может найти применение при откорме молодняка крупного рогатого скота на ранней стадии, когда у животных активность поджелудочной железы еще недостаточна. В обоих случаях нужна липаза широкого диапазона действия, так как рН среды в желудочно-кишечном тракте меняется от кислых рН до щелочных. Этим условиям работы соответствует предлагаемая липаза.Кроме того, препараты с липазой данного диапазона могут быть использованы в кожевенной промышленности для обработки кож совместно с протеазными препаратами, а также в других областях народного хозяйства, особенно там, где по технологическим регламентам требуется широкий диапазон рН и температур. 1. Способ получения липазы, предусматривающий культивирование ее продуцента на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и минеральшяе соли, с последующим выделением фермента из культуральной кидкости и его очисткой, отличающийся тем, что, с целью повышения активности фермента и увеличения диапазона его действия при рН от 6 до 9 и температуры от 25 до 45 С, в качестве продуцента используют гриб вида Оозрога 1 гартапз Вег 1 й,2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что из вида Оозрога 1 гадгапз ВегИ используют штамм ВКМР.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют соевую муку и сахарозу.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Патент Японии Мв 1938833, кл. 36 (2) С, опублик. 1975.