Способ определения антигенов или антител

/13 но 26,0 12 К 1/О динени асударственныи номитетСовотв Министров СССРпо делам иэооретенийн аткрьинй),А. Хавк Г СОР химии Башкирского филиала сЗтдел биохимии иИ:иб 1 етоние Отнссптся к медиц 1 ц)е иможет быть исподь.ювчно для диагностиЧЕСКИХ, сапнтаРНОИГЕНИЧЕСКИХ И ИССЛС.Дона) О)1 Л.С:КНЯ ЦЕЛС и,Известен сносО 6 Онредс.пения антигс.пови)и антитс.), для че 1 О п 1)оизв 01 ят копьюнацию бакт .1)11 офага с помо 1 цью активирова)шл)х га)п онов или бифункциональных соединений, д также при использовании метода иммунной гемадсорбцип, конечный результат реакции определяк)т по литическим бляшкам, Образуюшил)ся при смешениичастиц сорбента с индикаторной культурой,С целью повышения чувствительностиреакции индикаторную культуру смешиваьют с реактивированным посредством обработки па)1 аином в присутствии растворадистеина и пц 1 атриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) фагом,И р и лт е р 1, . Отмытые.формалинизированные эритроциты барана суспензидьрук)т в кроличьей антиэритроцитарной сы-воротке до концентрации 1,35%, Все разведения готовят на растворе, содержавшем1% хлористого натрия, О, 15% ЭДТА и доведенном бурой до р 11 7, 2 (далее иаэс)- куется разбавителем),1 Осле инкубациив течение 30 мнн при 37"С эритроцитыОтмыва)от трижды разбавителел) приОООО Об/ляин в течение 20 сек. Затемэритроциты обрабатывают в тех же соотношениях и нри том же режим ) отмывки;ОслинОЙ сл)вОроткой 1 Цютив глоб)ул 191 ОВкролика в разведении 1:10, кроличьей сывороткой против фага Т 2 в разведении1:10, фаголизатом с титром 10 бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл, Адсорбированный фаг реактивируют добавле-нием к отмытому осадку 1 мл раствора,содержавшего 1% ттапаина 0,1, М двузамещенного фосфата калия, О, 03 М солянокислого цистеина и 0,005 М ЭДТА;рН 7,0, После ннкубации смеси в течение 30 мин при 37 С 0,1 мл реактивнчо рованного фага смешивают с 0,9 мл 4 часовой культуры. Эц 1 ернхия кслп Б выдер.живают 10 мин при комнатной чемпсратуре и по 0,02 мл индикаторной смесинаносят на подсушенный слой Мясо-пепрб гойного агара в виде зоны диаме 1 ром 15518518 а и э о б р е т е н и м ределения антигеновиммобилизации одногореакции на иммуносорей смешанной иммуин посо ли анизсъ тител и омпоненто бенй адп Составитель С. Малютина дактор А, Бер Техрец М, Ликовнч Корректор Т, КравченсЗаказ 2250/235 ЦНИИПИ Госуд 5 1 Подписное комитета Совета Министров зобретений и открытий Ж, Раушская абд. 4/5 Тиражрственно о делам Москва,Филиал ППП Патент", г, Ужгород, ул, Проектная,20 мм, Редультат учитывают после выдерживания.чацек в течение ночи при 37 С.еакция СИАРФ выявляет антитела цви разведении гемолитической сь:воротм ц : 16000 (3, б 10 БОЕ в опытном элюате, менее 102 в контрольном), в то время как реакция геммагглютинации была полржнгельной в разведении 1:1000. Гаким образом, СИАРФ может быть ис-. пользована для обнаружения противоклеточных антител.П р и м е р 2, Фибрин из крови ло шади коньюгирует с диазотированной иаминобенэойной кислотой (АСБ), Коньюгат смешивают с сефадексом Г(мелкий) в соотношении 1: 9 и загружают и колонки диаметром 5 и высотой 15 мм. Антитела сорбируют иэ сыворотки кроликаиммунизированного коньюгатом Г 1 АББСА. (бычий сывороточный альбумин) с помощью колоночной техники. ПоследоваДанные, приведенные в таблице, свидетельствуют о возможности использования СИАРФ для обнаружения противобелковых антител. тельность операций, состав разбавителя и реагентов аналогичны примеру 1.Реакция СИАРФ выявляет антителапри разведении айтисывороткМ 1:1000 (4,110 БОБ в опытном эщоате, 7,5 10 в контрольном), в то время как ре ф, 4акция пассивной гемагглютинации была положительна в разведении 1:80, Таким образом, СИАРФ может быть использована для обнаружения противогаптеных антител,П р и м е р 3. Бычий сывороточ.ный альбумин (БСА) коньюгируют с се 5фадексом Г(сверхмелким) с помощью сернокислого эфира бета-оксиэтилсульфаниланилина по известному способу. Антитела сорбируют из кроличьей антиАБЕСА сыворотки с определением по предлагаемому способу (пример 2), Данные представлены в таблице. сорбщей бактериофага, учетом конечного результатареакции по литическим блякам, образующимся при смешении фогас шдикаторной культурой, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности реакции, индикаторную культуру смешивают с рсактврованным посредством обработки папашомв присутствии раствора цистеина динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты фагом,