Способ получения ингибиторов сахаразы

иц 1 еи т но. , ,О П Союз Советских Социалистических Республик(21) 1885529/28 М, Кл, С 120 13/1 01,0 осударственный комитетСовета Министров СССРоо делам изобретенийи открытийия описания 30.08.7 5) Дата опубликов Иностранцы тер Фроммер, Вальтер Пульс и Дельф(71) Заявител остранная фи(ФРГ) НГИБИТОРОВ САХАРА 54) СПОСОБ ПОЛУ е и мож рапевтнческих средств при ожирении, гиперлнпемии, диабете.Известен способ получения ингибиторов глюкозидаз (в том числе и ингибитора сахаразы) изфильтрата культуральной жидкости Астйорапа.сееп ЯЕ с последующим выделением целевого продукта 111.Однако такой способ не обеспечивает высокойактивности ингибировання сахаразы.10С целью повышения активности ингибированиясахаразы по предлагаемому способу вьщеленныйцелевой продукт подвергают гидролнзу, при этомгидролиз осуществляют водным раствором кисло.ты или Р-амилазой,15Превращение ингпбитора амилазы в ингибиторсахаразы осуществляют путем отщепления нетормозящих частиц молекулы (большей частью моно,ди. или трисахариды) из молекул ингибиторы Этоотщепление осуществляют ферментно . гидроли.тическим или химически - гидролнтическнм рас.щеплением, предпочтительно проводят гидролиз вкислой среде при высоких температурах. Для этого1 - 40%-ные растворы, предпочтительно 2 - 20%-ные,в сокоспособных ингибиторов в 0,15 М, предпоч гут быль. едства при терапевтичес липе мин (а ожирении, гнпер.бете, предиабете,иосклероз, ди кариесе,Дозировка: 100ко раз в день через 000 8 Е/г одни или несколь. перед и/или во время и/или сле еды,Изобретение относится кбыть применено в качестве те тительно 0,5 - 2 й, минеральных кислотах, предпочтительно НС и Нз 804: гидролизуют не более бч, предпочтительно не более 4 ч, при б 0 - 110 С, пред. почтительно при 80 - 100 С.Изолирование тормозящего,сахар азу компонента нз гндролизатов осуществляют предпочтительно посредством адсорбции на активном угле после предварительной нейтрализации гидролизата и последующей фракционнрующей десорбции инги. битора с угля водными спиртами или водным ацетоном. Если гидролизаты имеют очень темный цвет, их до адсорбции ингибитора, сахаразы на угле обесцвечивают активным углем при кислых значениях рН 1 - 3.Способность торможения лучших препаратов ннгибитора составляет 15000 8 Е/г,Гидролиз осуществляют также энзиматическн р амилазой.Ингибиторы мо использованы как576050 Составитель С, Малютина Техред И. Асталош Корректор Д. Мельниченко Редактор Л. Гончарова Заказ 2758/49 Тираж 541 Подписное Ц 11 ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открьпий 113035, Москва, Ж - 35, 1 аушская набд. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Умгород, ул. Проектная 4 Формы изготовлею 1 я; таблетки, драже, кап. сулы, раствор, суспензия, гранулы, жевательная резинка, зубная паста и как добавка к содержащим сахарозу пищевым и/или вкусовым продуктам.П р и м е р 1. 5 г ингибитора амилазы из актинопланаценового штамма ЯЕ 50 с 10 10 АЕ/г и 220 ЯЕ/г растворяют в 50 мл 0,05 М буфера из ацетата натрия с рН 4,5, добавляют 25 мг р-амилазы из ячменя и инкубируют при 35 С. По истечении Зч расщепление заканчюают, Инкуба. ционную смесь, размешивая, вкапывают непо. средственно в сухой спирт, белый хлопьевидный осадок отсасывают на путче, промывают этанолом и эфиром, каждым два раза и сущат в вакууме.Выход 2,5 г с 4,610" А 1 Е/г н 700 Я 1 Е/г, П р и м е р 2, 100 г ингибитора амилазы из штамма ЯЕ 50 разбавляют в 500 мл 2 й Нг ЯО 4 и гидролизуют 4 ч при 100 С, После охлаждения черно - коричневый раствор посредством 10 й КОН устанавливают рН 2 и для обесцвечивания 2 раза добавляют 4 г активного угля, каждый раз размешивают около 10 мин и отсасывают на путче. Уголь выкидывают и светло - желтый фильтрат нейтрализуют 10 М КОН (рН 6,6), Для адсорбции на угле активных в отношении торможения част 1 щ. добав. ляют 20 г активированного угля, После 10 мнн размешивания отсасывают на путче, и фильтрат еще раз адсорбируют 10 г активированного угля, Оста. ток угля объединяют, фильтрат выбрасывают. Объединенные остатки угля с целью удаления остаточных солей и глюкозы промывают на путче 2 л дистиллированной воды и 2 л 2,5 -ного этанола и затем 3 раза десорбируют 10 о-ным и затем 15 о.ным этанолом каждый раз 750 мл. Д/1 я де. сорбции размешивают каждьп 1 раз 10 мин,. отса. сывают на путче и добавляют свежее десорбционное средство. Соответствующие фильтраты из 10%.ной или 15% ной десорбции объединяют, в ротационном выпарителе сгущают приблизительно до 20 мл и лпофилизируют,Выход приблизительно 2 г 10 о ной фракции и1,2 г 15%-ной фракщ и. Специфическая активность 10% ной фракции9000 БЕ/г, 0)2 106 АЕ/г, активность 15%-ной фракции 15000 Я Е/г, 0,5 10 А Е/г.П р и м е р 3. 200 г изолированного изактинопланаценового штамма ЯЕ 82 ингибитора амилазы (6 106 АЕ/г, 160 Я 1 Е/г) растворяют в 10 мл 0,75 М НС 1. Исходный раствор имеет актив.ность 12010 АЕ/л при 3200 Я 1 Е/л, Этот раствор инкубируют в течение 30 мин при 100 С в водянойбане, затем охлаждают и испытывают, Содержание пнгибитора амилазы в полученном гидролизате составляет 8 106 А 1 Е/л, а ингибитора сахаразы - 21000 Я 1 Е/л.П р и м е р 4. 200 г изолированного изактинопланаценового штамма ЯВ 18 ингибитора амилазы (4 106 А 1 Е/г, 310 ЯЕ/г) растворяют в 10 мл 0,75 1 ч НС. Исходный раствор имеет активность 80 10 А 1 Е/л и 6200 Я 1 Е/л, Этот раствор инкубируют 30 мин при 100 С в водяной бане, о затем охлаждают и испытывают. Содержание ингибитора амилазы в полученном гидролизате составляет 1 О 10 А 1 Е/л, а ингибитора сахаразы 28000 Я 1 Е/л. Формула изобретения 1. Способ получения ингибиторов сахаразы путем выращивания штаммаАст ворапасеео ЯЕ 50,ЯЕ 82 или ЯВ 18 на питательной среде с последующим выделением целевого продукта, о т ли ча ющ и й ся тем, что, с целью повышения активностиингибирования сахаразы, выделенный целевойпродукт подвергают гидролизу.2, Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, чтогидролиз осуществляют водным растворомкислоты,3, Способ поп.1,отличающийся тем,чтогидролиз осуществляют р-амилазой,Источники информации, принятые во вниманиепрп экспертизе;1, Заявка ФРГ Р 2064092.0, 1970,