Способ получения антител против вируса клещевого энцефалита

ОАИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Своз СоветсиииСоциалистическихРеспублик(и) 607572 6) Дополнительное к ав 22) Заявлено 11,05.76 (2 свид-ву -356296/28(51) И. Кл. А 61 К 35/1 с присоед нием заявки судврствоннын ноиит оввтв Министров ССС оо долом нзооротвннйн открытий5) Дата опубликова 72) Авторы изобретен М. Минаева, М. С. Слуцкая, И. р и М. Г. Старцев Пермский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт вакцин и сывороток) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ.АНТИТЫ ПРОТИВ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЗНБЕФАЛИТА Изобретение оможет быть исплучении сыворот гается теп, что сыв с ипмуносорбенто ата окиси алюминия,кубируют, отделяют ппературе 2-8 С, а т дистиллированной 1.и температуре 2оротку кром на осно- получен- балластные тносится к ользовано икробиологии медицине при ратов против Зто дости ви смешивают ве геля гидр ную смесь ин белки при те тела алюирую рН 11,0-11,ньтх пре ируса клещевого Известен споэнцефалита, об получения сывороточвключаюший выделение очи нов из противодифтерийлбнячных сывороток с поции с использованием вдля приготовления иппунщрата окиси алюминия 1 затем антивойой при 8 С ных препаратов,шенных антитоксных и противосто мощью иппунсо качестве основь сорбента геля ат Однако этим способом не удается получить очищенные препараты антител против вируса клещевого энцефалита,1 ЬИзвестен также способ получения сывороточных препаратов против клешевого, энце -фалита из крови людей, включающий выделение иппуноглобулинов риваноловып методом220днако такой способ не обеспечивает по,- лучение высокоочишенных препаратов.Целью изобретения является повышение.удельной специфической,:активности препар а й Способ осуществляют следующим образом. Гель гидрата окиси ащоминия в количестве 3 мл смешивают в течение 5 пин со 150 пл антигена вируса клещевого энцефалита и выдерживают в течение 18 ч приотемпературе . 4 С при периодическом перепешивании. От избьггка антигена нппуносорбент освобождают центрифугированиеп(надвсадочную жидкость отбрасывают) и последующим трехкратным нропываниеп холодным боратнып буферным раствором с рН 9,0 в объеме, равном объему антигена (в данном примере 150 плж), Бентрифугирование проводят в рефрижераторной центрифуге при 4-8 С и 6000 об/пин в течение 10 пнн. Затем осуществляют сорбцию антител. Сырьем для получения препаратов ан607572 Составитель С. Малютина Техред, К. Гаврон Корректор С, Гарасиняк Редактор А. Бер Заказ 2689/1 Тираж 703 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо.делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тител являетси сыворотка доноров, содержащая антитела против вируса клешевогоэнцефалита в титре 1;40 и выше. Исходную сыворотку в количестве 50 мл смешивают с иммуносорбентом и инкубируют в те- бчение 18 ч при 4 С. Для освобождения отоизбытке сывороточных белков проводят че-тырехкратное промывание физиологическимраствором (рН 7,0-7,2) .в четырехкратномобъеме. Бентрифугирование проводят при 104-8 С и 6000 об/мин в течение 10 мин,о, Затем иммунсарбент, нагруженный антителами, разводят дистиллированной водой вобъеме, равном объему исходной сыворотки,рН в нем доводят до 11,0-11,1 с помощью 152 н ИаОН. Элюцию антител проводят наледяной бане при постоянном перемешиваниив течение 30 мин. После этого иммуносорбеат отделяют от элюата центрифугированием в течение 15 мин при 18000 об/мин, 2 ОрН элюата и иммуносорбента доводит до7,0-7,2.Нативные препараты антител (элюаты)обладают активностью 1:10-1:20 аъы . агглюткпрующих единиц при белке 40-50 мг/%Удельная активность 0,2-0,4 на единицубелка, Элюаты для лиофилизации разливаютпо 20 мл во флаконы емкостью 250 мл.Пиофилизацию проводят в аппаратах Юзефруа,замораживание при 50 С 18 ч, сушка - Эбв течение 30-32 ч, температура в началео о осуЬди - 42 С; в конце -26 - 28 С, вакуум 50-80 мк рт.ст,Высушенные препараты перед употреблени-,ем разводят в 2 мл физиологического раст-вора, При этом титр раствора 1:200 присодержании белка 0,5%,Использование предлагаемого способа получения антител человека против вируса клещевого энцефалита путем иммуносорбции и элюции на основе геля гидрата окиси щпоминия обеспечивает получение гомологичного препарата антител против вируса клеще-, вого энцефалита, обладающего высокой противовирусной активностью при низком содержании белка. Средняя удельная активность препарата 0,2-0,4 антигемагглютинируьщих единиц на 1 мг белка (удельная активность в 10-20 раз выше, чем в существующем гомологичномсывороточном препарате). Формула. изобретения Способ получения антител против вируса клешевого энцефалита, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что, с целью повышения удельной специфической активности препарата, сыворотку крови смешивают с иммуносорбентом, йа основе геля гидрата окиси алюминия, по лученную смесь инкубируют, отделяют бело ластные белки при температуре 2-8 С, а затем антитела элюируют дистнллированной водой прирН 11,0-11,1 и температуре 2-8 С,Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:1, Райхер И. И. Очищенные антитоксины, выделенные из противодифтерийных и противостолбнячных сывороток с помощью иммуносорбции, изучение перспективы практического применения, докт. диссерт. Пермь, 19732, Ж. "Вопросы вирусологий"," 1, 1972, с. 84.