Способ дифференциальной диагностики ортомиксовирусных и парамиксовирусных болезней птиц

О П И С А Н И Е,11 539073ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советски) Социалистическв,Республик, 61) Дополнительное к авт. свид-ву.06.74 (21) 2031674,15 51) М. Кл,"- С 12 К 1,04А 61 В 10 00 22) Заявлено присоединением заявкиГосударственныи комите Совета Министров ССС ло делам изобретений 23) Приорите(53) УДК 616-07(088.8) Оп бликовац 5.12.76. Бюллетень46вация описания 29.12.76 крыта ата опуолик Авторыизобрете шя(71) Заявитель есоюзный научно-исследовательский институт вете вирусологии и микробиологии 54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИОРТОМИКСОВИРУСНЪХ И ПАРАМИКСОВИРУСНЫХВОЗБУДИТЕЛЕЙ БОЛЕЗНЕЙ ПТИЦ 2 тановлено 8 антииппа птиц, не исения новых вари Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Способ может быть использован при диагностике для идентификации возбудителей гриппа птиц (ортомиксовирус) от болезни Ньюкасла и Юкаипа (пара миксовирусы).Грипп птиц - одно из распространенных заболеваний, которое наносит значительный экономический ущерб птицехозяйствам всех стран мира. Особенностью возбудителя этой 10 болезни является гысокая антигенная изменчивость.К настоящему времени усгенных вариантов вируса грключеиа возможность появлацтов.Высокая антигеш 1 ая вариабельность вируса в значительной степени затрудняет идентификацию возбудителя принятыми в настоящее время методами, Дифференциальную диагцо стику приходится проводить главным образом с парамиксовирусами (вирусы болезней Ньюкасла и 10 каипа), так как клиническая картина и патологоанатомические изменения при орто- и парамиксовирусцых заболеваниях птиц 25 очень сходны. До сих пор диагноз ставят после выделения вируса в куриных эмбрионах и идентификации его в серологической реакции связывания комплемента 111. РСК - одна из самых сложных сецологических реакций. Для ЗО ее постановки требуются кроме испытуемого образца стандартные антигены - нормальный и специфический, стандартные сыворотки нормальная и специфическая, комплемент морской свинки, гемолизин, эритроциты барана и физиологический раствор, Реакцию ставят в два этапа: первый - вспомогательный опыт - подбор оптимальной концентрации компонентов реакции, второй - основной опыт - определение степени серологического родства испытуемого образца по отношению к стандартным компонентам реакции. Для постановки РСК холодным методом необходимо це менее двух дней после выделения вируса.Наиболее близким по технической сущности к предложенному способу является использование для диагностики ортомиксовирусных и парамиксовирусных болезней птиц диагностических препаратов, действие которых основано ца иммуцологическом родстве одной из диагностических сывороток с выделенным возбудителем, который выявляется посредством серологической реакции - реакции задержки гсмагглютинации (РЗГА) 2, Такой способ диагностики требует больших затрат времени и средств на его проведение. Кроме того, диагностические препараты, изготовленные для использования в РЗГА, имеют штаммовую специфичность и позволяют идентифицировать лишь изученпые серологические варианты539073 Гемагглютинирующи титр вируса Исслелуемьш птакй возоулителяобработанконтр)ль-Заключение НОГОазотистойкислотои НОГО Росток (грпп) 1:64 0 ортогииксовирус(:оставптсль А. Ллексеенои Релактор Т. с)рспкова Техрез М. Сезенов 1(орректор О, Тюрина Тираж 575 Заказ 2;)111 Изд. к.а а 54 Подписное Типография, пр. Сапунова, 2 возоудГСля, что снижает значешс серологи- ЧССи редЦИ 11 прИ ИДСНТИ 1)Ис 1 ЦИИ ВцруС 2 ГРцнна, ООЛс 1 ДВЮЦЕ 0 БЫСОКОИ с 1 ПТНГСН 1 СЙ В 2 - риабсльностью.Цель изобретс ия - повышение эффсктнв СТИ,1 Ис 1 ГПОСТЦКН - ДОС 1 Гс 1 СТ(.Я ТСМ, ТОвыделенному вирусу нрп ндлич;ш гсадглютиНпруасцей 2 тИБНОСТП СО НС ШиКЕ 1: 64 дабав;5 От в равных объемах 4 М;)аствор азотноис,юга нагрия и 0,1 М раствор ацстатного буфера, смесь инябируют в течение 1 ч пр Зс (.1,Осле чсГО ИРИ Устснав,енпи ПОлнОЙ пО- терн вирусом гемагглютпцирующсй активно- СТИ ВОЗОУД 1 ГСЛЬ ОТНОСЯТ К ОРТОМИСОВЕРУС 2:1, а при сохрднсни; Исход ой активости или незначительном сш)кении ее (в 2 - 4 раза) возбудитель опасят парамиксошрусам птиц.Способ может быть использован Б любой Ветершарно-бактериологической лаборатории н пазвал 5 Ст праВесги дифЧ)ерепцеациа вазбуднтелси в те ение 2 ч с ахентд выделеш;я Вируса независимо от серологичесой принадлежности варианта,Дпфрсре,циацшо вирусов проводят следуоцм образом.1 ооьем Бцруссодср)кащей суспензии, обла- ДВЮЩСЙ 2(ТИБЦОСТЬЮ В РСДКЦНЦ ГС)сЗГГЛОГИНасции (РГЛ) не ниже 1: 64, смсншвают с 0,5 обьемд 4 М раствора ХаХОя и 0,5 обьема 0,2 М ацстдтного буфера рН 4,35. Смесь в течениеч инкубируют при 37 С, после чего определяют остаточную ативность вирусов в РГсе Полная потеря ге)дгглютинпруоЦей активности или сохранене ее в пределах 1: 2 - 1: 4 свцдстельствуст о наличии ортомиксовируснай и 1 фскцие 1 сохрдиспис исхОднОЙ актиВНОстн или незначительное (Б 2 - 4 раза) снижеИе се - 0 наличии парамиксавир 1, са,.П р и м е р. На куриных эмбрионах из пятматериала выделены 4 штаммд Возбудителей болезней птиц, обладдощне Гсхягглатинирующей активностью. Необходимо установить, являются лц указанные возбудители штаммами ортомиксовпрусов илн парамш(совирусов.,Для пастдновки диагноза Б нробирк;1 вносиле по 0,0 мл Вируссадсржящси экстраэмариа- няльнОЙ жидкоеи (по 2 рооиркп, контрольнук) н опыгную, на яждый штамм). В пробирки с пробами вносили по 0,25 мл 4 М раствора ХдХОя в дистиллированной воде (276 г КаХО в 1 л раствора) и по 0,25 мл 0,1 М ацстдтнаго буфера рН 4,35 (для преготс)вления Оуферя 4ХВОИ и 17 )л ледяноЙ усуси)Й киссаты рдстьарень ь дистилспрОВап"ОЙ БОДР н Оан;нй ООьсм ДОВсдеи Бадай ДО 1 л) .В онтрольцыс пробирки вносили по 0,5 мл фзеОлогиссого раствора. Содержимое пробирок перемешивал:. :и пробирки помешали в ТврьОС 1 сгт Нрц 37 Пд 1 Ч, ПОСЛЕ 1 СГО ОцрЕДЕЛЯ,Ц сКТ.БНОСТЬ БИРУС 2 В П)ООДХ И Б КОНТРО- лях, ставя РГ.- с о,- ымц эриптрацитамп пег Ха,5 В тдблшс рвсдс:ы результаты едентифе- гции Выделенных возбудепелей .;етодом иодазлспи Ге.я ГГГ 1 отииируюиеи 21 сгивнастц дза ИСТОЙ 1:слатаЙ. Предлагаемы, метод Сеытан в лаооратарии на 80 шта.; мдх оромиксовирусов и пара мцксовирусов птиц, прошел комиссионнуа проверку во В 1-1 ИИВВИМ и уже нашел широкое применение (идентифицирую:цие растворы без указания состава и механизма действия введены в выпускаемый ВНИИВВИМ ЗО набор для дифференциалыой ДиапостииВируса болезни Ньюкасла и гшппа Гтиц. Ф ар.", ул а изобр стен ия З 5 Способ дифференциальной диагностики ортомиксовирусных и парамиксовирусных возбудтелси Оалсзнси птиц, БлючаюшнЙ Выделение Вирус; ега идснти)ИкацНа па Ге.;агглатппнрующсй ативности, о т л и ч а ю щ и Й с я Гек, чта, с цслью павы 1 цсния эффектиВнасте днанастии, к 1;ьдслннам) Б;русу ири налв Ч 1 И ГСс 2 ГГЛЮПНПРУ 0 ЦСЙ ЯсИБПОСТИ СГО ПЕ иижс 1: 64 добяв.яюз в равных обьемах 4 М раствор азотистокислого натрия и 0,1 М раст БО) сЦСТЯТНОГО ОУфЕГ 2 СМЕСЬ ИНКУОИ)УЮТ Всченнсч при 3"С, после чего при установиалнаи потери Вируса ГемагглОтпнир)ошей 2 гивнасти вазб)дитель Относя ( ОрГамисовирусам, а ири сохранении исходной 5) с,типасти пли пезначпс,ыОм спин(сниц ес(2 в 1 раза) всзбудцтель относятпарамик(авирусам птиц.1 сточниинРОРксцие, Ринятые ВО Бни)2 нс при экспертизе:55 .1 ссбоРДТОРца ДНДНОСТИа ГИРУСПЬХ И РИкстсюзных заболеваний под ред. 3. Леннетд и 11. Ш.шдта, М ИедтЦпна. 1974 г.,тр. 26 - 34 1 е: стр. 38 - 42 21.