Способ выделения кислой фосфатазы

"ЗЬ 2щОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН Ия Союз Советских Социалистических Республикоединепием з осударственнын комнте зиопптет1 б тоао авета Министров СССРпо делам изобретений 05 02 76 я о 1-тете:;ь ,о 5 3) УЗ,К 577,15.07(088 8) и открытии та опубликования описания 30.07.76. Я, Скуцнадзиия 1) Заявитель Латвийс Знамен реаксий филиал Всесоюзног и научно-исследователь щов и особо чистых хи 54) С 11 ОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КИСЛОЙ с ОСФА 1 АЗ Изооретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу выделения кислой фосфатазы, применяемои в научно-,исследовательской работе,и в клинической биохимии.Известен способ,выделепня кислой фосфатазы из мицелия плесневых грибов Лзрегя 11 цз путем экст 1 ракции и осаждения фермента из полученного экстракта.С целью расширения сырьевой базы для получения высокоактивной кислой фасфатазы с павышенгной активностью предложено выделение фосфатазы осуществлять из плесневых грибов, отсносящихся к виду Азрегр- цз 1 еггецз. При этом из плесневых грибов вида Азрего 1 цз 1 еггецз,используют продуценты итаконовой,кислоты. Спосоо заключается в следующем,Мицелий отделяют от питательной среды, размельчают, экстрагируют водой в интервалах рН 4 - 7, при этом отношение мицелия к экстрагенту равно 1: 4. Осаждение кислой фосфатазы проводят одним из осадителей: сернакислым аммонием в пределах насыщения 50 - 80%, метанолом, этанолам, пропанолом при 50 - 70% концентрации.Полученный осадок центрифугируют при 0 - 5 С. Г 1 ри осаждении сернокислым аммо,нием проводят диализ с последующей лиоо ордена 1 рудового Красно ского института химически мических веществ ИРЕА фильной сушкой; при осаждении спиртами осадок лиофилизируют.Применение микроорганизмов рода Азрегрцз 1 еггецз в качестве продуцента кис лой фосфатазы позволяет использовать отходы итаконозой кислоты для промышленного производства кислой фосфатазы в широких масштабах на легкодоступном сырье нз микрос,рганизмов.10 Пр и м е р 1. 0,5 кг 13-дневного мццелияотделяют от гитательной среды, промывают водой. Мицелцй высушивают и обрабатывают два раза 10 л холодного ацетона (5 С).Ацетон отделяют, мицелий высушивают в те чение 1 час. Мицелий гомогенизируют и проводят экстракцию с водой (рН 6,0) в течение 1 час при 5 С. Фракцианированно осаждают белок сернокислым амманием.П р и м е р 2. 0,4 кг мицелия в конце 20 цикла брожения итаконавой кислоты отделяют от культуральной жидкости и размельчают. Экстрагируют в течение 1 час прп комнатной температуре (25 С) с водой. Мицелпй отделяют и белок осаждают сернокис лым аммонием при насыщении 50 - 80%нь м. Диализируют и лиофилизируют.В го ход - 0,15 г, активность - 1,5 ед/ягпренарата, 3,6 ед/мг белка.П р и м е р 3, 0,4 кг 12-дневного мицелия ЭО отделяют от питательной среды,и размельчаФормула изобретения Состазитель М, Ларина Техред Е. Подурушина Редактор Л. Гончарова 1(орректор В. Гутман Заказ 715/898 Изд.300 Тираж 551 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4,5Тип. Харьк. фил. пред. Патент ют. Экстракцию проводят при 5 С в течение 1 час в, 0,1 М фосфатном буфере 1 рН 7,8). Твердую фазу отделяют, и оглох с" аждают насыщенным растворам до 80% сернокислым аммонием. Диализируют и лиофилизируют, 5Выход - 0,20 г, актввность - 3,6 ед/мг препарата, 6,5 ед/мг белка.П р и м е р 4. 0,5 кг 8-дневного мицелия отделяот от культуральной жидкости и размельчаот. Экстрагируют при 5 С 1 чае в 10 фосфаггном буфере 11 М), рН 7,5 и осаждают белок этиловым спиртом - 50%,и 80%, Осадок лиофилизируют.Выход -- 0,2 г, активность - 1,9 ед/лсг препарата, 3,0 ед/лг белка, 15П р и м е р 5. 0,6 кг 4-дневного мицелия Осделяют от питательной среды, промывают два раза водой, а затем деминерализованной водой и гомогенизируют. Экстракция происходит при 5 С в течение 1 час в воде, под численной,до рН 2,5, и осаждение беляка ведут при насыщении сернэкислым аммонием до 50% и 80%. Диализируют и лиофилизирую т.В ы ход - 0,25 г, а кти в ность - 1,5 ед/мг 25 препяоата, 2,5 ед/иг белка. Пр,игм е р 6. 0,5 кг 10-дневного мицелия отделяют от питательной среды и гомогенизируюг. Зкстракцию проводят в деминерализовянной воде при рН 6,0 и 5 С в течение 1 час, После экстракции доводят рН экстракта до 5,0 1 н 1 ЧЯОН. Белок осаждают до 80% насыщения сухим сернокислым аммонием.Диализируют и лиофилизируют,Выход - 0,15 г, активность - 2,4 ед/лг препарата, 4,0 ед/мг белка. 1. Способ выделения кислой фосфатазь 1 из мицелпя плесневых грибов Аврегр 11 цв путем экстракции и Ося 2 кдения фермента из полученного экстракта, О т л и ч я 10 щ и й с я тем, что, с целью расширения сырьевой базы, выделение фосфатазы осуществляют из глееневых грибов, относящихся к виду Аврегр 11 цв 1 еггецв.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из,плесневых грибов вида Азрего 11 цз 1 еггецв иопользуют продуценты итаконовой кислоты.