ZIP архив

Текст

т 11) 552972 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(23) ПриоритетОпубликовано 05.04,77. Бюллетень13Дата опубликования описания 26.04.77 осударственныи номите овета Министров СССР 53) УДК 615.361.3. И. Шварц, Р. И. Каратеева, О. И. Огарева , Б. Нестерчук, В. М, Шведова, Г, К, фроло оюзный научно-исследовательский институтнителей и гормональных препа 1) Заявитсль замеехнологиитов ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСУЛИ Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно, к получению препаратов антидиабетического действия.Известен способ получения инсулина путем водно-спиртовой экстракции поджелудочной железы с последующей сорбцией необезбелоченного экстракта на макропористых сульфокатионитах, промывкой спиртом, уксусно-аммонийным раствором, десорбцией соляно-аммонийным буферным раствором и выделением инсулина из элюатов известными приемами.Известен также способ получения путем водно-спиртовой экстракции поджелудочной железы, депротеинизации инсулинсодержащих экстрактов с последующим выделением целевого продукта.Однако известные способы не обеспечивают высокого выхода инсулина,Целью изобретения является повышение выхода инсулина.Это достигается тем, что полученный после депротеинизации водно-этанольный экстракт подвергают дополнительной депротеинизации при рН 3,6 - 4,2 и охлаждению, при этом дополнительную депротеинизацию инсулинсодержащих экстрактов осуществляют раствором серной кислоты, или едким натром, или аммиаком при температуре 0 - :+бС.Способ осуществляют следующим образом, Поджелудочную железу подвергают водно- спиртовой экстр акции известным способом,полученныи водно-спиртовои экстракт депротеинизируют, после чего проводят дополнительную депротеинизацию, заключающуюся в обработке предварительно депротеинизирован ных экстрактов раствором кислоты или щелочи при рН 3,6 - 4,2 (преимущественно 3,6 - 3,9) с одновременным охлаждением их до - 5 - :+10 С (преимущественно 0 - :+6 С),В результате дополнительной депротеиниза- О ции в экстрактах образуется осадок, которыйотделяют сепарированием или фильтрацией.Выделение инсулина из экстрактов, прошедших дополнительную депротеинизацию, можно проводить с помощью концентрирования 5 его в вакууме (до 1 - 2,0% содержания спирта) с последующим высаливанием инсулина- сырца или осаждением солями цинка, путем сорбции полученного экстракта на сульфокатнонитах с последующей десорбцией инсу- О лина-сырца и очисткой его известными методами. Получают кристаллический инсулин с высоким выходом 3500 - 4500 МЕ/кг.Способ поясняется следующими примерами.П р и м е р 1. К 5,2 л инсулинсодержащего 5 водно-этанольного экстракта с рН 2,8 - 3,1, полученного известным методом с применением ортофосфорной кислоты, прибавляют 55 мл 40%-ното раствора хлористого кальция, затем водным раствором аммиака или 20%-ным рас- О твором щелочи устанавливают рН 3,5 - 3,8.После отделения осадка в экстракте водным50 55 60 65 раствором аммиака или щелочи устанавливают рН 4,7 - 5,1. Снова отделяют осадок и полученный экстракт подкисляют 20%-ным раствором серной кислоты до рН 3,7 - 3,9 и охлаждают до 0 - ;+6 С. Через 2 - 3 час выделившийся осадок отделяют и экстракт пропускают через колонку 50;2 см, содержащую 150 гсульфокатионита КУ30/100 М, со скоростью250 мл/час/см. По окончании сорбции смолупромывают 0,45 л 70%-ного спирта, 0,5 л 0,2 Мацетатно-аммонийного раствора, доведенноголедяной уксусной кислотой до рН 5,1.Десорбцию со смолы проводят 0,2 М раствором хлористоо аммо, доведенного воднымаммиаком до рН 9,5 - 9,7 со скоростью30 мл/час/см.Элюат (150 мл) подкисляют 13 - 15%-нымраствором соляной кислоты до рН 2,5.Если элюат мутный, его фильтруют.К фильтрату прибавляют 45 мл ацетона иводным аммиаком устанавливают рН 4,2 - 4,5.Через час осадок удаляют фильтрованием,К фильтрату прибавляют 5 - 6 мл 10%-ногораствора уксуснокислого цинка и водным аммиаком устанавливают рН 5,9 - 6,0.Смесь выдерживают 12 - 20 час при 10 -15 С,Осадок цинк-инсулина отделяют центрифугированием.Кристаллизуют в водном растворе лимоннойкислоты, содержащем ацетон, и получают170 мг кристаллического инсулина с активностью 26,5 МЕ/мг, что в пересчете на 1 кг поджелудочной железы составляет 4505 МЕ.П р и и е р 2. 26 л экстракта, полученного идепротеинизирова нного хлористым кальциеми щелочью, как в примере 1, подкисляют20%-ным раствором серной кислоты до рН 3,5,упаривают в вакууме до содержания в немспирта 20 - 30%. Экстракт отделяют отвсплывшего жира декантацией,Вследствие концентрации экстракта за счетчастичного удаления спирта значение рН самопроизвольно устанавливается 2,5 - 3,0,Инсулинсодержащий водно-этанольный экстракт 20/о-ным раствором щелочи или водным аммиаком подщелачивают до рН 3,6 - 3,8и охлаждают до 0 - :+6 С. Через 2 - 3 час осадок отделяют, а экстракт пропускают черезсульфокатионит КУ30/100 М и далее, какописано в примере 1,Получают 800 мг кристаллического инсулина активностью 26 МЕ, что в пересчете на 1 кгподжелудочной железы составляет 4160 МЕ.П р и м е р 3. 5,2 л инсулинсодержащего водноэтанольного экстракта, полученного и обработанного хлористым кальцием, щелочью, кислотой и охлаждением, как описано в примере 1, концентрируют в вакууме до удаленияспирта до 0 - 2% при температуре 27 С.Нагревают до 42 С, охлаждают водой до18 - 20 С, отделяют жир, фильтруют через кизельгур и высаливают 2/о (к объему) хлористого натрия.Повторное высаливание 18% -ного хлорис 5 10 15 20 25 ЗО 35 40 45 4того натрия н дальнейшую очистку инсулина- сырца известными методами отделения проводят, как в примере 1.Получают 140 мг кристаллического инсулина с активностью 25 МЕ, что в пересчете на 1 кг поджелудочной железы составляет 3500 МЕ.Пример 4. Экстракт, полученный и обработанный хлористым кальцием, как в примере 1, подщелачивают до рН 3,9 - 4,2 и охлаждают до 0 - :+6 С. После отделения осадка раствор пропускают через сульфокатионит КУ30/100 М и далее, как в примере 2, получают 159 мг кристаллического инсулина активностью 25 МЕ, что в пересчете на 1 кг поджелудочной железы составляет 3975 МЕ.П р и м е р 5. К 5,2 л инсулинсодержащего водно-этанольного экстракта с рН 2,8 - 3,1, полученного известным способом с применением смеси серной и соляной кислот, водным раствором аммиака или 20%-ной щелочи устанавливают рН 6,5 - 7,6, прибавляют 10,4 мл 10%-ного раствора ацетата цинка. Осадок отделяют. В экстракте устанавливают рН 3,7 - 3,9, охлаждают до 0 - ;+6 С. Осадок отделяют с кизельгуром. Экстракт разбавляют дистиллированной водой (1: 1), снова охлаждают до 0: +6 С, липиды отделяют фильтрацией с кизельгуром. В надосадочной жидкости устанавливают рН 5,3 - 5,4 и на 1 л добавляют 20 мл/л 10/о -ного раствора ацетата цинка.Осадок цинк-инсулина отделяют, обезжиривают спирто-эфирной смесью, высушивают, затем подвергают высаливанию хлористым натрием и очистке, как описано в примере 3.Получают 146 мг кристаллического инсулина активностью 24 МЕ, что в пересчете на 1 кг поджелудочной железы составляет 3504 МЕ.Предлагаемый способ позволяет значительно повысить выход инсулина от 2500 - 3100 МЕ/кг до 3500 - 4500 МЕ/кг и получать стабильные (прозрачные) инсулинсодержащие экстракты, наиболее полно освобожденные от балластных примесей,Формула изобретения 1. Способ получения инсулина путем водно- спиртовой экстракции поджелудочной железы, депротеинизации инсулинсодержащих экстрактов с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода инсулина, полученный после депротеинизации экстракт подвергают дополнительной депротеинизации при рН 3,6 - 4,2 с одновременным охлаждением,2, Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительную депротеинизацию инсулин - содержащих экстрактов осуществляют при температуре 0 - :+6 С.3. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что дополнительную депротеинизацию инсулинсодержащих экстрактов осуществляют раствором серной кислоты, или едким натром, или аммиаком,

Смотреть

Заявка

2165298, 12.08.1975

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ТЕХНОЛОГИИ КРОВОЗАМЕНИТЕЛЕЙ И ГОРМОНАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

ШВАРЦ СОФЬЯ ИОСИФОВНА, КАРАТЕЕВА РИММА ИВАНОВНА, ОГАРЕВА ОЛЬГА ИВАНОВНА, ЗАМИХОВСКИЙ АЛЕКСАНДР БОРИСОВИЧ, НЕСТЕРЧУК ЕЛЕНА БОРИСОВНА, ШВЕДОВА ВАЛЕНТИНА МИХАЙЛОВНА, ФРОЛОВА ГАЛИНА КОРНЕЕВНА, ЦАРЕНКОВ ВАЛЕРИЙ МИНЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: A61K 35/39, A61K 38/28

Метки: инсулина

Опубликовано: 05.04.1977

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-552972-sposob-polucheniya-insulina.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения инсулина</a>

Похожие патенты