Способ получения 2-замещенного-4(р)-гидроксициклопентан1, 4 диона

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАТЕаа а У Союз Советских Социалистических Республик3/О 23 ритет -Государстаеинма комитатСоаата Манастроа СССпо делам азобратониаи открытий(45) Дата опубликования описания 29.09.7) Авторы изобретения ИностранцыЛунг Тинг Чанг (Китай) и Кэрол Энн Терри (США Иностранная фирмаМайлз Лабораториз, Инк (США)(5 ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2-ЗАМЕЩЕННОГО(К)ГИДРОКСИЦИКЛОПЕНТАН,4-ДИОНА и 2-5 повышвютсно. я в ние относитс остветствен ласт биологии,Известен способ получения 2-замешенного( 3 ) -гидроксициклопентан,4-диона путем микробиологической трансформации 2- замешенного-пиклопентан,3,4-триона или 2-аамещенного-метоксициклопент-ен- -1,4-диона с помощью культуры класса ЛбсояПсе 1 ез на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные со ли, с последующим вьщеленнем целевого продукта. 0,1 50 естного способа являетцелевого продукта,ния выхода целевого про едостатком из ся невысокий в повыше пе ацией м конце рживая вю углевосубстрат 20 /час на лоддентраци6 авляяОю 1 При проведении процесса в ук ловиях конверсия микроорганизма инкубации и скорость конверсии с азвнных усствдии рата 25 укта предлагается трансфоить на среде с начальноглеводов 2-6% и рН 5 роцессе выращивания конпов 0,1-1% и рН 4-5 и дсреду со скоростью О,О1 л среды,П р и м е р 1, Для ннкубации микроорганизма и конверсии субстрата используют питательную среду, содержащую ( г/л воды):Цитрат натрия С К (ОН)(СООЯО) 3,0Ъ 4Дигидрофосфат калия КН РО 5,0 Нитрат аммония ЯН ЯО 2,0 Сульфат магния М(7 50 7 Н О 0,2 Хлорид кальция СО СЪ ГН ОДрожжевой экстрактКазаминокис лоты 5,0 Глюкоза 40,0 Для инокулирования 50 мл среды, помещенной в колбу Эрленмейера на 250 мл, используют одно кольцо поверхностного нароста с однонедельного солодового экстракта косого агара Эродо.ьспь ттнптзсЬеаШя.о Инокулирование проводят при 26-32 С и взбалтыввнии со скоростью 300 об/мин в течение 36 чвс. Затем полученную массу, содержащую 5% вещества, переливают в колбу фернбаха емкостью 2,8 л, содержащую 1 л указанной выше питательной среды, и ннкубируют 24 час. После образования Й 25%Заказ 4886/185 Тираж 551 Подписное БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 вещества в колбу Фернбаха в течение Зднейчерез каждые 8 час добавляют 400 мг 2-(6-карбометоксигексил) -пиклопентан, 3, 4-триона. В ходе конверсии с помощью 1 МКН РО, поддерживают рН среды 4,2-4,5.Концентрацию глюкозы поддерживают равной0,1-0,4% путем порционной загрузки глзкозы. В ходе конверсии периодически отбирают пробы, обрабатывают 0,5 объема этилацетата, суспендируют осадок в ацетоне ихроматографируют на силикагеле, элюируясистемой из 110 мл этилацетата, 50 млизооктана и 20 мл уксусной кислоты и проявляя в Уф-свете. Через 72 час послепервого добавления субстрата клетки отфильтроЮвывают, верхний слой сатурируют хлоридом натрия, подкисляют соляной кислотой до рН 2,0 иэкстрагируют 1 объемом этилацетата. Экстракт выпаривают досуха, перекристаллизовывают остаток из смеси этилацетат-петролейный эфиор и получыд 2,8 г продукта, т,епл. 80-86 С; б=- +20,3 (хлороФорм),П р и м е р 2, 9 и среды того же состава, что и в примере 1, помещают в ферментер объемом 14 л, инокулируют культу%рой 21 РОИЙВсзля ютт 1 пОс 1.8 ОЯ 0 выращенной за 24 час в колбе Фернбаха емкостью 2,8 л. Ферментацию проводят приоЗО С, аэрации 5 л/мин воздуха и взбалтывании со скоростью 300 об/мин. Для регулирования пенообразования используют антивспениватель. После инкубации в течение24 час в порошок через каждые 8 час в течение 72 час добавляют 4 г 2-(6-карбометоксигексил) -циклопентан, 3,4-триона. В ходе конверсии поддерживают рН среда 4,2-4,5 с помощью 1 М КЯ Щ а конЧтцентрацию глюкозы, равной 0,1-0,4% путем порционной загрузки глюкозы, Через 72 час после первого добавления 2-(6-карбометоксигексил) -пиклопентан, 3,4 гриона клетки отделяют и выделяют 2-(6 - -карбометоксигексил( В ) -гидроксициклопентан,4-дион. Выход после перекристаллизаууи 25,0 г т.пл. 89,5-91,0 С; Г Ы.1 = +19,1 (хлороформ). Формула изобретения Способ получения 2 замешенного-( 3 )-гидроксициклопентан,4-диона путем микробиологической трансформации 2-замешенного-циклопентан,3,4 гриона или 2-замешенного-метоксициклопент-ен4-диона с помощью культуры классаАасольсееэна среде, содержащей источники углерода,азота и минеральные соли, с последующимвыделением целевого продукта, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, трансформацию проводят на среде с начальной концентрацией углеводов 2-6% и рН 5-6, поддерживая в процессе выращивания концентрациюуглеводов 0,1-1% и рН 4-5 и добавляя субстрат в среду со скоростью 0,04-0,1 г/часна 1 л среды,