Способ исследования белковых фракций микроэлектрофорезом

146086 Класс 421 Зов СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУПодписная группа М 173 В. А. Вайчювенас СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ БЕЛКОВЪХ ФРАКЦИЙ МИКРОЭЛЕКТРОФОРЕЗОМЗаявлено 5 июня 1961 г. за М 733599/31.16 в Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРОпубликовано в сБюллетене изобретений Хе 7 за 1962 т. Предлагаемый способ исследования белковых фракций микроэлекгрофорезом является модификацией одного из методов электрофореза на опорной среде, например на агар-агаровом геле.Предлагаемый способ по сравнению с известными позволяет увеличить число одновременно проводимых исследований и уменьшить количество сыворотки на одно исследование, причем непрозрачный фон на фильтровальной бумаге заменяется прозрачным фоном агар-агара и время электрофореза уменьшается до 2 час. Особенность способа за ключается в том, что на стеклянной пластинке с агаром посредством гребенки со строго одинаковыми размерами зубьев делают ряды желобков, в которые градуированной пипеткой вносят различные исследуемые жидкости, подключают электрический ток и по окончании процесса обрабатывают пластинку известными способами,Исследование белковых фракций микроэлектрофорезом на агаровом геле может быть осуществлено на известном аппарате, схема которого изображена на фиг. 1, вид в плане; на фиг. 2 - тот же аппарат, разрез л-А на фиг. 1; на фиг, 3 - схема гребенки для выполнения желобков на поверхности агарового геля; на фиг. 4 - схема рабочего положения гребенки при выполнении желобков.На чистую, высушенную, с обезжиренной поверхностью стеклянную пластинку 1, находящуюся в горизонтальном положении, наливают подогретый до температуры 80 и охлажденный до 50 - 60 профильтрованный 1%-ный раствор агар-агара в буферном (веронало-мединаловом, баратном) растворе, рН которого равна 8,6, ионная сила 0,08 - О,1, а оптимальное количество - 80 мл раствора для получения толщины слоя в 1,75 мм Пластинку 1 с агар-агаром прикрывают кристаллизаторным колпаком и охлаждают при комнатной температуре в течение 1 час.После охлаждения берут гребенку 2 (из пластмассы), устанавливают ее зубьями, имеющими одинаковый размер, под углом 90 к поверх 3 о 14 б 08 бности слоя 3 агара и слегка нажимают до упора в стеклянную пластинку. Через 30 - 40 сек гребенку снимают и повторяют эту же операцию в следующем ряду слоя агара. Таким образом получают 16 желобков 4 в одном ряду, соответственно числу зубьев гребенки, а всего 48 желобков в трех рядах, причем каждый желобок имеет следующие размеры: глубину 1,75 мм, ширину 1 мм и длину 4,5 м,я; расстояние между рядами желобков составляет 75 ммПодготовленную к работе пластинку 1 с агаром устанавливают на столик 5 аппарата в горизонтальном положении. На края пластины (на агаровый гель) накладывают четырехслойные салфетки б из предварительно пропитанной буферным раствором фильтровальной бумаги, посредством которых агар-агаровый слой соединяется с буферным раствором 7, заполняющим кюветы 8, в которых за перегородками 9 находятся анодный электрод 10 и катодный электрод 11 В каждой кювете находится по 900 мл буферного раствора. Градуированной пипеткой в каждый желобок 4 вносят различные исследуемые жидкости, например сыворотку или плазму крови, по 0,0015 - 0,002 мл (оптимальное количество белка составляет 0,1 миллиграмма).После заполнения всех желобков 4 аппарат закрывают крышкой 12, снабженной по краям резиновой прокладкой для герметичности образуемой в аппарате камеры, подключают выравненный электрический ток и ведут электрофорез в течение 2 час при комнатной температуре (18 - 20"), По окончании процесса пластинку 1 отделяют от буферного раствора (после отключения тока салфетки 6 снимаются), извлекают ее из аппарата и обрабатывают обычными способами, Окраску электрофорсграмм производят известными красителями, используемыми для окрашивания на фильтровальной бумаге, Расшифровку электрофореграмм проводят на микрофотометрах типа МФили МФ.4. Таким образом можно одновременно проводить 48 опытов (исследований) на обычных аппаратах, предназначенных для электрофореза на фильтровальной бумагее.По заключению ордена Ленина Института гематологии и переливания крови предлагаемый способ может быть рекомендован для внедрения в практику биохимических исследованийПредмет изобретенияСпособ исследования белковых фракций микроэлектрофорезом на агаровом геле, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличения числа одновременных опытов, на стеклянной пластинке с агаром гребенкой со строго одинаковыми размерами зубьев делают ряды желобков, в которые градуированной пипеткой вносят различные исследуемые жидкости, подключают ток и по окончании процесса обрабатывают пластинку известными приемами.